烧伤后磷酸化酪氨酸和核因子-κB表达及细胞因子分泌改变的研究

目的：探讨烧伤后早期腹腔巨噬细胞表达磷酸化酪氨酸（Ｔｙｒ Ｐ）、核因子 Ｋａｐｐａ Ｂ（ＮＦ κＢ）ｍ ＲＮＡ 及分泌细胞因子的动态变化。方法：采用小鼠２０％ 体表面积的Ⅲ度烫伤模型，分离和培养小鼠腹腔巨噬细胞。用免疫组织化学方法观察烫伤后２４ 小时内不同时间Ｔｙｒ Ｐ的变化；用逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）方法观察ＮＦ κＢｍ ＲＮＡ表达的情况；用酶联免疫吸附（ＥＬＩＳＡ）方法测定上述细胞培养上清中肿瘤坏死因子 α（ＴＮＦ α）、白介素 ６（ＩＬ ６）的水平。结果：烫伤后１ 小时腹腔巨噬细胞的Ｔｙｒ Ｐ表达就明显增高，与假烫伤组比较差异显著（Ｐ＜ ０．０１），这种改变在伤后２４ 小时内持续存在；烫伤后１ 小时ＮＦ κＢｍ ＲＮＡ 表达明显增强，以伤后２ 小时为明显（Ｐ＜ ０．０１），伤后４、６ 小时表达逐步减弱，但仍较假烫伤组高（Ｐ均＜ ０．０５）；烫伤小鼠腹腔巨噬细胞培养上清中ＴＮＦ α和ＩＬ ６ 水平明显增高，烫伤后其含量在不同时期有所不同，与假烫伤组比较差异显著（Ｐ均＜ ０．０１）。烫伤小鼠腹腔巨噬细胞Ｔｙｒ Ｐ、ＮＦ κＢｍ ＲＮＡ 与ＴＮＦ α、ＩＬ ６ 呈正相关。结论：烫伤可使巨噬细胞中Ｔｙｒ Ｐ、ＮＦ κＢｍ ＲＮＡ 表达增强，分?

维拉帕米减敏巨噬细胞机制研究

目的 :探讨维拉帕米对严重烧伤小鼠早期腹腔巨噬细胞 ( MΦ)内毒素 ( L PS)后信号转导途径的影响。方法 :BAL B/C小鼠随机分成烫伤组和假烫组 ,将收集到的腹腔 MΦ 加入不同浓度维拉帕米 ( 10、10 0和10 0 0 nmol/L )培养。用细胞免疫组化、逆转录聚合酶链反应 ( RT PCR)和酶联免疫方法 ,观察维拉帕米对小鼠 MΦ表达磷酸化酪氨酸 ( Tyr P)、CD14m RNA和产生肿瘤坏死因子α( TNFα)、白介素 6 ( IL 6 )的影响。结果 :与假烫组比较 ,烫伤后 2小时小鼠 MΦ Tyr P和 CD14表达明显增强 ,分泌细胞因子明显增加。维拉帕米各浓度对烫伤小鼠 MΦ CD14m RNA表达无明显影响 ;维拉帕米能使 MΦ 表达 Tyr P和分泌细胞因子TNFα、IL 6减少。结论 :维拉帕米减敏 MΦ 的机制可能与其影响 Tyr P的表达有关。

SDD及多粘菌素B对烧伤小鼠细胞CD14 mRNA转录的影响

脓毒症、多器官功能障碍综合征（ＭＯＤＳ）已成为烧伤患者最主要的死因，其发生发展中起重要作用的是巨噬细胞（Ｍφ）等免疫活性细胞被ＬＰＳ为主的激活物激活［１］。从肠道革兰阴性杆菌环节以及随后的血中内毒素环节分别应用选择性肠道去污染（ＳＤＤ）和多粘菌素，观...

有机溶剂神经毒的生化机理

目前,化学工业已进入“石油化学时代”,石油及其产品对人类环境的污染和职业危害也越来越大。研究表明:除苯、氯乙烯等少数有机溶剂外,几乎全部溶剂均以对神经系统损害为主。本文拟对溶剂神经毒生化机理的研究近况作一介绍。

烧伤外科住院医师规范化培训中临床思维能力培养初探

住院医师规范化培训是培养具有独立执业能力和高超临床技能的专业医学人才的重要环节。通过对5年来68名在烧伤外科进行规范化培训住院医师教学工作经验的总结,针对受训住院医师临床实践中思维能力和决策能力相对薄弱的特点,归纳了一套适合于烧伤专科中心开展以培养临床思维能力为主导的综合带教措施。其有助于住院医师强化外科基础知识和基本技能的系统实践和锻炼,促进临床实践综合能力的提高。

TGF-β_1、TNF和维拉帕米对烧伤小鼠CD14表达的影响

目的：探讨转化生长因子β１（ＴＧＦ－β１）、肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）和维拉帕米对严重烧伤小鼠早期腹腔巨噬细胞（Ｍφ）ＣＤ１４表达的影响。方法：ＢＡＬＢ／ｃ小鼠被随机地分成烧伤组和假烫组，将收集到的腹腔巨噬细胞分别加入不同浓度ＴＧＦ－β１（０．０２，０．２０，２．００μｇ／ｍｌ）、ＴＮＦ（０．１，１．０，１０．０μｇ／ｍｌ）和维拉帕米（１０，１００，１０００ｐｍｏｌ／ｍｌ）培养。用细胞原位杂交方法，观察ＴＧＦ－β１、ＴＮＦ和维拉帕米对小鼠ＭφＣＤ１４ｍＲＮＡ表达的影响。结果：（１）烧伤后腹腔ＭφＣＤ１４ｍＲＮＡ的表达明显增加。（２）０．０２，０．２０μｇ／ｍｌＴＧＦ－β１可使烧伤小鼠ＭφＣＤ１４ｍＲＮＡ表达增加，２μｇ／ｍｌ则可使烧伤小鼠ＭφＣＤ１４ｍＲＮＡ表达减少。ＴＮＦ、维拉帕米各浓度对烧伤小鼠ＭφＣＤ１４ｍＲＮＡ表达均无明显影响。结论：ＴＧＦ－β１能通过改变ＭφＣＤ１４ｍＲＮＡ的表达，调节其功能状态。ＴＮＦ。

严重烧伤小鼠早期腹腔巨噬细胞CD14的动态变化

目的：探讨烧伤后早期腹腔巨噬细胞（Ｍφ）ＣＤ１４分子的动态变化。方法：采用ＢＡＬＢ／ｃ小鼠２０％ＴＢＳＡⅢ度烧伤模型，分离和培养小鼠腹腔巨噬细胞，用免疫组织化学方法，观察了烧伤复苏组和延迟复苏组伤后１２ｈ内不同时间ＣＤ１４的变化。结果：烧伤复苏组和延迟复苏组在伤后１ｈ腹腔ＭφＣＤ１４表达就明显增加，复苏组、延迟复苏组阳性强度分别在伤后２，８ｈ达到峰值，这种改变在伤后１２ｈ内呈持续状态。从伤后８ｈ起，延迟复苏组小鼠上述改变均较立即复苏组明显。结论：在伤后过度炎症反应的发生发展中起重要作用的Ｍφ的激活及其反应性的增高，可能与烧伤引起ＣＤ１４的上调，从而使其增敏有关。

严重烧伤对小鼠CD14 mRNA表达的影响

单核、巨噬细胞（Ｍφ）被激活产生肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）等重要炎性介质的最基本途径是脂多糖（ＬＰＳ）／脂多糖结合蛋白（ＬＢＰ）复合物与单核细胞、Ｍφ表面的ＣＤ１４结合，继而引发细胞内一系列反应［１］。ＣＤ１４能提高免疫细胞对内毒素的敏感性，而使内毒素的...

爱康肤银离子敷料在小儿浅Ⅱ度烧伤创面的临床应用

目的研究爱康肤银离子敷料在小儿浅Ⅱ度烧伤创面治疗中的作用。方法采用同体对照法,在40例烧伤患儿身上分别选取2处面积相当的浅Ⅱ度创面,随机分为2组,对照组用磺胺嘧啶银霜换药治疗,治疗组则用爱康肤银离子敷料。分别统计两组创面的愈合时间、愈合率、病程早期渗出量、平均换药次数、平均更换最内层药用纱布次数,并取创面分泌物进行细菌培养,同时定期监测受试者在用药期间有无实验室检测指标异常及不良反应。结果与对照组相比,治疗组的创面愈合时间缩短(P<0.05),用药后第3、7、14天创面愈合率均增高(P<0.05,P<0.01),创面渗出量、平均换药次数及平均更换最内层药用纱布次数均降低(P<0.01)。两组创面细菌培养阳性率的差异无统计学意义。治疗期间所有受试患儿出现的实验室检测指标差异与药物不存在明显相关,绝大多数患儿无不适主诉。结论应用爱康肤银离子敷料治疗小儿浅Ⅱ度烧伤,能有效缩短创面愈合时间,提高创面愈合率,明显减少创面渗出及换药频率,其抑菌效果与浅Ⅱ度烧伤的经典创面外用药磺胺嘧啶银霜相比无明显差异,且在治疗期间绝大多数患儿未出现不良反应,值得在临床上进一步推广应用。

人工真皮支架早期修复特重烧伤手足深度创面

目的与传统的切削痂自体中厚皮移植术相比,探讨切削痂人工真皮支架植入术＋自体刃厚皮移植术修复特重烧伤患者手足深度创面的疗效。方法选择2012年3月至2015年3月第二军医大学长海医院烧伤外科收治的有手足深度创面的特重烧伤患者作为研究对象。符合纳入标准的28例患者按手术方法不同分为两组,观察组（14例）在伤后第4~7天行四肢深度创面切削痂、生物敷料覆盖＋手足创面切削痂、人工真皮支架植入术,伤后第21~28天行手足创面自体刃厚皮移植术;对照组（14例）在伤后第4~7天行四肢深度创面切削痂、生物敷料覆盖术,手足深度创面以保痂换药为主,第28~35天行手足深度创面切削痂自体中厚皮移植术。记录每次手术持续时间、植皮成活情况、皮片坏死的原因、供皮区愈合时间、能否再次供皮、随访手足瘢痕增生情况。结果观察组第1次手术持续时间（h）与对照组比较差异无统计学意义[（4.50±0.76）vs（4.14±0.86）,P〉0.05];第2次手术持续时间（h）少于对照组[（2.11±0.35）vs（3.39±0.49）,P〈0.001]。植皮术后第8天打开换药时,观察组皮片全部成活者占97.37%（37/38）,创面出现感染者占2.63%（1/38）;对照组皮片全部成活者占73.68%（28/38）,部分成活者占23.68%（9/38）,创面感染者占2.63%（1/38）。观察组供皮区愈合时间（d）少于对照组[（6.07±0.83）vs（14.64±0.93）,P〈0.001]。经评估观察组可再次供皮者占78.57%（11/14）,对照组可再次供皮者占14.29%（2/14,P〈0.05）。随访1年,根据温哥华瘢痕量表评分（分）观察组手足瘢痕增生情况好于对照组[（5.07±1.21）vs（8.07±1.14）,P〈0.001]。结论应用人工真皮支架能早期修复特重烧伤手足深度创面,不需额外增添手术操作时间,植皮成活情况及远期活动功能可,对供皮区损伤小。

混合表皮细胞与脱细胞真皮基质构建复合皮的移植和转归研究

探讨混合表皮细胞与脱细胞真皮体外构建的复合皮作创面移植后的转归。将BALB/c小鼠的表皮细胞和人表皮细胞按一定比例混合 ,种植于脱细胞真皮基质表面 ,经体外培养后形成复合皮 ,然后移植于BALB/c小鼠全层皮肤缺损创面 ,观察人表皮细胞的转归。结果显示 ,复合皮移植后可封闭创面 ,人表皮细胞多位于新生表皮上层 ,随时间延长 ,数量逐渐减少并最终被小鼠自体表皮细胞替代。提示两种不同的表皮细胞按一定比例混合培养构建复合皮可封闭全层皮肤缺损创面 ,可望节省自体皮源 。

外固定支架联合负压封闭引流术治疗下肢开放性粉碎性骨折合并严重软组织损伤

目的探讨外固定架联合负压封闭引流术(vacuum sealing drainage,VSD)处理合并严重软组织损伤的下肢开放性粉碎性骨折的效果。方法 86例严重软组织损伤的小腿骨折患者均采用急诊清创、外固定架联合负压封闭引流术治疗,若合并大面积皮肤软组织撕脱,则取撕脱皮肤并打薄回植,以VSD覆盖;若合并软组织缺损,则清创后以VSD覆盖;若合并骨筋膜室综合征,则在切开减张后同期VSD覆盖。结果 86例患者中,除3例因个人因素中途出院外,其余83例均完成了既定治疗方案,转移皮瓣和植皮均成活,创面愈合良好,无一例截肢。结论合并严重软组织损伤的小腿骨折患者,早期简单清创后采取外固定架联合负压封闭引流术的方法,在迅速稳定骨折的同时,能有效封闭创面,改善二期创面修复环境,有利于骨折愈合,减少并发症。

人工真皮支架在大面积撕脱伤救治中的应用

目的 研究人工真皮支架在大面积撕脱伤救治中的应用。方法 回顾性分析第二军医大学长海医院烧创伤外科2011年1月至2014年12月收治的大面积撕脱伤患者20例,年龄6~68岁,撕脱面积占总体表面积（total body surface area,TBSA）10%~40%。按照治疗方法不同将患者分为两组,每组各10例,对照组患者一期行清创＋负压引流术,二期行取植皮术;治疗组患者一期行清创＋真皮支架＋负压引流术,5~7d后更换负压装置,观察基底血管化程度,伤后12~14d行取植皮术。分别统计两组患者从清创到植皮的间隔时间,供皮区愈合时间和愈合质量以及植皮区皮片成活率、愈合时间及愈合质量。结果 与对照组相比,治疗组患者从清创到植皮的间隔时间延长[（13.30±2.06）d vs（7.90±1.10）d,P〈0.01];供皮区愈合时间缩短[（8.10±0.99）d vs（13.10±1.10）d,P〈0.01],供皮区愈合质量提升（4.40±1.58vs 7.80±1.14,P〈0.01）;植皮区皮片成活率[（87.30±5.27）%vs（85.10±5.53）%]、愈合时间[（17.80±1.14）d vs（18.70±2.06）d]、愈合质量（8.40±1.07vs 9.00±1.05）差异均无统计学意义（P〉0.05）。结论 在大面积撕脱伤的治疗过程中早期应用真皮支架联合负压引流技术,可避免在伤后1周左右大范围取皮,手术损伤少,对全身干扰小,可保证患者平稳度过病程早期阶段;同时通过支架自身的血管化可促进创面恢复,减少植皮所需皮片厚度,从而缩短供皮区愈合时间、提高供皮区愈合质量。

银离子生物敷料封闭网状植皮创面临床观察:前瞻性病例对照研究

目的通过与传统网眼油纱封闭网状植皮创面法进行比较,分析银离子生物敷料封闭网状植皮创面方法应用于烧伤、创伤等各种开放创面植皮手术的临床效果。方法符合入选标准的18例患者按手术方法分为两组,试验组(6例)为银离子生物敷料覆盖网状植皮创面,对照组(12例)为传统网眼油纱封闭网状植皮创面。记录入选患者的人口统计学特征、创面情况、植皮后创面感染情况、术后第一次更换最内层敷料时间、术后第一次换药疼痛评分、住院时间,并计算植皮成活率、术后植皮创面感染率和住院总费用。结果试验组术后植皮创面感染率低于对照组(0 vs 50.0%,P<0.05);试验组术后第一次更换内层敷料疼痛评分小于对照组(2.50±1.05 vs 5.42±2.02,P<0.01);试验组第一次更换内层敷料时间晚于对照组[(7.50±1.05)d vs(4.08±1.31)d,P<0.01];试验组住院时间短于对照组[(14.33±1.50)d vs(16.42±1.93)d,P<0.05];试验组术后植皮成活率高于对照组[(97.50±1.87)%vs(91.42±4.48)%,P<0.01]。结论银离子生物敷料封闭网状植皮创面的方法可以提高植皮存活率、缩短创面愈合时间、减少患者痛苦,疗效满意。

含活性细胞的新型创面覆盖物的研制及初步应用

目的:制备含活性细胞的高生物学活性的创面覆盖物,并观察其对创面愈合的促进作用。方法:提取鼠尾胶原,与硫酸软膏素按一定比例混合制成胶原膜;采用胶原酶消化培养法,取健康成人(15～35岁)环切包皮分离成纤维细胞培养并传代。将异体成纤维细胞种植于胶原膜表面培养1周,采用ELISA法和RIA法测定培养上清中细胞因子IL-6、IL-8、TGF-β1及细胞外基质层粘连蛋白、透明质酸的分泌;从需手术植皮的烧伤患者(18～45岁,烧伤面积5％～32％TBSA)大腿外侧切取厚约0.4mm的中厚皮片,将成纤维细胞-胶原膜覆盖物用于中厚皮片供皮区,观察愈合时间。结果:成纤维细胞种植于胶原膜表面生长良好,可长入膜内形成具有三维结构的覆盖物。培养1周,上清中测得IL-6为(502.2±21.9)pg/ml、IL-8为(340.5±23.2)pg/ml、TGF-β1为(1.431±0.063)pg/ml,层粘连蛋白为(92.1±13.5)ng/ml,透明质酸为(2 037.4±105.8)ng/ml。将覆盖物用于供皮区,其表皮化时间为(6.2±2.5)d,较单纯胶原膜的(9.8±2.3)d、凡士林纱布的(10.1±1.9)d明显缩短(P<0.01),上皮分化程度高。结论:合成纤维细胞的胶原膜具有较高的生物学活性,可作为一种良好的暂时性创面覆盖物。

烧伤早期离体肺泡巨噬细胞CD14蛋白表达对细胞因子影响的实验研究

目的 探讨烧伤血清对离体大鼠肺泡巨噬细胞 (AM )CD14膜蛋白 (mCD14 )表达变化及其对AM分泌细胞因子的影响。方法 分离并收集大鼠AM ,以烧伤血清及LPS刺激 ,再分别以抗CD14抗体作用 ,用免疫组化法检测mCD14蛋白表达变化 ,ELISA检测培养液中TNF α和IL 6浓度。结果 烧伤血清和LPS刺激后 ,AM的CD14蛋白表达从 1h起就开始增加 ,2h达峰值 ,尔后逐渐减弱 ,持续 12h ,细胞因子分泌相应增加 ;抗CD14抗体阻断CD14作用后 ,CD14的蛋白表达显著降低 ,细胞因子分泌亦相应减少。结论 严重烧伤后可能随着LPS增加 ,通过激活内毒素信号传导通路 ,使AM分泌细胞因子增加 ,这种作用可以被抗CD14抗体所阻断 ,提示严重烧伤后可以通过调节CD14的作用而减少细胞因子的合成和分泌。

混合型皮肤替代物的构建及移植试验

目的构建含自体表皮细胞和异种表皮细胞的混合型皮肤替代物,并用于移植封闭全层皮肤缺损创面。方法以无细胞真皮基质为载体,将Balb/c小鼠的表皮细胞(自体表皮细胞)和人表皮细胞(异种表皮细胞)按1:1比例混合后种植于无细胞真皮基质表面,经体外培养后形成含表皮细胞层的皮肤替代物,然后移植于Balb/c小鼠全层皮肤缺损创面,观察移植效果。结果皮肤替代物移植于小鼠全层皮肤缺损创面后,可封闭创面,新生皮肤基底膜结构较完整,抗层粘连蛋白、Ⅳ型胶原染色阳性。移植后人表皮细胞随时间延长,数量逐渐减少并最终被小鼠自体表皮细胞替代。结论含自体表皮细胞和异种表皮细胞的混合型皮肤替代物可封闭全层皮肤缺损创面,可望节省自体皮源,缩短体外培养时间。

系统性湿性疗法治疗Ⅱ～Ⅳ度压疮的临床观察

目的探讨系统性湿性疗法对Ⅱ～Ⅳ度压疮的治疗效果。方法 2010年1月至2011年1月,我科共收治压疮患者30例,其中男21例、女9例;年龄60～80岁,平均(71±8.5)岁。创面类型:Ⅱ度压疮7例、Ⅲ度12例、Ⅳ度11例。按湿性疗法进行系统换药,观察各创面的肉芽生长和愈合情况。结果湿性疗法换药后,创面肉芽生长良好,感染控制好,所有创面均在1～6周内愈合,随访3个月,未再复发。结论湿性疗法是治疗深度压疮的较理想的方法之一,值得推广应用。

转EGF基因表皮细胞的生物学活性及移植实验

为探讨转表皮细胞生长因子 (EGF)基因的人表皮细胞在体外培养条件下及移植后EGF的表达 ,于体外培养转EGF基因的人表皮细胞 ,采用ELISA法测定不同培养时间及不同传代数时培养上清中EGF的含量。然后将转基因的人表皮细胞种植于无细胞真皮替代物表面 ,于体外培养后形成复合皮 ,移植于裸鼠全层皮肤缺损创面 ,移植后 3周以抗EGF抗体免疫组化染色观察移植后EGF的表达。结果显示 ,转EGF基因表皮细胞传至第 5代仍可分泌EGF ,达pg级水平 ;含转基因表皮细胞的复合皮移植后 1～ 3周 ,抗EGF染色阳性。提示转EGF基因表皮细胞在体内与体外均可稳定地表达外源基因产物 ,可望应用于组织工程皮肤的构建。