芥子气经腹腔和气管致大鼠急性肺损伤细胞凋亡的变化

目的经腹腔和气管建立大鼠芥子气(SM)急性肺损伤动物模型,比较两种大鼠急性肺损伤模型细胞凋亡的差异。方法选取Sprague Dawley大鼠136只,随机分为5组,正常对照组8只,其他4个组为腹腔SM组、腹腔丙二醇对照组、气管SM组、气管丙二醇对照组,每组32只。腹腔SM组腹腔内注入稀释的SM0.1 ml(0.96 LD50=8 mg/kg),气管SM组气管内注入稀释的SM 0.1 ml(0.98 LD50=2 mg/kg),正常对照组未做任何处理。采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的d UTP缺口末端标记测定法(TUNEL)染色和免疫组织化学法及电镜观察,判断细胞凋亡情况。结果 1腹腔SM组各时间段肺泡间隔TUNEL染色阳性细胞表达率较气管SM组增多(P<0.05)。2腹腔SM组各时间段肺泡间隔凋亡蛋白Bax阳性表达率较气管SM组升高(P<0.05);腹腔SM组各时间段肺泡间隔凋亡蛋白Bcl-2阳性表达率较气管SM组降低(P<0.05)。3腹腔SM组各时间段肺泡间隔凋亡蛋白酶Caspase-3、Caspase-9阳性表达率较气管SM组增多(P<0.05)。4电镜显示,染毒72 h,腹腔SM组和气管SM组Ⅰ型和Ⅱ型肺泡上皮凋亡细胞形态特征为上皮细胞膜附着的微绒毛断裂缺失,排列紊乱;线粒体嵴模糊,粗面内质网表面附着的核糖体脱离,并游离于细胞质中。结论 SM经腹腔和气管染毒致大鼠急性肺损伤,通过内源性通道引发细胞凋亡调节异常,SM经腹腔染毒大鼠各项细胞凋亡指标比经气管明显升高,推测可能与SM腹膜腔的快速吸收有关。

芥子气经腹腔和气管致大鼠急性肺损伤炎性反应的比较研究

目的经腹腔和气管建立大鼠芥子气(SM)肺损伤的动物模型,比较两种大鼠急性肺损伤模型炎性反应的差异。方法选取Sprague Dawley大鼠136只,分为5组,正常对照组8只,其他4个组(腹腔SM组、腹腔丙二醇对照组、气管SM组、气管丙二醇对照组)每组32只。腹腔SM组腹腔内注入稀释的SM 0.1mL(0.96LD50=8mg/kg),气管SM组气管内注入稀释的SM 0.1mL(0.98LD50=2mg/kg),正常对照组不做任何处理。ELISA法检测支气管肺泡灌洗液和血液标本,HE染色和免疫组织化学判断炎性反应情况。结果腹腔SM组各时间段支气管肺泡灌洗液蛋白含量和细胞计数与气管SM组相比显著升高(P<0.05);腹腔SM组各时间段血清TNF-α、IL-1β、IL-6与气管SM组相比显著升高(P<0.05);腹腔SM组各时间段肺泡间隔T、B淋巴细胞和巨噬细胞阳性表达率与气管SM组相比显著增加(P<0.05)。结论大鼠在SM LD50相似的情况下,腹腔SM组支气管肺泡灌洗液、肺泡间隔及血清炎性反应指标明显高于气管SM组。

门静脉高压症脾大部切除后残脾基质金属蛋白酶及其抑制剂的变化

目的检测门静脉高压症脾大部切除后残脾组织和血清基质金属蛋白酶及其抑制剂的表达和水平,探讨脾纤维化的分子机制及保脾术的临床价值。方法选取门静脉高压脾肿大患者13例。术中切取脾组织为巨脾组,术后8年穿刺获取脾组织为残脾组,设外伤性脾破裂患者13例为对照组。采用免疫组织化学法、实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)及酶联免疫吸附测定(ELISA)检测脾脏组织和血清基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9、组织金属蛋白酶抑制物TIMP-1、TIMP-2的表达和水平。结果 3组脾组织中,MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2蛋白阳性表达主要分布在巨噬细胞内。残脾组和巨脾组脾组织MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2蛋白阳性表达率和基因表达与对照组比较,均差异有统计学意义(P<0.05),残脾组和巨脾组升高;残脾组和巨脾组之间比较则差异无统计学意义(P>0.05)。残脾组和巨脾组血清MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2水平与对照组比较,均差异有统计学意义(P<0.05),残脾组和巨脾组升高;残脾组和巨脾组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论门静脉高压症脾肿大患者脾大部切除术后残脾组织MMP-2、MMP-9、TIMP-1及TIMP-2蛋白和基因表达增加,血清蛋白水平升高,提示残脾组织基质金属蛋白酶和组织金属蛋白酶抑制物代谢失调。

芥子气经腹腔和气管致大鼠急性肺损伤纤维化指标变化

目的经腹腔和气管复制大鼠芥子气(SM)急性肺损伤动物模型,比较2种大鼠急性肺损伤模型肺纤维化指标的差异。方法选取Sprague Dawley大鼠136只,随机分为5组。腹腔SM组腹腔内注入稀释的SM 0.1 ml(0.96 LD50=8 mg/kg),气管SM组气管内注入稀释的SM 0.1 ml(0.98 LD50=2 mg/kg),腹腔和气管丙二醇组分别腹腔和气管内注入丙二醇0.1 ml,正常对照组不做任何处理。采用Masson染色和免疫组织化学,判断肺纤维化指标变化。结果 1光镜下见72 h肺泡间隔被染成绿色的胶原纤维增多;2腹腔SM组大鼠肺泡间隔各时间段基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9、基质金属蛋白酶组织抑制剂TIMP-1、TIMP-2蛋白阳性表达率分别与气管SM组比较升高(P<0.05);3腹腔SM组大鼠肺泡间隔各时间段肺泡间隔Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原蛋白阳性表达率分别与气管SM组比较升高(P<0.05);4腹腔SM组大鼠肺泡间隔各时间段肺泡间隔转化生长因子(TGF-β1)、母亲DPP同源物7(Smad7)蛋白阳性表达率分别与气管SM组比较升高(P<0.05)。结论大鼠在经腹腔和气管SM LD50浓度相似的情况下,经腹腔途径肺纤维化指标与经气管比较升高,提示SM经腹腔途径更容易诱导肺纤维化。

曲张大隐静脉源性血管平滑肌细胞表型与功能的变化

目的:探讨曲张大隐静脉源性血管平滑肌细胞(VSMCs)表型与功能的变化。方法:收集13例曲张大隐静脉(曲张组)与15例正常大隐静脉(正常组)标本,分离和培养两组标本中的VSMCs。检测两组VSMCs的增殖、迁移、黏附、衰老与骨架蛋白表达,以及凋亡相关因子与细胞外基质代谢相关因子的表达。结果:与正常组VSMCs比较,曲张组VSMCs骨架蛋白F-actin表达增加;增殖能力与迁移、黏附、衰老细胞数均明显增加(均P<0.05);促凋亡因子Bas与凋亡执行因子caspase-3的mRNA、蛋白表达明显降低,而凋亡抑制因子Bcl-2的mRNA、蛋白表达明显升高(均P<0.05);基质金属蛋白酶(MMP-2、MMP-9)与基质金属蛋白酶抑制物(TIMP-1、TIMP-1)的mRNA、蛋白表达均明显升高(均P<0.05)。结论:曲张大隐静脉源性VSMCs有明显去分化现象,其增殖和合成能力增强,VSMCs表型和功能的异常可能是静脉曲张发病机制之一。

芥子气经腹腔和气管致大鼠ALI模型氧化应激反应的机制

目的经腹腔和气管建立大鼠芥子气（sulfur mustard，SM）ALI动物模型，比较2种大鼠ALI模型氧化应激反应的差异。方法选取SpragueDawley大鼠136只，随机分为5组，正常对照组8只，其他4个组（腹腔SM组、腹腔丙二醇组、气管SM组、气管丙二醇组）每组32只。腹腔SM组腹腔内注入稀释的SM0．1ml（0．96LD50=8mg／kg），气管SM组气管内注入稀释的SM0．1ml（0．98LD50=2mg／kg），正常对照组不做任何处理。采用酶联免疫吸附试验和免疫组化，判断氧化应激情况。结果腹腔SM组各时间段BALF中乳酸脱氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶水平均高于气管SM组（P值均〈0．05）。腹腔SM组各时间段血清γ-谷氨酰转肽酶、硫代巴比妥酸反应产物水平均高于气管SM组（P值均〈0．05）。腹腔SM组大鼠肺组织各时间段肺泡间隔8=羟基脱氧鸟苷阳性细胞表达率、红系衍生的核因子2相关因子2和血红素氧合酶1蛋白阳性表达率均高于气管SM组（P值均〈0．05）。结论大鼠在经腹腔和气管SM浓度相似的情况下，经腹腔途径肺氧化应激指标与经气管相比显著升高，推测可能与腹腔对SM的快速吸收有关。