葎草花粉变应原Humj1的重组表达、纯化及鉴定

通过载体构建、原核表达和纯化葎草花粉主要变应原Humj1,获得具有免疫活性的葎草变应原Humj1重组蛋白。经密码子优化,合成葎草Humj1基因,设计含有酶切位点的引物,将PCR扩增产物与pGEM-T载体连接,构建克隆载体,获得的目的片段与pET-28a表达载体连接,成功构建了pET-28a-Humj1原核表达载体,转化到大肠杆菌BL21宿主菌中得到高效表达,并通过Ni-NTA亲和层析法纯化获得融合蛋白。对表达蛋白的生物信息学分析,测定其为亲水性蛋白,有较强的抗原性,主要以无规则卷曲结构为主。采用Western blotting免疫印迹法研究证明重组蛋白能与葎草花粉过敏患者血清结合,具有免疫活性,对将来研制葎草抗原的单克隆抗体以及脱敏疫苗的制备具有重要的临床意义。