登革2型病毒全长基因组的长链RT-PCR法扩增

目的采用长链RT-PCR技术扩增登革2型病毒新几内亚株(NGC)全长基因组。方法根据登革2型病毒NGC株基因组全序列设计引物,在上游引物中加入Sp6 RNA聚合酶启动子核心序列,下游引物中加入ClaⅠ内切酶位点。从病毒感染的乳鼠脑中提取RNA,采用长链RT-PCR技术进行扩增。以获得的PCR产物为模板分别扩增3个NGC株特异的基因片段。结果长链RT-PCR法扩增出约11 kb基因片段,经PCR法证实为登革2型病毒NGC株特异序列。结论通过长链RT-PCR技术,获得了登革2型病毒NGC株全长基因组,为进一步构建感染性克隆打下基础。

登革2型病毒NGC株基因组亚克隆的构建及其鉴定

目的构建登革2型病毒NGC株基因组全序列的亚cDNA克隆,为进一步构建全长感染性cDNA克隆奠定基础。方法根据登革2型病毒NGC株基因组全序列中的酶切位点设计2对引物,从病毒感染的乳鼠脑中提取RNA,采用长链RT-PCR技术扩增出覆盖病毒基因组全长的2个cDNA片段,并克隆至pCR-XL-TOPO载体后测序。结果经酶切鉴定和序列测定表明,获得的cDNA克隆为登革2型病毒NGC株特异的。结论已成功构建出登革2型病毒NGC株基因组的2个cDNA亚克隆。

在医学生中开展生物安全教育初探

生物医学属实验科学，生物医学专业学生的学习、实习和工作均离不开实验室，有许多接触各类病原微生物的机会。2010年12月，东北农业大学动物医学学院由于教师在实验中使用了未经检疫的山羊，导致2011年3～5月27名学生和1名教师陆续确诊感染布鲁菌病。这一震惊全国的生物安全事件充分说明生物安全教育的缺失是极大的安全隐患。

某院老年科感染患者病原菌分布及耐药性监测

目的研究某院老年科感染患者的病原菌分布及其对抗菌药物的耐药情况。方法分析该院老年科2006～2007年所分离培养出来的细菌菌种,根据2007年CLSI颁布的准则,采用WHONET5.4软件完成统计分析。结果该院老年科感染患者临床分离的2799株菌中,革兰阴性菌71.06%,革兰阳性菌9.43%,真菌19.51%。61.91%的金黄色葡萄球菌和51.39%的凝固酶阴性葡萄球菌对头孢西丁耐药,但无万古霉素耐药株;6.98%的肠球菌属对万古霉素耐药;大肠埃希菌和克雷伯菌属对头孢菌素高度耐药,酶抑制剂使用使耐药率下降了54%～68%。铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药率为30.26%。真菌对大部分的抗真菌药都呈现敏感,但对特比耐芬高度耐药。结论通过对细菌的耐药监测和分析了解各病原菌的耐药特点与机制,指导临床早期经验性用药。

登革2型病毒E基因克隆及B细胞抗原表位分析

目的扩增登革病毒2型新几内亚株(NGC)E基因,并进行B细胞抗原表位分析。方法根据登革2型病毒NGC株E基因序列设计引物,采用RT-PCR技术扩增NGC株E基因并克隆至pGEM-T载体,转化大肠杆菌DH5α后测序。按Kyte-Doolit-tle方案、Jameson-Wolf方案和Emini方案预测B细胞抗原表位。结果通过RT-PCR方法,获得了登革2型病毒NGC株E基因,并对登革2型病毒NGC株E基因进行B细胞抗原表位预测。结论通过RT-PCR方法,获得了登革2型病毒NGC株E基因,为制备登革2型病毒E基因单克隆抗体和疫苗打下基础。

重组人干扰素γ慢病毒的构建及鉴定

目的构建含干扰素(IFN)γ基因的转移质粒,包装含IFNγ基因的重组慢病毒(LV),测定重组LV是否包装成功,重组LV的定量及鉴定IFNγ基因的表达。方法采用分子克隆方法,构建含IFNγ基因的转移质粒,采用脂质体法将LV三质粒系统(包括鉴定正确的转移质粒p TY-CMV-IFNγ、包装质粒p SPAX2、包膜蛋白质粒p MD2.G)共转染293T细胞,包装由CMV启动子驱动的重组人LV-IFNγ。采用ELISA法对重组LV-IFNγ进行鉴定。结果成功构建了含CMV启动子的p TYCMV-IFNγ转移质粒。高效包装出重组LV-CMV-IFNγ,病毒RNA载量1.20×109copies/ml。ELISA检测LV包装病毒液中IFNγ量为:11.88μg/ml。LV原液转导293A和CEM细胞12 h后,IFNγ量分别为11.45μg/ml和10.44μg/ml。LV原液转导293A和CEM细胞72 h后,IFNγ量分别为11.28μg/ml和11.01μg/ml。结论成功包装生产出高滴度重组LV-CMV-IFNγ,转染293A和CEM后,能检测到IFNγ高水平表达,为下一步工作提供研究基础。

人微小病毒B19感染的研究进展

近年来人微小病毒B19(human parvovirus B19)作为人类疾病的重要病原已愈来愈广泛受到重视。大量研究成果不但揭示了B19病毒的致病机理,Th-1介导的细胞免疫应答,而且发展了B19感染的诊断和B19污染血制品的筛查技术,并且为疫苗的研制奠定了基础。这里对人类B19病毒的病原学特征、致病机理、临床症状及实验室诊断方法和技术进行了较全面的综述。

脑膜炎大肠杆菌新基因cglE的克隆、表达及功能分析

目的研究脑膜炎大肠杆菌新基因cglE在细菌穿透血脑屏障中的作用。方法1)PCR扩增cglE基因片段,克隆到原核表达载体pET22b,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达并对目的蛋白进行纯化及初步鉴定。2)应用生物信息学方法对cglE表达产物进行一级和二级结构预测。结果经Western-blot验证原核表达的CglE蛋白,SDS-PAGE电泳显示其分子量大小约50 000 Da。生物信息学分析表明,该基因与编码二氢硫辛酰胺脱氢酶(Dihydrolipoamide Ddhydrogenase,DLDH)的基因有同源性,与脑膜炎大肠杆菌侵袭素IbeA在二级结构上有相似性。结论建立稳定的原核表达系统并成功表达cglE基因产物,cglE基因可能与能量代谢及细菌穿透血脑屏障有关。目的蛋白CglE的表达及初步鉴定可为研究其功能及脑膜炎大肠杆菌的感染组学奠定了良好的基础。

SARS冠状病毒S2基因原核表达及免疫学特性

目的研究严重急性呼吸道综合征(SARS)冠状病毒S2蛋白表达并对其免疫学特性。方法克隆SARS冠状病毒S2基因,并在大肠埃希菌中表达谷胱甘肽硫转移酶(GST-S2)融合蛋白。通过免疫印迹(Westernblot)和酶联免疫吸附试验(ELISA)方法鉴定表达GST-S2融合蛋白的活性。结果通过原核系统表达的GST-S2融合蛋白可与谷胱甘肽硫转移酶(GST)多克隆抗体结合,并在85千道尔顿(KD)处出现特异性结合条带。GST-S2蛋白能与SARS患者恢复期血清反应,而不与正常人血清反应。结论本项研究获得了SARS冠状病毒GST-S2融合蛋白,它可与GST多克隆抗体特异性结合,并与SARS患者恢复期血清发生特异性反应。

国内外信息素质教育研究的比较及启示

研究国内外信息素质教育特点、实施情况及发展趋势,对比分析国内外信息素质教育研究存在的差异,以期借鉴国外信息素质教育的经验与优势,指导我国信息素质教育的研究与实践。

脑膜炎大肠埃希菌侵袭素IbeA结合多肽的初步研究

目的脑膜炎大肠埃希菌(E.coli)侵袭素IbeA通过与脑微血管内皮细胞表面受体结合,从而介导细菌穿透血脑屏障引起新生儿细菌性脑膜炎。为通过肽库筛选获得与IbeA蛋白结合的多肽,建立噬菌体随机肽库筛选IbeA结合多肽模体的方法。方法首先制备靶分子,用PCR扩增出全长ibeA基因序列,克隆至表达载体pET28a中,转化大肠埃希菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达出带有His-tag的目的蛋白,经变性复性后通过Ni2+-NTA亲和层析柱得到纯度达90%的重组蛋白。然后以固相化IbeA重组蛋白为靶亲和筛选噬菌体线性12肽库。结果经过3轮淘选,得到能和IbeA结合的24个重组噬菌体克隆;挑选15个亲和力高的克隆进行DNA测序,对比分析所得的短肽序列。固相Fmoc法合成短肽,并进行结合实验、阻断实验和竞争抑制实验。结论以重组表达的IbeA融合蛋白为靶筛选得到的重组噬菌体十二肽克隆,能够和IbeA蛋白结合,为IbeA蛋白结合多肽。结果提示所筛选的阳性噬菌体克隆及其合成肽可能模拟IbeA受体表位的结构。

脑膜炎大肠杆菌IbeA蛋白结合肽序列的亲和筛选

应用噬菌体展示肽库技术,以重组的脑膜炎大肠杆菌致病蛋白IbeA作为靶分子,经过吸附-洗脱-扩增-再吸附的亲和筛选,随机挑选亲和力强的噬菌体克隆,进行ELISA、竞争抑制实验和序列测定。结果显示,经3轮淘选后,间接ELISA鉴定得到高亲和性结合IbeA蛋白的15个阳性克隆。竞争抑制实验结果表明,游离IbeA蛋白能竞争抑制噬菌体结合肽克隆与固相包被的IbeA蛋白的结合,其抑制作用随游离IbeA蛋白浓度的降低而减弱。测序结果得到5种阳性噬菌体克隆展示肽序列。上述结果提示以脑膜炎大肠杆菌IbeA蛋白为靶筛选所获得的噬菌体12肽克隆,具有特异性,其结合肽序列呈现相对保守性。建立的从噬菌体随机肽库筛选IbeA蛋白结合肽的方法具有方便、灵活和高效可行的特点。

豚鼠慢性充血性心力衰竭动物模型的研究

目的探讨豚鼠慢性充血性心力衰竭(CHF)动物模型的制作方法。方法采用降主动脉缩窄法建立豚鼠CHF模型(模型组20只,对照组10只)。8周后观察以下指标:临床表现、血流动力学、左心室重与体重比值、肺重与体重比值及室壁厚度。结果降主动脉缩窄8周后,14只豚鼠出现呼吸困难(BPC组),但BPC组豚鼠的左室收缩压及舒张末压均显著增高,左室压升高和降低最大速率均显著降低;左心室重与体重比值、肺重与体重比值及室壁厚度明显增高,呈现明显的心衰指征。而缩窄8周后未见呼吸困难的豚鼠(BWPC组)仅左心室重与体重比值增加,尚处于代偿期。结论降主动脉缩窄8周后可造成豚鼠CHF。

试析网络工程实践中安全技术的应用

为了保证网络使用安全,我们有必要增强网络安全意识,了解掌握一些网络安全以及技术方面的知识。文章针对网络工程实践中安全技术的应用进行课题研究,希望可以通过本文的论述让读者朋友了解一些基本的网络安全知识。

原发性高血压患者血浆脑钠素水平与左室肥厚的相关性研究

目的探讨原发性高血压患者血浆脑钠素(BNP)水平与左室肥厚(LVH)的相关性。方法将116例原发性高血压患者根据超声心动图左心室质量指数(LVMI)的不同分为LVH组(38例)和非LVH组(78例),测定两组患者血浆BNP水平,并对其进行相关性分析。结果血浆BNP水平与LVMI呈正相关(P<0.01),与E/A比值呈负相关(P<0.01),与左心室射血分数(LVEF)呈负相关(P<0.01);两组相关参数比较,LVH组BNP水平高于非LVH组(P<0.01),E/A比值、LVEF均低于非LVH组(P<0.01)。结论血浆BNP水平变化与LVH密切相关,其相关指标可作为原发性高血压患者LVH的间接诊断依据。

《儿科护理学》教学实践与思考

《儿科护理学》不仅是临床护理专业人才培养的必修课程，也是军队护理专业士官获取护士职业资质、从业和执业资格考核必备的知识。因此，提高《儿科护理学》教学质量，加强军地两用人才的培养及促进军校学员自身专业发展具有十分重要的意义。笔者在对《儿科护理学》的教学实践过程中，结合军校护理专业士官岗位需求、任职以及自身专业发展的现状，不断总结、探索，根据教学内容、教学对象选择教学方法与手段，完善教学过程，收到较好效果。

结直肠癌细胞所致免疫抑制及免疫抑制分子分泌模式的研究

目的探讨结直肠癌细胞分泌的免疫抑制物质及抑制免疫功能的模式。方法制备结直肠癌Colon26细胞培养上清,采用MTT法检测其对T细胞转化和NK细胞的影响,直接免疫荧光FCM法检测对IL-2Rα、CD3ε+ζ+及CD3ε-ζ+表达的影响;定量ELISA法测定上清中TGF-β1、VEGF、IL-4、IL-6、IL-10和PGE2含量。结果 Colon26细胞可使5项免疫功能指标明显受抑制,抑制率分别为37.88%±7.38%、68.30%±10.44%、69.60%±5.15%、68.15%±2.17%、23.34%±2.86%。Colon26细胞可稳定分泌免疫抑制分子,以TGF-β1含量最高,为(1295.23±29.85)pg/ml;VEGF、IL-4、IL-6、IL-10、PGE2分泌量分别为(29.18±1.90)pg/ml、(27.70±0.70)pg/ml、(26.55±0.60)pg/ml、(29.52±2.50)pg/ml、(9.69±0.42)pg/ml。结论 Colon26细胞对T细胞增殖、活化及信号转导水平的抑制接近70%,对NK杀伤及ζ链介导的活化信号水平的抑制约30%。结直肠癌细胞可能通过分泌以TGF-β1为主的多种免疫抑制分子抑制NK细胞和T细胞免疫功能,介导肿瘤的免疫逃逸。