基于数据挖掘的张仲景治疗心系疾病用药规律分析

目的分析《伤寒论》及《金匮要略》中治疗心系疾病的方剂,探讨张仲景治疗心系疾病的用药规律。方法使用Excel 2016将符合标准的方剂建立数据库,对药物药性、药味、药效药物分类等进行频数分析,以IBM SPSS Modeler 18.0、IBM SPSS Statistics Version 26.0行关联度及聚类分析。结果该研究共纳入51首方剂,涉及中药49味,其中高频使用的药物为甘草、桂枝、生姜等;得到关联规则20条,其中二项关联规则3条,如“生姜、大枣”三项关联规则14条,如“生姜、人参+大枣”、四项关联规则3条,如“甘草、大枣+生姜+桂枝”;聚类分析得到9组,其中有4个单味药物组,如“瓜蒌”“芍药”等;5个药对聚合组,如“半夏+黄芩”“茯苓+白术”等;网络链接关系网状图可见网络链接关系较强的有“桂枝-甘草”“生姜-大枣”等;高频药对中使用频率最高的药对为“桂枝-甘草”。结论张仲景治疗心系疾病多注重温通心阳、调理气机、健脾补中、调和营卫。

苓桂术甘汤对急性心肌梗死后大鼠肠黏膜屏障损伤的保护作用研究

目的观察苓桂术甘汤对急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)后大鼠肠道黏膜屏障损伤的保护作用。方法采用冠状动脉结扎法复制AMI大鼠模型,将模型大鼠随机分别为模型组,苓桂术甘汤低剂量(2.1 g/kg)、中剂量(4.2 g/kg)、高剂量(8.4 g/kg)组,另设假手术组,连续处理4周,采用苏木精-伊红染色法观察心脏和回肠组织病理学变化,ELISA法检测D-乳酸、脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)含量,Western blot法和RT-PCR法检测回肠组织闭合蛋白(Occludin)、带状闭合蛋白(zonula occludens-1,ZO-1)及其mRNA表达水平。结果与假手术组比较,模型组大鼠心脏出现明显的心肌损伤及炎症细胞浸润,回肠组织发生肠黏膜脱落,绒毛和腺体稀疏,炎症细胞浸润等病理学变化,血浆D-乳酸和LPS含量升高,回肠组织Occludin和ZO-1蛋白及mRNA表达水平下调,回肠组织TNF-α、IL-6、IL-1β及心脏组织TNF-α含量增加(P<0.05);与模型组比较,苓桂术甘汤各剂量组均可改善AMI后大鼠心肌和肠道组织损伤,降低血浆D-乳酸和LPS含量,上调肠组织Occludin和ZO-1蛋白及其mRNA表达水平,降低回肠组织TNF-α、IL-6、IL-1β及心脏组织TNF-α的含量(P<0.05)。结论苓桂术甘汤改善AMI后大鼠肠黏膜屏障的损伤与调节肠道通透性、降低肠道炎症反应有关。

加味小陷胸汤干预Wnt/β-catenin信号通路抑制人胃癌MGC803细胞上皮间质转化

目的:研究加味小陷胸汤对人胃癌MGC803细胞上皮间质转化(EMT)抑制作用及与分泌型糖蛋白Wnt/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)通路关系。方法:采用人胃癌MGC803细胞悬液种植法构建BALB/c裸鼠皮下异位移植性肿瘤动物模型。造模成功后随机分为模型组、加味小陷胸汤低、中、高剂量组(16.0,32.0,64.0 g·kg^(-1)),卡培他滨组(400 mg·kg^(-1)),每组8只,灌胃给药,每日1次,连续给药28 d,其中卡培他滨组给2周停1周。观察裸鼠一般状态、体质量,测量移植瘤大小,处死后称质量并计算抑瘤率;苏木素-伊红(HE)染色法观察移植瘤组织病理学变化;用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR),蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Wnt1,β-catenin的基因和蛋白表达水平及Western blot检测基质金属蛋白酶-9(MMP-9),血管内皮生长因子(VEGF),N-钙黏蛋白(N-cadherin),E-钙黏蛋白(E-cadherin),波形蛋白(Vimentin),锌指蛋白(Snail)蛋白表达水平;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测环氧合酶2(COX2),前列腺素E;(PGE;)的表达水平。结果:各组移植瘤体积随时间呈现不同的增长趋势,模型组增长趋势最为明显,与模型组比较,加味小陷胸汤低、中、高剂量组、卡培他滨组瘤体积呈现不同程度的生长抑制、增长趋势降低,且随时间延长作用明显,给药7,14,21,28 d加味小陷胸汤低、高剂量组、卡培他滨组移植瘤体积明显降低(P<0.05,P<0.01),给药14,21,28 d加味小陷胸汤中剂量组移植瘤体积显著降低(P<0.01)。与模型组比较,给药7,14,21,28 d,加味小陷胸汤高剂量组、卡培他滨组裸鼠移植瘤相对肿瘤体积显著降低(P<0.01),给药14,21,28 d,加味小陷胸汤低、中剂量组移植瘤相对肿瘤体积明显降低(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,加味小陷胸汤低、中、高剂量组、卡培他滨组移植瘤抑瘤率显著升高(P<0.01)。与模型组比较,加味小陷胸汤中低、中、高剂量组、卡培他滨组均能下调瘤组织Wnt1,β-catenin m RNA和蛋白的表达(P<0.05,P<0.01)及MMP-9,VEGF,N-cadherin,Vimentin,Snail的蛋白表达(P<0.05,P<0.01),上调E-cadherin蛋白的表达(P<0.05,P<0.01);降低COX;,PGE;含量(P<0.05,P<0.01)。结论:加味小陷胸汤对人胃癌MGC803细胞移植瘤EMT具有抑制作用,其机制可能与Wnt/β-catenin通路有关。

基于分子对接探讨白术内酯Ⅲ通过ROS/GRP78/caspase-12信号通路减轻H9c2细胞凋亡的作用机制

该研究旨在探究白术内酯Ⅲ(atractylenolideⅢ,ATL-Ⅲ)对过氧化氢(HO)诱导的心肌细胞H9c2内质网应激损伤和细胞凋亡的影响,以及对活性氧(ROS)/葡萄糖调节蛋白78(GRP78)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12(caspase-12)信号通路的调控作用。采用分子对接技术检测ATL-Ⅲ与内质网应激关键蛋白GRP78的结合度,结果显示ATL-Ⅲ与GRP78有良好的结合活性,且效果优于其特异性抑制剂。基于此,建立HO(100μmol·L^(-1))诱导的心肌细胞H9c2内质网应激损伤模型,设空白组、模型组、ATL-Ⅲ(15、30、60μmol·L^(-1))组,分别用Hoechst/PI双染色法和流式细胞术检测细胞凋亡;采用比色法检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)和乳酸脱氢酶(LDH)水平;分别用荧光探针DCFH-DA、Flou-4检测细胞ROS水平和胞质钙离子(Ca)浓度;用Western blot法检测细胞GRP78、caspase-12、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的蛋白表达;用RT-qPCR法检测细胞GRP78、caspase-12 mRNA的表达水平;再分别用N-乙酰半胱氨酸(NAC)及4-苯基丁酸(4-PBA)抑制ROS和GRP78,观察ATL-Ⅲ对HO诱导的心肌细胞内质网应激损伤及细胞保护作用机制。结果显示ATL-Ⅲ(15、30、60μmol·L^(-1))均能显著降低心肌细胞凋亡率和ROS、MDA、LDH水平(P<0.01),提高SOD活性(P<0.01),下调GRP78、caspase-12、caspase-3蛋白和GRP78、caspase-12 mRNA水平(P<0.05);加入NAC后,细胞凋亡率、ROS、MDA、GRP78、caspase-12、caspase-3水平显著降低(P<0.01),SOD水平显著升高(P<0.01);加入4-PBA后细胞凋亡率、GRP78、caspase-12、caspase-3、Ca浓度显著降低(P<0.01);使用抑制剂后结果与ATL-Ⅲ作用一致。综上,ATL-Ⅲ可调控ROS/GRP78/caspase-12信号通路抑制HO诱导的心肌细胞H9c2内质网应激损伤和细胞凋亡,保护心肌细胞。