人参皂苷Rg1通过LncRNA MALAT1相关通路对脊髓损伤后神经再生修复的影响

目的探讨人参皂苷Rg1通过LncRNA MALAT1通路对脊髓损伤大鼠神经再生修复的影响。方法30只大鼠随机分为Rg1治疗组、假手术组、脊髓损伤对照组。将成年雌性鼠随机分为假手术组,脊髓损伤对照组和Rg1治疗组,建立大鼠脊髓损伤模型。Rg1治疗组大鼠每天腹腔注射Rg1溶液(100 mg/kg),脊髓损伤对照组和假手术组每天腹腔注射等量生理盐水。采用Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)评分评估大鼠脊髓损伤后的运动恢复情况。连续治疗28 d后处死老鼠。取脊髓组织,通过Western blot检测细胞黏附分子层粘连蛋白(Laminin,LN)、纤维连接蛋白(Fibronectin,FN)以及神经营养因子胶质细胞源性神经营养因子(glialcellline-derivedneurotrophicfactor,GDNF)、神经生长因子(nerve growth factor,NGF)的表达。实时荧光定量PCR测LncRNA MALAT1,采用免疫组化分析LAMC1的表达水平。结果BBB评分显示,Rg1治疗组BBB评分显著优于假手术组、脊髓损伤对照(P<0.05)。免疫组化及免疫荧光显示:Rg1治疗组LN、FN、GDNF、NGF、LAMC1表达与对照组相比显著升高。结论Rg1能够上调LncRNA MALAT1表达,进一步调控LAMC1而促进大鼠脊髓损伤修复。

胸腰椎骨折椎弓根螺钉内固定术后椎体高度再丢失的相关影响因素分析

目的探讨胸腰椎骨折椎弓根螺钉内固定术后椎体高度再丢失的相关影响因素并筛查最佳预测点。方法采用回顾性病例对照研究分析2010年1月至2017年12月苏州大学附属第二医院收治的215例胸腰椎骨折患者临床资料,其中男155例,女60例;年龄21~80岁[(48.6±10.4)岁]。按照Denis骨折分类法:压缩性骨折73例(A型15例,B型51例,C型7例),爆裂性骨折135例(A型28例,B型87例,C型20例),屈曲牵张型骨折7例(A型4例,B型2例,C型1例)。均行椎弓根螺钉内固定手术。随访时间为12~48个月[(23.8±8.2)个月],86例发生椎体高度丢失(丢失组),129例未发生椎体高度丢失(未丢失组)。比较两组性别、年龄、亚洲人骨质疏松自我筛查工具(OSTA)指数、体重指数(BMI)、骨折类型、骨折椎体数、术前矢状面Cobb角、术前椎体压缩程度、伤椎置钉数、椎体复位程度等;采用单因素分析上述因素与椎体高度再丢失的相关性;采用多因素Logistic回归分析与椎体高度再丢失的独立危险因素;分别绘制受试者工作特征(ROC)曲线,分析曲线下面积(AUC),并根据ROC曲线筛查术后椎体高度再丢失的最佳预测点。结果两组性别、年龄、BMI、骨折类型、骨折椎体数、术前矢状面Cobb角和伤椎置钉数差异无统计学意义(P>0.05),OSTA指数、术前椎体压缩程度及伤椎椎体复位程度的差异有统计学意义(P<0.05)。单因素分析结果表明,OSTA指数、术前椎体压缩程度及伤椎椎体复位程度与术后椎体高度再丢失有一定的相关性(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果表明,OSTA指数(OR=1.109,95%CI 0.527~0.685,P<0.05)和术前椎体压缩程度(OR=0.038,95%CI 0.539~0.689,P<0.05)与术后椎体高度再丢失显著相关。预测术后椎体高度再丢失的AUC分别为0.606和0.614,分析得出OSTA指数1.9及术前椎体压缩程度31.3%分别为术后椎体高度再丢失的最佳预测点。结论OSTA指数、术前椎体压缩程度是胸腰椎骨折椎弓根螺钉内固定术后发生椎体高度再丢失的独立危险因素。OSTA指数≤1.9或术前椎体压缩程度≥31.3%时,术后椎体高度再丢失的发生风险显著增高。

人参皂苷Rg1通过长链非编码RNA-Malat1/微小RNA-124-3p/层粘连蛋白γ1信号轴上调星形胶质细胞相关功能蛋白表达促进脊髓损伤修复

目的验证人参皂苷Rg1通过长链非编码RNA(lncR)-Malat1/微小RNA(miR)-124-3p/层粘连蛋白γ1(Lamc1)信号轴调控星形胶质细胞(AS)促进脊髓损伤修复。方法原代AS来源于新生大鼠的脑组织(补充组织来源)。使用免疫荧光染色鉴定细胞纯度。通过细胞转染分别改变lncR-Malat1和miR-124-3p在AS中的表达量,使用实时荧光定量聚合酶联反应技术(RT-qPCR)检测lncR-Malat1、miR-124-3p和Lamc1的基因表达变化。采用双荧光素酶报告基因实验验证lncR-Malat1与miR-124-3p之间存在靶向结合位点。使用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测最有利于AS生长的人参皂苷Rg1浓度。通过蛋白质印迹法(Western blot)检测人参皂苷Rg1对AS分泌神经生长因子(NGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、层粘连蛋白(LN)、纤维连接蛋白(FN)表达量的影响及lncR-Malat1表达量改变后对人参皂苷Rg1该功能的影响。两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果lncR-Malat1与miR-124-3p的基因表达存在负相关性(3.152±0.128比1.046±0.089、0.580±0.023比1.212±0.029,t=30.240、38.180,P<0.05)。miR-124-3p模拟物(mimic)使野生型Malat1(Malat1-wt)的荧光素酶活性显著降低(1.086±0.040比0.532±0.043,t=20.900,P<0.05),而突变型Malat1(Malat1-mut)的荧光素酶活性无明显改变(1.070±0.016比1.092±0.036,t=1.266,P>0.05)。miR-124-3p mimic使AS中Lamc1的基因表达较NC组下降(0.512±0.023比1.260±0.045,t=36.330,P<0.05)。小干扰RNA(siRNA)-Malat1转染组的Lamc1表达低于NC组(0.503±0.003比1.042±0.094,t=12.870,P<0.05),而加用miR-124-3p抑制剂(inhibitor)共转染逆转了这一抑制作用(2.258±0.134比0.503±0.003,t=29.350,P<0.05)。人参皂苷Rg1干预AS的最佳浓度为40μg/ml[(90.950±0.031)%,F=3.875,P<0.05]。人参皂苷Rg1能够上调AS神经营养因子NGF、bFGF、GDNF(0.856±0.037比0.682±0.027、1.118±0.162比0.713±0.009、1.110±0.094比0.754±0.013,t=4.303、6.587、6.493,P<0.05)以及有利于轴突再生的细胞外基质LN、FN(0.951±0.043比0.655±0.030、1.159±0.077比0.745±0.034,t=8.573、9.824,P<0.05)的蛋白表达,而这一作用受lncR-Malat1调控(0.528±0.018比0.856±0.037、0.511±0.021比1.118±0.162、0.421±0.026比1.110±0.094、0.519±0.042比0.951±0.043、0.550±0.039比1.159±0.077,t=13.850、6.441、12.220、12.510、12.300,P<0.05)。结论人参皂苷Rg1通过lncR-Malat1/miR-124-3p/Lamc1信号轴上调AS表达NGF、bFGF、GDNF、LN、FN并促进脊髓损伤修复。