人类精子核的研究──100例不育病人精子碱性核蛋白的分析

对１００例随机选择的不育病人精子核碱性蛋白质进行分析，结果表明有５４％病人的碱性蛋白异常，并可将其分为３类：１．组蛋白－精核蛋白（ｈｉｓｔｏｎｅ－ｐｒｏｔａｍｉｎｅ）取代反应受阻，占总病历２３％；２．３种精核蛋白（ＨＰ１，ＨＰ２，ＨＰ３）比例异常，占总病历３０％；３．精核蛋白完全缺失，占总病历１％。文中还对精核蛋白与生育力的关系以及精子碱性核蛋白分析在不育病人诊断中的重要性进行了讨论。

大鼠精核蛋白的纯化

用大鼠睾丸制备长形精子细胞核及用附睾制备的附睾精子核，用盐酸胍法提取总碱性蛋白（Ｔｏｔａｌ ｂａｓｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ，ＴＢＰ）。通过Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００分子筛层析，其第三峰用５％ＴＣＡ沉淀，得到纯大鼠精核蛋白（Ｒａｔ ｐｒｏｔａｍｉｎｅ，ＲＰ）。ＲＰ也可用ＴＢＰ通过ＨＰＬＣ反相柱得到纯化，ＲＰ位于２６％－２８％乙腈梯度。

雷公藤单体T4对大鼠变态期精子细胞核蛋白转换的影响

大鼠喂服雷公藤单体Ｔ４７周后，取睾丸分离长形精子细胞核，取附睾分离精子核，提取总碱性核蛋白（ＴＮＢＰ），经电泳扫描后分析，发现长形精子细胞核ＴＨ／ＲＰ（总组蛋白／大鼠精核蛋白）比值升高，糖核蛋白含量下降，附睾精子核碱性蛋白也发生类似的改变，表明睾丸变态期精子细胞组蛋白一精核蛋白取代反应受阻，进而导致附睾精子核蛋白异常，这可能是Ｔ４导致大鼠不育的重要原因。文中还对精核蛋白与生育力的关系予以讨论。

哺乳类(兔)红细胞分化因子的纯化及特性分析

本文报道从哺乳动物(兔)红细胞分离、提纯红细胞分化因子(ErythroidDifferentiation Factor,简称EDF及对其性质的分析。按Bishop方法给新西兰兔注射盐酸苯肼(2.5％)0.3mL/kg体重/日连续6days致贫血,收集血液用生理盐水洗去白细胞后,得到的网织红细胞用冻融法使细胞裂解,用乙醇、氯仿选择性变性除去血红蛋白,凝胶过滤,连续经DEAE-纤维素及CM-纤维素柱层析,取得较原裂解液纯化了31 000倍的活性物质EDF,产率为9.1％,分子量15kD,在SDS-PAGE电泳图中为单一蛋白带。EDF对热相对稳定,100℃处理10min仍保持一定活性,对蛋白酶敏咸而对DNA酶I及RNA酶不敏感。EDF对体外培养细胞的生长抑制作用已在体外实验体系得到验证。

大鼠精子细胞分化过程中核碱性蛋白的研究

大鼠精子细胞分化过程中核碱性蛋白的研究（中国医学科学院中国协和医科大学药物研究所，北京１０００５０，中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所费仁仁，纪林，陈晖，刘平，陈啸梅，章静波）精子发生可分为精原细胞、精母细胞及精子细胞阶段。在精子细胞分化过...

大鼠精子细胞变态期核蛋白转换的研究

用细胞分离、免疫组织化学及同位素标记方法研究大鼠精子细胞变态期核蛋白转换（ＨＰＲＲ）所取得的结果。用速度沉降法（ｓｔａｐｕｔｍｅｔｈｏｄ）及超声法得到高纯度的睾丸圆形、长形精子细胞核及附睾精子核，提取其总碱性核蛋白（ＴＮＢＰ），电泳分析，发现睾丸圆形精子细胞核内为组蛋白；长形精子细胞核内主要为精核蛋白、少量过渡形蛋白（ＴＰｓ）及组蛋白；附睾精子核中主要为精核蛋白。免疫组织化学研究表明，只有长形精子细胞核内检测到精核蛋白，而圆形精子细胞、精母细胞及精原细胞核均为免疫组织化学阴性反应。用１４Ｃ－精氨酸注入大鼠睾丸后，分离睾丸圆形及长形精子细胞核，提取碱性核蛋白电泳后，测定各蛋白条带的放射量。在长形精子细胞检测到大量放射性精核蛋白存在，表明精核蛋白的生物合成及积聚是在此细胞阶段。上述研究结果表明，在大鼠精子形成中，其核蛋白经历了由组蛋白到精核蛋白的转换过程，精核蛋白是成熟精子的主要核蛋白。本文还对ＨＰＲＲ是精子发生中的薄弱环节和借此进行生育调控的可能性予以讨论。

弱精子症患者精核蛋白含量的分析

目的:研究精核蛋白在男性不育诊治中的意义.方法:对199例临床确诊的弱精子症患者的精液提取精子总碱性核蛋白(简称精核蛋白,TNBP),进行电泳及扫描分析,并用总组蛋白(TH)与总精核蛋白(TP)的比值来表示组蛋白-精核蛋白的取代(HPRR)程度.结果:在199例患者中,42例(21.1%)TNBP含量正常,157例(78.9%)异常,其中99例(49.7%)TH/TP高于正常,属HPRR受阻;45例(22.6%)为HP1/(HP2+HP3)比值升高,属P2型精核蛋白减少;51例(25.6%)HP2+HP3全部缺失;44例(22.1%)TP全部缺失.从TNBP含量异常的157例患者中随机抽出30例进行2～7个月的有效治疗后,再次进行TNBP电泳及扫描分析,发现14例(46.6%)TNBP含量无明显变化;11例(36.6%)显著变化;5例(16.6%)TNBP含量恢复正常.结论:HPRR受阻和P2型精核蛋白异常与男性不育相关,TNBP含量的变化可作为不育患者治疗效果的监测指标之一.

腺嘌呤诱导不育大鼠精子中精蛋白mRNA的研究

目的 :研究正常生育大鼠和腺嘌呤诱导的不育大鼠附睾精子中精蛋白及其 m RNA的含量以及它们的相关性。方法 :大鼠喂服腺嘌呤制备不育动物模型 ,收集对照组和不育组大鼠附睾精子 ,提取总碱性核蛋白 ( TNBP) ,电泳分析 ;提取总 RNA,用 RT- PCR分析精蛋白 m RNA相对含量。结果 :不育组大鼠附睾精子中精蛋白含量明显低于正常组 ( P<0 .0 1 ) ,对精蛋白 m RNA的分析也得到了相似结果 ,正常组和不育组相比较 ,有非常显著差异 ( P<0 .0 0 1 )。结论 :精子中精蛋白 m RNA的相对含量能反映出精子中精蛋白的相对含量 。

服用低剂量醋酸棉酚对正常男性精子碱性核蛋白的影响

目的 研究正常男性服用低剂量醋酸棉酚后对精子碱性核蛋白的影响。方法 志愿者 2 3例 ,其中对照组 8例 ,服药组 15例 ,服药组口服醋酸棉酚剂量为 15 mg/d,服药 12周达起效期后 ,改为 10 mg/d维持至 44周。于服药后 1、4、8、12、16、2 4、36、44周及停药后 10周采集精液 ,对照组于相同时相采取精液 ,分析精子碱性核蛋白的变化。结果 对照组总组蛋白 (TH)与总精核蛋白 (TP)的比值为 0 .17± 0 .0 7,服药组为 0 .6 3± 0 .79;对照组 P1型精核蛋白 (HP1)与 P2型精核蛋白 (HP2 + HP3)的比值为 1.0 5± 0 .2 1,服药组为 1.47± 0 .18;对照组与服药组两组参数相比较差异均有显著性 (P<0 .0 5 ,P<0 .0 1)。停药 10周后 ,服药组两组参数均恢复到正常状态。结论 服用低剂量醋酸棉酚能阻断组蛋白 -精核蛋白取代反应 (HPRR)及影响精核蛋白含量 ,这可能是醋酸棉酚导致不育的重要原因 ;低剂量醋酸棉酚导致的 HPRR及精核蛋白的改变是可逆的。

1050例不育男性精子碱性核蛋白的分析

目的分析不育男性精子碱性核蛋白,评价其作为男性不育症临床诊断指标的可行性。方法提取精子总碱性核蛋白(TNBP),电泳扫描测定各蛋白条带相对含量,用总组蛋白/总精蛋白(TH/TP)及人精蛋白1/人精蛋白2+人精蛋白3(HP1/HP2+HP3)比值评价精子碱性核蛋白相对含量。结果在1050例不育患者中,异常比例达81.05%,其中TH/TP异常53例(占5.05%);HP1/HP2+HP3异常73例(占6.95%);两项指标均异常725例(占69.05%)。结论精子碱性核蛋白有可能作为临床评价精子生育力的重要指标。

大鼠精蛋白基因在MEL细胞中的表达

目的研究大鼠精蛋白(RP)基因在MEL细胞中的表达及其对细胞生长的影响。方法构建RP真核表达载体,并转染MEL细胞。分析细胞生长曲线、分裂指数及在半固体培养基中的集落形成率,并分析RNA的转录水平。结果转染细胞中RP得到了表达,RP表达后MEL细胞增殖率减慢,分裂指数降低以及在半固体培养基中的集落减少,RNA转录下降。结论RP的表达对肿瘤细胞有生长抑制作用。

红细胞分化去核因子:哺乳类红细胞终末分化/肿瘤抑制的调节因子家族及其相关基因的克隆

本文报道哺乳类红细胞终末分化去核因子 (EDDF)调控恶性骨髓瘤细胞的分化以及与 EDDF相关的基因克隆的系列研究结果。以不同分化期哺乳类红细胞为研究对象 ,观察红细胞自然排核前后的细胞形态变化和与之互为对应的物质代谢的改变 ,分析 EDDF与终末分化、核浓缩及自然排核的可能关系 ;用自建的红细胞胞质体杂交模型 ,分别对红白血病和非红系的骨髓瘤细胞进行同种和异种的细胞杂交实验以验证 EDDF的作用规律。结果表明 ,哺乳类红细胞在终末分化不同阶段存在时相相关的分化去核因子家族。这些因子可调控不同分化阶段相关基因的活动 ,且呈时序性出现 ,与血红蛋白表达、细胞核停止分裂转向分化、核偏位、核浓 (固 )缩和自然去核等终末分化特征呈现明显的因果关系。 EDDF活性蛋白可逆转体外培养的肿瘤细胞系 (MEL,K5 6 2 )的恶性生长及诱导终末分化。在上述基础上分别采用不同的分离、提纯及基因克隆路线 ,从人和小鼠红细胞中连续克隆到 5种分化相关基因家族 (MEDDF,HEDDF- 1,HEDRF- 1,HEDRF- 2 ,HCNBP- 1)及其全长序列 ,并经 Gen Bank证实 ,它们均为无同源的新基因序列。

红细胞分化调节因子对体外培养的L929和KB细胞的生长抑制作用

从兔网织红细胞提纯的红细胞分化调节因子(erythroid differentiation factor,EDF),能对体外培养的自发转化成纤维细胞系L929及人鼻咽癌细胞系KB产生作用。当EDF剂量为0.10μg/ml时,可引起L929细胞形态发生改变,并有细胞核固缩现象。第2d的细胞生长抑制率为64.86％,软琼脂集落形成率为0;第5d时细胞增殖为负值。~3H-TdR掺入率明显降低。EDF剂量为0.15μg/ml时,对KB细胞生长已有抑制作用。EDF剂量达0.30μg/ml时,生长抑制明显。以上结果证明了EDF对恶性细胞具有增殖抑制作用。这种作用对不同种类细胞敏感性不同,并且与剂量呈正相关。

红细胞分化(去核)因子对肿瘤细胞生长分化调控的研究

本研究选择终末分化期出现自然去核特征的哺乳类红细胞作为研究细胞分化及其恶性调控的对象。根据众所周知但尚不明机理的这种自然去核现象，和我们在该期观察到的核酸和蛋白质急剧变化，尤其与排核过程相应地出现的胞质特异蛋白质高峰等数据。

大鼠精核蛋白抗血清的制备

用大鼠精核蛋白（Ｒａｔ Ｐｒｏｔａｍｉｎｅ，ＲＰ）－核糖核酸（ＲＮＡ）复合物（ＲＰ－ＲＮＡ Ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ）免疫大鼠，得到了特异的抗ＲＰ抗血清，并用Ｉｍｍｕｎｏｄｏｔｔｉｎｇ和Ｉｍｍｕｎｏｂｌｏｔｔｉｎｇ方法验证了其特异性。该抗血清和ＲＰ有特异的反应，并和哺乳动物小鼠和羊的精核蛋白有一定程度交叉反应，而与体细胞类型核蛋白（Ｈ１，Ｈ２ａ，Ｈ２ｂ，Ｈ３，Ｈ４）无交叉反应。并对制备该抗血清的意义予以讨论。

人磷酸二酯酶同工酶3A在昆虫杆状病毒系统中的表达

目的利用杆状病毒表达系统探讨人磷酸二酯酶同工酶3A(HPDE3A)在Tn细胞中的表达。方法用重组HPDE3A杆状病毒感染昆虫Tn细胞进行蛋白表达,通过RTPCR,SDSPAGE和Westernblotting技术检测HPDE3A表达情况。结果重组杆状病毒在感染Tn细胞后形态变化明显,获得表达产物,RTPCR扩增结果证实了Tn细胞中HPDE3A的mRNA水平增高,Tn细胞能够表达出与HPDE3A多克隆抗体结合的蛋白,蛋白分子质量约为120kD。结论HPDE3A在昆虫杆状病毒表达系统中可以稳定表达,为进一步研究HPDE3A的生物学活性及筛选HPDE3A抑制剂奠定了基础。