LncRNANNT-AS1通过调控miR-582-5p/NCKAP1轴激活Hippo-YAP/TAZ信号通路促进膀胱癌细胞增殖、迁移、侵袭和干细胞干性影响

目的检测膀胱癌中长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)烟酰胺核苷酸转氢酶反义RNA1(nicotinamide nucleotide transhydrogenase antisense RNA 1,NNT-AS1)表达情况,研究其对膀胱癌细胞增殖、迁移、侵袭及肿瘤干细胞干性的影响及可能分子机制。方法实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)法检测膀胱癌组织标本及细胞中LncRNA NNT-AS1表达情况;将膀胱癌细胞转染分为sh-NC组,sh-NNT-AS1组,sh-NNT-AS1+inh-582-5p组和sh-NNT-AS1+inh-582-5p+si-NCKAP1组。采用CCK-8法检测细胞增殖吸光度值(A值);Transwell实验检测细胞迁移、侵袭穿膜数;细胞成球实验检测干细胞干性。检索starBase和TargetScan数据库,并通过双荧光素酶报告基因实验预测验证LncRNA NNT-AS1和miR-582-5p,miR-582-5p与NCKAP1的靶向结合关系。Western blot检测膀胱癌干细胞标志蛋白(CD44,ALDH1A1,Oct4,Nanog)及Hippo-YAP/TAZ信号通路相关蛋白表达灰度值。结果与癌旁组织相比,膀胱癌组织中LncRNA NNT-AS1表达水平(0.34±0.07 vs 1.15±0.21)明显升高,差异有统计学意义(t=16.364,P<0.001)。与人正常膀胱上皮SV-HUC-1细胞(1.00±0.01)相比,膀胱癌细胞T24,5637,UM-UC-3和TCC-SUP中LncRNA NNT-AS1表达(6.03±0.17,4.66±0.36,5.47±0.26,3.02±0.20)明显升高,差异有统计学意义(t=17.472~51.160,均P<0.001)。与sh-NC组相比,在24,48和72 h时sh-NNT-AS1组细胞增值能力(A值)均显著降低(0.80±0.01 vs 1.07±0.06,1.18±0..07 vs 1.83±0.03,1.89±0.07 vs 2.53±0.06),差异有统计学意义(t=7.688,14.783,12.024,均P<0.05);sh-NNT-AS1组细胞迁移穿膜数(55.00±2.65个vs 354.30±7.84个)、细胞侵袭穿膜数(45.67±2.33个vs 303.00±9.07个)及膀胱癌干细胞成球数(20.85±2.17个vs 41.35±3.67个)显著降低,差异具有统计学意义(t=-62.641,-47.596,8.328,均P<0.001)。与sh-NC组相比,sh-NNT-AS1组细胞中CD44(0.04±0.01 vs 1.12±0.02),ALDH1A1(0.23±0.01 vs 1.16±0.05),Oct4(0.17±0.02 vs 1.10±0.04),Nanog(0.49±0.03 vs 1.24±0.03)的蛋白表达灰度值显著降低,差异具有统计学意义(t=83.656,31.591,36.019,30.619,均P<0.001)。与si-NC组相比,sh-NNT-AS1组CD44+CD133+细胞比例(9.30%±0.79%vs 88.50%±2.77%)明显降低,差异有统计学意义(t=-47.624,P<0.001)。双荧光素酶报告基因检测结果显示miR-582-5p为LncRNANNT-AS1靶基因,NCKAP1为miR-582-5p靶基因;LncRNA NNT-AS1靶向调控miR-582-5p/NCKAP1轴。与sh-NNT-AS1组相比,在24,48,72 h时sh-NNT-AS1+inh-582-5p组细胞增值能力(A值)均明显升高(0.98±0.03 vs 0.73±0.06,1.74±0.04 vs 1.22±0.05,2.33±0.16 vs 1.69±0.14),差异有统计学意义(t=5.977~11.628,均P<0.001)。与sh-NNT-AS1+inh-582-5p组相比,在24,48,72 h时sh-NNT-AS1+inh-582-5p+si-NCKAP1组细胞增值能力(A值)显著降低(0.69±0.04,1.01±0.07,1.39±0.08),差异有统计学意义(t=7.877~16.323,均P<0.001)。与sh-NNT-AS1组相比,sh-NNT-AS1+inh-582-5p组细胞迁移穿膜数(322.31±28.45个vs 81.42±13.22个)、细胞侵袭穿膜数(316.07±30.21个vs 92.13±12.65个)及膀胱癌干细胞成球数(38.55±2.20个vs 18.98±1.16个)显著增加,差异具有统计学意义(t=15.115,13.158,14.592,均P<0.001)。与sh-NNT-AS1组相比,sh-NNT-AS1+inh-582-5p组细胞CD44(1.05±0.08 vs 0.10±0.01),ALDH1A1(1.20±0.16 vs 0.22±0.02),Oct4(1.32±0.14 vs 0.19±0.03),Nanog(0.97±0.12 vs 0.15±0.04),YAP(1.29±0.11 vs 0.42±0.07)和TAZ(1.41±0.16 vs 0.35±0.05)蛋白表达灰度值均显著增加,差异具有统计学意义(t=10.650~21.243,均P<0.001)。与sh-NNT-AS1+inh-582-5p组相比,sh-NNT-AS1+inh-582-5p+si-NCKAP1组细胞迁移穿膜数(65.33±12.60个)、细胞侵袭穿膜数(71.08±15.19个)、膀胱癌干细胞成球数(11.36±1.05个)均显著降低,差异具有统计学意义(t=16.125,14.395,21.365,均P<0.001)。与sh-NNT-AS1+inh-582-5p组相比,sh-NNT-AS1+inh-582-5p+si-NCKAP1组细胞CD44(0.25±0.05),ALDH1A1(0.61±0.11),Oct4(0.22±0.08),Nanog(0.44±0.07),YAP(0.25±0.09)和TAZ(0.30±0.04)蛋白表达灰度值显著降低,差异具有统计学意义(t=6.412~17.889,均P<0.001)。结论膀胱癌中LncRNA NNT-AS1表达上调,其对膀胱癌细胞增殖、侵袭及肿瘤干细胞干性的影响,可能是通过调控miR-582-5p/NCKAP1分子轴,激活Hippo-YAP/TAZ信号通路完成。

腹腔镜单部位腹内缝扎与单孔腹膜外结扎治疗儿童鞘膜积液对血清炎症因子的影响

目的采用经脐单部位两孔腹腔内疝环缝扎术(intracorporeal purse-suturing,IP)和单孔腹腔镜监视下腹膜外内环结扎术(extracorporeal knotting,EK)治疗鞘膜积液患儿,比较术前和术后外周静脉血中的炎症因子的变化,探讨这两种术式对患儿的手术应激以及恢复情况的差异。方法2019年1月至6月,在定州市人民医院治疗的鞘膜积液患儿中,52例纳入本研究,随机分为IP组和EK组,每组26例。术前、术后3 h、24 h采集外周静脉血标本,检测血清白细胞介素(interleukin,IL)-6、IL-10、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α水平。统计学方法采用重复测量的方差分析、独立样本t检验。结果IP组和EK组患儿的月龄、性别、侧别等方面比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。EK组手术时间、麻醉时间均短于IP组。IP组术前、术后3 h、术后24 h血清IL-6、IL-10和TNF-α水平比较,差异均有统计学意义(P=0.000),术后3 h均明显高于术前,术后24 h虽有下降,但仍然高于术前水平。EK组术前、术后3 h、术后24 h的3种炎症因子水平比较,差异也有统计学意义(P=0.000),术后3 h均高于术前,但术后24 h下降并接近术前水平。术前IP组和EK组血清IL-6、IL-10和TNF-α水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。术后3 h和24 h,IP组血清IL-6、IL-10和TNF-α水平均高于EK组(P值均<0.01)。结论采用EK或IP手术闭合鞘状突内口治疗儿童鞘膜积液,EK手术的应激反应和手术伤害比IP手术更加轻微,促炎因子和抑炎因子更快恢复至术前水平。

在三阴性乳腺癌组织中环氧合酶-2、核因子-KB及血管内皮生长因子的表达

目的探讨环氧合酶-2（COX-2）、核因子-KB（NF—KB）及血管内皮生长因子（VEGF）在三阴性乳腺癌（TNBC）组织中的表达及临床意义。方法选取100例乳腺癌患者，其中三阴性乳腺癌50例，非三阴性乳腺癌50例，采用免疫组织化学法检测乳腺癌组织中NF—KB-p65、COX-2及VEGF的表达，分析相关临床病理资料。结果COX-2在三阴性与非三阴性乳腺癌中的表达分别为76％（38／50）和70％（35／50），差异无统计学意义（P〉0．05），VEGF在三阴性乳腺癌病变和非三阴性乳腺癌病变中阳性表达率分别为60％（30／50）和36％（18／50），表达差异有统计学意义（P〈0．05）。NF．KB在三阴性乳腺癌病变和非三阴性乳腺癌病变中阳性表达率分别为66％（33／50）和32％（16／50），表达差异有统计学意义（P〈0．05）。三阴性乳腺癌组织中乳腺癌中NF—KB与VEGF，COX-2与VEGF表达显著呈正相关。结论三阴性乳腺癌病变中，COX-2、NF-KB及VEGF均呈现高表达，与非三阴性乳腺癌病变组织比较，NF-KB及VEGF表达差异有统计学意义。且NF—κB与VEGF，COX-2与VEGF表达呈明显正相关。

右半结肠炎性肌纤维母细胞瘤一例

目的通过本病例报道,提高对该病的认识、诊断和治疗。方法就我院经病理证实右半结肠肌纤维母细胞瘤的病例1例,结合患者临床病例资料与相关文献报道进行回顾性诊断分析。结果该患者为老年女性,临床表现为腹部肿块,无其他特异性表现,诊断难度大。IMT多发生在儿童及青少年,常见累及器官是肺,右半结肠炎性肌纤维母细胞瘤在临床上罕见。结论炎性肌纤维母细胞瘤发病率低,呈低度恶性,临床表现不典型,影像学检查无特异性,易误诊,确诊仍依赖于病理及免疫组化检查。手术为其有效的治疗手段。有复发倾向,术后随访有重要意义。