雷帕霉素对p70S6K-siRNA转染的EC9706细胞增殖的影响

目的:观察雷帕霉素对p70S6K-siRNA转染的人食管鳞状细胞癌EC9706细胞增殖的影响。方法:用p70S6K-siRNA转染EC9706细胞,分别作用24、48 h后,采用RT-PCR和Western blot检测p70S6K mRNA及蛋白的表达情况;收集转染p70S6K-siRNA 24 h和未转染的EC9706细胞,加入0、25、50、100、150、250、500和1 500 nmol/L的雷帕霉素处理48 h,采用MTT法检测细胞存活率。结果:p70S6K-siRNA转染后,EC9706细胞中p70S6K mRNA及蛋白的表达均明显降低(mRNA:F=57.825;蛋白:F p70S6K=268.897,F p-p70S6K=35.584,P均<0.05)。随雷帕霉素浓度的增加,未转染和转染组EC9706细胞存活率均降低;与未转染组相比,转染组细胞存活率更低(F剂量=664.919,F组间=1 958.000,P均<0.05。)结论:p70S6K-siRNA能增强雷帕霉素对EC9706细胞增殖的抑制作用。

食管鳞癌细胞中PTEN基因表达水平及突变位点分析

目的:探讨PTEN基因在食管鳞癌细胞中的表达水平及突变情况。方法:采用RT-PCR技术检测高分化的Eca109、低分化的EC9706和EC1食管鳞癌细胞株细胞中PTEN mRNA的表达水平,并克隆PTEN基因全长,与野生型PTEN基因序列比对,分析突变情况。结果:EC1、EC9706、Eca109细胞株中PTEN mRNA的表达水平分别为(0.06±0.02)、(0.24±0.02)、(0.41±0.01),3株细胞中PTEN mRNA的表达水平差异有统计学意义(F=306.330,P<0.001),Eca109细胞中PTEN mRNA的表达水平高于EC9706和EC1细胞(P<0.05)。3株细胞中PTEN基因均存在不同程度突变,突变主要集中在外显子5和8。结论:食管鳞癌细胞中PTEN表达水平与细胞的分化程度有关,PTEN基因突变与食管鳞癌的发生发展有关。

shRNA对EC9706细胞p70S6K表达的影响

目的:观察核糖体40s小亚基S6蛋白激酶(p70S6K)特异性短发夹RNA(shRNA)对EC9706细胞p70S6K表达的影响。方法:根据GenBank p70S6K的mRNA序列,设计并合成p70S6K特异性的shRNA序列,退火形成双链后插入pSIREN-RetroQ-DsRed-Express载体,构建表达载体pshRNA-p70S6K,转染EC9706细胞。采用RT-PCR和Western blot方法分别检测转染24、48、72、96及120h后细胞中p70S6K mRNA和磷酸化p70S6K的表达,设未转染的EC9706细胞为对照。结果:各组细胞p70S6K mRNA和磷酸化p70S6K蛋白的表达差异有统计学意义(F=106.343,721.632,P均<0.001)。转染细胞p70S6K mRNA的表达在转染24、48和72h后均较对照组下降(P<0.05),在第48h表达最低;磷酸化p70S6K蛋白的表达在转染24、48、72和96h后均较对照组下降(P<0.05),第48h表达最低。结论:p70S6K特异性shRNA能够下调EC9706细胞中p70S6K mRNA和蛋白的表达。

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白小分子干扰RNA对食管鳞癌细胞中mTOR-p70S6K信号通路及裸鼠移植瘤生长的影响

目的 检测哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）小分子干扰RNA（siRNA）对食管鳞癌中mTOR-p70S6K信号通路的阻断作用以及对裸鼠移植瘤生长的影响.方法 以食管鳞癌细胞株EC9706为研究对象,采用siRNA干扰、逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、Western blot、流式细胞术及CCK-8等方法,观察mTOR-p70S6K信号通路被阻断后,通路中各因子蛋白及mRNA表达的变化,及其对细胞增殖和凋亡的影响.进行裸鼠成瘤实验,观察mTOR siRNA对肿瘤生长的影响.结果 与未转染细胞相比,转染mTOR siRNA的细胞中mTOR和磷酸化p70S6K的表达水平降低（P〈0.05）,而pTOS6K的表达水平升高（P〈0.05）.转染mTOR siRNA后,细胞凋亡增加,细胞增殖能力降低,且对顺铂的敏感性增高,细胞被阻滞在G,期（P〈0.05）.mTOR siRNA能明显抑制裸鼠移植瘤的生长,siRNA组和siRNA＋顺铂组的肿瘤抑制率分别为50.9%和62.3%.结论 mTOR siRNA能有效抑制mTOR-pTOS6K信号通路,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,在裸鼠体内能显著抑制肿瘤的生长.mTOR-pVOSSK信号通路在食管鳞癌发生发展中起重要作用.

视网膜分支静脉阻塞继发黄斑水肿雷珠单抗治疗后视力预后的列线图模型构建与验证

目的分析视网膜分支静脉阻塞继发黄斑水肿(BRVO-ME)患眼雷珠单抗治疗后影响视力预后的相关因素,建立预测列线图模型并验证。方法回顾性研究。2019年1月至2021年12月于柳州市红十字会医院眼科检查确诊的BRVO-ME患者130例纳入研究。所有患者均接受玻璃体腔注射雷珠单抗治疗。根据随机数字表法以3:1的比例将患者分为训练集和测试集,分别为98例98只眼、32例32只眼。根据治疗后6个月时最小分辨角对数(logMAR)最佳矫正视力(BCVA)与治疗前logMAR BCVA差值,将训练集98例98只眼分为预后良好组(差值≤-0.3)、预后不良组(差值>-0.3),分别为58例58只眼、40例40只眼。分析两组患者的临床资料,将有差异的指标进行单因素和多因素logistic回归分析,利用R软件可视化回归分析结果得到列线图,通过一致性指数(C-index)、卷积神经网络(CNN)、校准曲线、受试者工作特征曲线(ROC曲线)验证列线图模型的准确性。结果单因素分析结果显示,年龄、病程、外界膜(ELM)完整性、椭圆体带(EZ)完整性、BCVA、黄斑中心凹视网膜厚度(CMT)、外层强反射点(HRF)、内层HRF、视网膜深层毛细血管丛(DCP)血流密度是BRVO-ME患眼雷珠单抗治疗后影响视力预后的危险因素(P<0.05)。多因素logistic回归分析结果显示,病程、ELM完整性、BCVA和外层HRF是BRVO-ME患眼雷珠单抗治疗后影响视力预后的独立危险因素(P<0.05)。基于此建立列线图预测模型,训练集、测试集的ROC曲线下面积分别为0.846[95%可信区间(CI0.789~0.887)、0.852(95%CI 0.794~0.873)];C-index分别为0.836(95%CI 0.793~0.865)、0.845(95%CI 0.780~0.872);CNN显示在300个周期后错误率逐渐稳定,模型准确性良好,预测能力较强。结论病程、ELM完整性、BCVA和外层HRF是BRVO-ME患眼雷珠单抗治疗后影响视力预后的独立危险因素;依据危险因素构建的列线图模型具有良好的区分度和准确性。