经皮致敏小鼠肠道过敏模型的建立与评价

目的建立经皮致敏小鼠肠道过敏模型。方法首先比较经皮致敏(耳部与背部皮肤)方式与腹腔注射致敏方式诱导小鼠肠道过敏的程度。选用敏感性更高且操作简单易行的耳部皮肤致敏方式,即采用卡泊三醇软膏引起小鼠耳部皮肤炎症,同时涂抹卵清蛋白(ovalbumin,OVA)致敏小鼠两周。通过对经皮致敏小鼠灌胃OVA攻击后肠道过敏症状、空肠毛细血管渗透性、血浆总IgE(total IgE,tIgE)和小鼠肥大细胞蛋白酶-1(mouse mast cell protease-1,mMCP-1)水平以及空肠组织病理变化等指标对模型进行评价。结果经皮致敏肠道过敏模型相比于腹腔致敏模型可诱导更高的血浆tIgE和mMCP-1水平。与对照组相比,经皮致敏OVA灌胃攻击后模型组小鼠出现快速抓挠、弓背、腹泻等肠道过敏症状,直肠温度下降(约1.2℃)和空肠毛细血管通透性增加(约2倍),血浆tIgE 和mMCP-1显著升高,空肠粘膜受损、炎性细胞浸润、肥大细胞增多(约5倍)。结论经皮致敏肠道攻击的小鼠模型具有典型的食物肠道过敏病理特征,代表了皮肤暴露于过敏原的致敏途径,为食物过敏的机制研究和防治措施提供了新的研究工具。

基于SSL的安全邮件解决方案

分析了现存的安全电子邮件解决方案,发现它们一般只对邮件体进行加密和签名,而没有考虑邮件头的安全性。在某些环境下,邮件头也需要安全保密。研究了安全套接字层协议(SSL),提出了一种基于SSL协议的安全邮件解决方案,既增强了邮件体的安全性,也保证了邮件头的安全性。

VC中用ADO实现大数据的存取

在利用VC进行数据库编程时,常常需要存储较大的二进制数据对象,比如:图像、音频、视频文件或其它二进制数据,这些数据称之为二进制大对象BLOB(BinaryLargeObject),其存取的方式与普通数据有所区别,它是作为OLE字段在数据库中存储,通过数据集对象的成员变量自动变换得到的图像数据,得到的数据并不能直接显示,如何处理这种数据,一直是数据库编程中的一个难点,目前关于VC进行数据库编程的资料不少,但很少涉及此类数据的操作。文章针对这一现状,并结合自己开发的一个项目,解决了如何显示access数据库中的图像这一问题。

基于以太网的TCN网络管理系统

对TCN网络及其现场总线网络技术的发展进行了研究,设计了一个基于以太网技术利用PC设备对TCN网络进行远程监控、管理的系统,论述了该系统的框架结构、通信过程及管理功能,为TCN网络的测试、调试、运行、维护提供了方便。

DTECS列车网络应用开发平台软件的研究与实现

文章对TCN标准和DTECS进行了研究,分析了目前DTECS产品运营亟待解决的问题,设计了一个用于DTECS应用开发的平台软件,论述了软件系统设计和实现的关键技术。该软件的实现为列车网络的配置、调试、运行和维护提供了便利和保障,是提升DTECS的重要方面。

全蝎水提物对巨噬细胞活化作用研究

目的:观察全蝎水提物(Buthus martensii water extract,BMWE)在体外对小鼠巨噬细胞株RAW264.7的活化作用。方法:MTT法测定细胞活性;采用FITC标记的酵母测定吞噬活性;利用Griess试剂和ELISA方法测定细胞上清NO、TNF-α和IL-6释放量。结果:BMWE在不影响细胞活力的剂量范围内可增强正常及免疫抑制的RAW264.7细胞吞噬荧光酵母能力(P<0.01),增加RAW264.7细胞NO释放量(P<0.01),促进RAW264.7细胞TNF-α和IL-6产生(P<0.01),均具有良好的量效关系。结论:BMWE可明显提高巨噬细胞吞噬功能与分泌能力,活化巨噬细胞,此作用与全蝎传统用于治疗疮疡、瘰疬,现代用于肿瘤的临床应用相关。

一种以虾原肌球蛋白为致敏原的Th2反应小鼠模型的建立

目的:采用虾原肌球蛋白为致敏原建立Th2反应小鼠模型。方法:虾原肌球蛋白腹腔注射小鼠6周诱导Th2反应,ELISA测定小鼠血清总IgE、sI gE和sI gG水平、脾淋巴细胞分泌Th1和Th2细胞因子的含量,采用流式细胞术检测血液中嗜碱性粒细胞的活化。结果:与对照组比较,致敏6周的小鼠血清总IgE、sI gE和sI gG(sI gG 1、sI gG 2a和sI gG 2b)均显著升高;脾淋巴细胞在抗原刺激后分泌Th2细胞因子(IL-4、IL-5、IL-10和IL-13)增加,而Th1细胞因子INF-γ则出现明显降低;血液中嗜碱性粒细胞表面标志物CD200R和CD41表达增强。结论:成功建立一种以虾原肌球蛋白为致敏原的Th2反应小鼠模型。

虾原肌球蛋白及其IgE单克隆抗体建立I型过敏反应体内外模型

目的利用虾原肌球蛋白及其Ig E单克隆抗体建立I型过敏反应体内外模型。方法采用等电点沉淀法制备刀额新对虾原肌球蛋白,利用杂交瘤技术制备抗虾原肌球蛋白Ig E单克隆抗体。建立虾原肌球蛋白攻击Ig E单抗致敏的RBL-2H3细胞模型,测定β-氨基己糖苷酶释放量。利用虾原肌球蛋白及其Ig E单抗建立被动全身过敏反应小鼠模型,监测抗原攻击后30 min内肛温的变化。结果 Ig E单抗致敏的RBL-2H3细胞在虾原肌球蛋白攻击后发生脱颗粒,β-氨基己糖苷酶释放量明显增加。虾原肌球蛋白及其Ig E单抗诱导了小鼠被动全身过敏反应,抗原攻击后小鼠肛温平均下降约1.44℃。结论虾原肌球蛋白及其Ig E单克隆抗体成功建立了I型过敏反应体内外模型。

一种高效实用的证书验证机制的研究

在公钥基础设施当中,数字证书有可能在没有到期就要撤销它。PKI主要提供了两种证书撤销方法,就是周期性发布的证书撤销列表CRL和在线证书状态协议OCSP。详细地分析了CRL和OCSP两种证书撤销机制的优点和局限性,结合两者各自的优点,提出了一个高效实用的证书验证机制。给出了该机制的工作原理,并详细地介绍了的实现方法。

一种多功能车辆总线周期扫描表优化设计方案

介绍了多功能车辆总线有关介质分配的基本概念,分析了按照IEC 61375-1标准定义的基本规则所构造的周期扫描表存在的缺陷。提出了一种将数据量最大的端口数据安排在当前网络负荷最小的基本周期发送的周期扫描表优化设计方案,采用该方案生成的周期扫描表中的周期变量分布均匀,各个基本周期内网络负荷基本均衡,从而实现MVB网络实时调度的性能优化。

基于智能卡技术的安全电子邮件系统

针对目前常用的电子邮件系统存在密钥产生、传递和保管问题且不能安全方便地随身携带,本文提出了一个基于智能卡技术的安全电子邮件系统,该系统在邮件收发终端引入智能卡技术,保证了密钥等机密信息的安全,通过对邮件进行加密、解密和认证,有效地解决了邮件在存储和传输过程中的安全性问题。

PMI系统中RBAC的设计与实现

描述了授权管理基础设施的实现基础,基于角色访问控制的策略实现。首先对授权管理基础设施做了一个简单的介绍,然后具体设计和实现了这个基于RBAC的PMI系统,并详细介绍了实现PMI系统的角色指派属性证书与角色规范属性证书,以及在PMI系统中实现RBAC的六大策略,并设计出了具体的API函数。

基于OCSP的域间证书验证的研究

介绍了PKI中两种证书撤销方式以及它们的特点,分析了交叉认证中证书验证存在的问题。根据在线证书状态协议(OCSP)的要求以及使用穿越NAT技术,提出了一个不同信任域之间证书撤销信息的验证机制。

ASP在软件升级中的应用和实现

探讨了ASP的特点、ASP访问数据库基本原理和方法。并利用ASP实现了在线升级软件中的身份认证及注册。

注射用灯盏花素对脂多糖致巨噬细胞炎症损伤的抑制作用

目的研究注射用灯盏花素(BSI)对脂多糖(LPS)致巨噬细胞炎症损伤的抑制作用及其机制。方法采用巨噬细胞集落刺激因子刺激小鼠骨髓细胞获得小鼠髓源巨噬细胞。BSI 6.25～400 mg·L^(-1)(终浓度)与小鼠巨噬细胞RAW264.7孵育24 h,MTT法测定细胞存活率。将小鼠巨噬细胞RAW264.7和髓源巨噬细胞与BSI 1.5625～50 mg·L^(-1)和LPS 40μg·L^(-1)共孵育24 h,Griess法测定上清炎症因子一氧化氮(NO)水平,ELISA法测定肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)水平。ICR雄性小鼠一次性ip给予BSI 2.5,5和10 mg·kg^(-1),0.5 h后尾静脉注射LPS 5 mg·kg^(-1)制备内毒素血症模型,给予LPS 3 h后,测定血清NO,TNF-α和IL-6水平。将小鼠巨噬细胞RAW264.7与BSI 1.5625～50 mg·L^(-1)和LPS 40μg·L^(-1)共孵育24 h,L-012荧光染色法测定胞内活性氧簇(ROS)浓度,JC-1荧光染色法检测胞内线粒体膜电位(MMP)水平,荧光素酶催化底物荧光素发光反应检测胞内ATP水平,光泽精化学发光法检测胞内NADPH氧化酶活性。还原型辅酶Ⅰ(NADHⅠ)-吩嗪硫酸甲酯(PMS)体系还原氮蓝四唑(NBT)法测定BSI清除超氧阴离子的作用。结果 BSI<100 mg·L^(-1)时对RAW264.7细胞存活率无影响。BSI 25和50 mg·L^(-1)可降低巨噬细胞RAW264.7上清NO含量(P<0.01),BSI 1.5625～50 mg·L^(-1)对小鼠巨噬细胞RAW264.7和髓源巨噬细胞上清中TNF-α和IL-6均无明显抑制作用;BSI 1.5625～50 mg·L^(-1)对小鼠髓源巨噬细胞上清NO,TNF-α和IL-6水平均无明显抑制作用。在LPS致内毒素血症小鼠模型上,BSI 2.5,5和10 mg·kg^(-1)对LPS诱导的血清NO,TNF-α和IL-6升高也无明显抑制作用。BSI可显著抑制LPS所致RAW264.7细胞胞内ROS上升,并对抗MMP与ATP的下降(P<0.01)。进一步机制研究表明,BSI 1.5626～50 mg·L^(-1)可显著抑制LPS所致RAW264.7细胞NADPH氧化酶活性升高(P<0.01);另外,BSI 3.125～50 mg·L^(-1)具有清除超氧阴离子的作用(P<0.01)。结论虽然BSI对LPS诱导体内外炎症无明显抗炎作用,但可通过抑制LPS所致胞内ROS升高而保护线粒体功能,发挥细胞保护作用。

双黄连注射液对Ⅰ型超敏反应性炎症的抑制作用

目的探讨双黄连注射液(SHLI)对Ⅰ型超敏反应性炎症的作用。方法以抗虾原肌球蛋白(ST)多抗血清致敏大鼠嗜碱性粒细胞性白血病细胞RBL-2H3,次日加入SHLI 0.5%～2.0%孵育30 min,再以ST攻击诱导其脱颗粒,荧光法检测上清β-氨基己糖苷酶含量;以佛波酯(PMA)/A23187刺激人外周血嗜碱性白血病细胞KU812,用ELISA测定其分泌肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和前列腺素E2(PGE2)等炎症介质的水平;建立抗ST多抗血清和ST诱导的小鼠Ⅰ型超敏反应足肿胀模型,观察ip给予0.5%,1.0%和2.0%SHLI 3 d对ST攻击后1 h(速发相)和24 h(迟发相)小鼠足容积的影响。结果与模型组比较,0.5%,1.0%和2.0%SHLI均明显抑制ST所致RBL-2H3细胞β-氨基己糖苷酶的释放,荧光值分别下降16%,31%和51%(P<0.01),并显著减少PMA/A23187诱导的KU812细胞上清中炎症介质TNF-α,IL-6和PGE2的含量,TNF-α分别降低35%,55%和69%(P<0.01),IL-6分别降低29%,51%和74%(P<0.01),PGE2分别降低31%,40%和55%(P<0.01)。体内实验结果显示,速发相时SHLI 2.5和5.0 mL·kg-1使足容积差分别降低69%和83%(P<0.01),迟发相时分别降低70%和100%(P<0.05,P<0.01)。结论 SHLI可抑制Ⅰ型超敏反应性炎症。

网络控制应用开发软件合格性测试浅析

按照网络应用开发软件的高可靠性要求,阐述了软件测试流程与软件测试用例设计方法等方面的内容,并对测试实践经验加以总结。通过网络控制应用开发软件合格性测试,软件可靠性得到有效保证。

RBL-2H3细胞不适合用于类过敏模型的建立

目的考察RBL-2H3细胞是否适用于建立类过敏反应模型。方法用荧光定量聚合酶链反应考察RBL-2H3细胞上Mas相关G蛋白偶联受体(Mas-related G protein cou-pled receptor,Mrgpr)B2的表达情况;用显微镜观察和MTS法考察Compound 48/80对RBL-2H3细胞活力的影响;测定不同浓度Compound 48/80刺激RBL-2H3细胞脱颗粒释放的β-己糖胺酶含量,对比RBL-2H3细胞、人肥大细胞系LAD2和大鼠腹腔肥大细胞(rat peritoneal mast cells,RPMCs)对Compound 48/80响应性的差异。结果RBL-2H3细胞可表达MrgprB2受体。Compound 48/80能剂量依赖性地诱导RBL-2H3细胞释放β-己糖胺酶,但在高剂量(≥20 mg·L^-1)时对RBL-2H3的细胞活力产生明显影响,此时释放的β-己糖胺酶应当是由于其细胞毒作用引起细胞破裂所致。同在无毒剂量(10 mg·L^-1)的Compound 48/80刺激下,LAD2和RPMCs的响应性良好,β-己糖胺酶释放量分别为空白对照的15.02倍和16.05倍,而RBL-2H3细胞仅为空白对照的2.35倍。结论RBL-2H3细胞对Compound 48/80的响应性差,表明其并不适用于建立类过敏反应模型。

厚朴水提物在Caco-2细胞模型中的转运特征研究

目的研究厚朴水提物经Caco-2单层细胞模型双向转运的特征及对细胞膜上P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)活性的影响。方法在经验证的Caco-2细胞单层模型中进行厚朴水提物双向转运实验,根据水提物总抗氧化能力标准曲线计算其转运量,并计算表观渗透系数(P’app)及溢流率(ER)。以P-gp底物罗丹明123(Rh123)在细胞内的蓄积与外排实验来判断厚朴水提物对Caco-2细胞膜上P-gp活性的影响。结果厚朴水提物P’app(AP→BL)值在1×10-5 cm/s左右,与质量浓度呈正相关,ER值远小于2,对Rh123的蓄积和外排均没有影响。结论厚朴水提物中与抗氧化作用有关的活性成分群可被较好地吸收,以被动扩散形式转运,不是P-gp底物,也不影响P-gp活性。建立了一种考察厚朴水提物转运特征的新方法,为临床安全合理使用厚朴提供了药动学研究基础。

乌头碱配伍人参皂苷Rg_1对心肌细胞毒效浓度研究

目的探究乌头碱与人参皂苷Rg1配伍对正常心肌细胞和心力衰竭心肌细胞活力及细胞内离子的影响。方法原代培养正常心肌细胞,并建立心力衰竭心肌细胞模型,采用MTT比色法筛选乌头碱及人参皂苷Rg1的毒效浓度;采用MTT比色法和试剂盒观察乌头碱和人参皂苷Rg1毒-效及效-效浓度配伍对心肌细胞活力和细胞内Na+,K+,Ca2+,Mg2+浓度的影响。结果人参皂苷Rg1的最小毒性浓度为1×10-5mol/L,药效浓度为1×10-8mol/L;乌头碱药效浓度为1×10-9mol/L;乌头碱与人参皂苷Rg1毒-效浓度配伍可分别减轻乌头碱和人参皂苷Rg1对正常心肌细胞的毒性,且均以1∶2(Ac∶Rg1)配伍效果最佳;两者效-效浓度配伍可增强心力衰竭心肌细胞活力,且以1∶1(Ac∶Rg1)配伍效果最佳。结论乌头碱与人参皂苷Rg1配伍对心肌细胞具有减毒增效作用,其机制与调节心肌细胞内Na+,Mg2+,K+,Ca2+浓度有关。