基于TaqMan探针的双重荧光定量PCR方法检测海产品中的副溶血弧菌

目的建立海产品中副溶血弧菌检测的双重荧光定量PCR体系。方法针对副溶血弧菌种特异性基因tlh和tdh设计引物和TaqMan探针,建立双重荧光定量PCR体系,进行特异性与敏感性研究;利用该体系检测海产品中的副溶血弧菌。结果副溶血弧菌可得到特异性扩增,而其它与副溶血弧菌共存于海产品中的细菌均未见扩增曲线。副溶血弧菌与其它细菌的混合DNA检测表明,其它细菌基因组的存在时并不干扰副溶血弧菌检测。副溶血弧菌典型菌株FJ14和BJ97的敏感性试验显示,该体系的最低检测DNA浓度分别为49.8pg与77.8pg,最低检测细菌浓度为56CFU/mL和371CFU/mL。对舟山菜市场采集的50份样本检测表明,32份为tlh基因阳性,3份为tdh基因阳性,与传统方法的检测结果相同。结论与传统检测方法相比,副溶血弧菌的双重荧光定量PCR检测方法快速准确,结果直观。

水产品中添加剂多聚磷酸盐抑菌效果的研究

目的:分析多聚磷酸盐中主要抑菌成分,并找出临界抑菌浓度。方法:利用微生物法,用pH值分别为6.0、7.2、8.0的检测琼脂研究正磷酸盐、三聚磷酸盐、焦磷酸盐和三偏磷酸盐对枯草芽孢杆菌和滕黄微球菌的抑菌作用。结果:三聚磷酸盐和焦磷酸盐是影响抑菌效果的主要因素,其引起抑菌剂阳性的临界质量浓度分别为0.2g/100mL和0.2g/100mL,用P2O5计分别为1157.56mg/kg和1601.43mg/kg。通过对三聚磷酸盐和焦磷酸盐进行两因素三水平正交试验结果分析,发现两者互存时,只要有一种质量浓度达到临界值就会产生抑菌阳性效果(抑菌圈宽度≥2mm)。结论:通过控制焦磷酸盐和三聚磷酸盐使用量,可降低由多聚磷酸盐引起的抑菌剂阳性风险。

水产品中的副溶血弧菌和霍乱弧菌双重荧光定量PCR快速检测方法的建立

针对副溶血弧菌的tlh基因和霍乱弧菌的vcc基因,分别设计特异性引物与TaqMan探针,建立检测水产品中2种细菌的双重荧光定量PCR体系,并进行了特异性与敏感性试验。结果表明,在相同反应条件下,副溶血弧菌和霍乱弧菌得到了特异性扩增,而与其共存于水产品中的其他细菌均未见扩增。将不同比例的DNA混合后检测发现,2种荧光信号的收集不存在相互干扰。副溶血弧菌FJ14和霍乱弧菌H4的敏感性试验结果表明,该体系的最低DNA检测量分别为0.25 pg0、.32 pg,人工染菌样品的最低检测限分别为34 cfu/mL和153 cfu/mL。与传统检测方法相比,该双重荧光定量PCR方法检测水产品中的副溶血弧菌和霍乱弧菌快速准确,结果直观。

金黄色葡萄球菌的检测方法优化及其在舟山市水产品加工厂中的污染状况调查

金黄色葡萄球菌(Staphy lococcus aureus)是引起食物中毒的重要致病菌。为简化金黄色葡萄球菌复杂的检测方法,并了解舟山市水产品中该致病菌的污染状况,通过比较已公开的3套针对耐热核酸酶编码基因的PCR鉴定体系,根据特异性和灵敏性实验筛选了1套最优的针对金黄色葡萄球菌的PCR鉴定体系。基于这一体系和国家规定的标准方法,对舟山市水产品加工厂各个环节采集的120份样品中金黄色葡萄球菌的污染状况进行了调查。结果显示,120份样品中金黄色葡萄球菌的检出率为8.3%,PCR检测方法与国标法检出阳性率比较无显著差异,而且集中在原料和环境这两个环节检出金黄色葡萄球菌,在半成品和成品中却未检测到。由此,可以认为舟山市水产品加工厂的原料和环境中存在着一定的安全隐患,而成品相对较为安全。

弧菌显色培养基对副溶血弧菌检测效果的初步评估

目的评估弧菌显色培养基对副溶血弧菌检测效果。方法通过弧菌显色培养基(chromID Vibrio)同硫代硫酸盐-柠檬酸盐-胆盐-蔗糖(TCBS)琼脂培养基进行比对,采用阳性菌株污染、人工污染样品和实际样品检测的方法,对chromID Vibrio的灵敏性、特异性和检测效果进行了初步评价。结果得到粉红色副溶血弧菌典型菌落;阳性菌株污染中,在稀释度为10-7CFU/ml时,chromID Vibrio能检测出目标菌,而TCBS平板未能检测;对人工污染样品,稀释度10-8CFU/ml chromID Vibrio有检出、TCBS平板未检出;对采集的150份实际样品进行检测,用ChromID Vibrio方法检出副溶血弧菌12株,比TCBS方法检出的检测效率高。结论chromID Vibrio灵敏性和TCBS相当,并具有较好的特异性,大大提高副溶血性弧菌的检测效率。