HO-1对脂多糖诱导大鼠肝细胞内质网应激的作用

目的探讨抗氧化蛋白血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导大鼠肝细胞内质网应激的影响。方法大鼠正常肝细胞系BRL细胞培养,筛选有效HO-1 si RNA。用LPS、LPS+HO-1 si RNA、HO-1 si RNA和PBS溶剂分别处理大鼠肝细胞。用台盼蓝拒染实验检测细胞活力,Hoechst 33258荧光染色检测细胞凋亡,Western印迹法检测GRP78、CHOP、caspase-12以及HO-1蛋白表达。结果 LPS能剂量依赖和时间依赖性诱导大鼠肝细胞HO-1蛋白表达上调,引起GRP78、CHOP和caspase-12蛋白表达增高,细胞活力降低和细胞凋亡率增高;HO-1 si RNA预处理明显抑制LPS对HO-1蛋白表达上调的诱导作用,并加剧LPS引起的内质网应激和细胞损伤。结论 HO-1抑制LPS诱导大鼠肝细胞内质网应激介导的细胞损伤。

大鼠视神经挫伤引起视网膜内质网应激

目的 ：观察大鼠视神经挫伤后视网膜内质网应激（endoplasmic reticulum stress,ERS）变化。方法 ：复制大鼠视神经挫伤（optic nerve crush,ONC）模型。实验分正常对照组、假手术组和ONC组。用TUNEL方法检测细胞凋亡;用蛋白印迹技术检测凋亡相关蛋白表达和ERS相关蛋白表达;观察大鼠视网膜病理变化、检测神经节细胞（retinal ganglion cells,RGCs）数量和视网膜内侧部分厚度（retinal thickness of inner part,RTIP）。结果 ：与正常对照组比较,假手术组大鼠视网膜RGCs数量、RTIP未见明显变化;与假手术组比较,ONC 7～21 d组大鼠RGCs数量、RTIP分别呈时间依赖性数量减少、厚度变薄,ONC 3 d组TUNEL阳性细胞数量明显增多、主要分布于RGCs,细胞凋亡相关蛋白Cleaved caspase-3、Cleaved PARP-1和ERS相关蛋白GRP78、CHOP和caspase 12蛋白表达明显上调。结论 ：ONC能够诱导大鼠视网膜发生ERS,ERS可能是神经节细胞死亡的机制之一。

硫化氢引起大鼠肝细胞非内质网应激依赖性细胞凋亡

目的 ：探讨内质网应激（endoplasmic reticulum stress,ERS）在外源性硫化氢（hydrogen sulfide,H2S）引起大鼠肝细胞凋亡中的作用。方法：培养的大鼠肝细胞株BRL用50～2 000μmol/L H2S供体硫氢化钠（sodium hydrosulfide,Na HS）分别处理细胞1、12 h,用等体积的Na HS溶剂为对照。采用CCK8方法检测细胞活力,蛋白印迹技术检测细胞凋亡蛋白caspase-3、PARP-1、Bax和Bcl-2,ERS相关蛋白GRP78、CHOP和caspase-12,转录因子Nrf 2及其调控抗氧化蛋白Trx-1和HO-1的表达变化。结果：与对照组比较,50～100μmol/L Na HS无细胞毒效应,200～2 000μmol/L Na HS引起细胞活力明显降低;200～2 000μmol/L Na HS引起细胞激活型caspase-3及其底物PARP-1、Bax明显上调,Bcl-2表达下调,对ERS相关蛋白GRP78、CHOP和caspase-12蛋白表达无明显影响;50～2 000μmol/L Na HS能剂量依赖性引起转录因子Nrf 2及其调控抗氧化蛋白Trx-1和HO-1明显上调。结论：高浓度H2S可引起大鼠肝细胞非内质网应激依赖性细胞凋亡。

护理人数的法医学鉴定问题探讨

在人身损害赔偿案件的法医学鉴定中经常涉及护理方面的鉴定,目前护理期限、护理依赖的鉴定均已有专门技术标准,但护理人数如何评定尚未见明确的规定,在鉴定实践中有时易引发混乱现象,可能侵害相关当事人的合法权益,甚至严重影响司法鉴定的公正性与司法权威。从司法鉴定护理的内涵入手,就基础护理与生活护理、不同住院病房以及不同病情的护理需要、非住院期间与康复期间的护理需要,以及护理依赖下的护理需要等情形进行分析,探讨护理人数的鉴定中应以支持一人护理为基本原则,同时在特殊情形下可考虑设置两人护理,在选择护工或者家属护理方面也应加以适当关注。

6例外伤与主动脉夹层伤病关系法医临床学分析

通过回顾性分析6例外伤与主动脉夹层伤病关系鉴定,结合主动脉夹层形成的危险因素及发病机制,参考主动脉夹层法医病理学相关文献,探析外伤与主动脉夹层之间伤病关系的法医临床学鉴定思路。从年龄、外伤、疾病三个方面因素结合其他因素进行综合评析外伤与主动脉夹层之间伤病关系及参与度,以缩小同类鉴定差异,减少鉴定纠纷,保护当事人正当利益,维护司法鉴定公正性。

外伤后脑脂肪栓塞综合征致智能损害伤残等级评定1例

外伤后脂肪栓塞综合征临床时有发生,常继发于长骨骨折,是指来自骨髓与其他组织的脂肪、脂类物质栓塞肺、脑、心、肝、肾等器官的血管所导致的呼吸窘迫、中枢神经系统或其他脏器功能障碍为主要表现的一组临床征象[1-2]。当脂肪颗粒进入体循环,栓塞于脑部出现中枢神经系统功能障碍称为外伤后脑脂肪栓塞综合征[3]。在司法鉴定中,鲜有外伤后脑脂肪栓塞综合征致智能损害的报道,遂将1 例下肢长骨骨折并发脑脂肪栓塞综合征后遗智能损害的案例报告如下。

伤残鉴定标准中肢体缺失的相关问题探讨

在对不同原因所致的人体损伤作伤残等级鉴定时,我国规定有不同的伤残等级鉴定标准,各类标准对肢体缺失均有较多的条款设置,且据不同的肢体缺失程度有多种伤残等级划分;但对关节部位肢体缺失的认定问题因缺乏统一认识和精细规定,常致同一病例因不同的鉴定机构和鉴定人适用不同的鉴定条款而出现伤残等级不同的结果,故当比较分析现行常用的伤残鉴定标准中涉及关节部位肢体缺失的相关条款,据该标准的文本和语义,结合司法鉴定中的实际问题展开相关探讨,以使鉴定结果更加科学准确,避免和减少不必要的争议,并期能有益于相关条款的精细化修改。

大鼠视神经挫伤致视网膜硫化氢合成酶表达变化

目的探讨大鼠视神经挫伤后视网膜硫化氢合成酶胱硫醚γ-裂解酶(cystathionineγ-lyase,CSE)、胱硫醚β-合成酶(cystathionine β-synthase,CBS)和3-巯基丙酮酸硫基转移酶(3-mercaptopyruvate sulfur-transferase,3-MST)的表达变化。方法建立大鼠视神经挫伤模型。将大鼠分为正常对照组、视神经挫伤组和假手术组。观察大鼠视网膜的组织病理学变化,检测视网膜神经节细胞数量和视网膜内侧部分厚度。用实时荧光定量PCR技术检测CBS、CSE和3-MST的mRNA表达变化。结果正常对照组大鼠视网膜组织结构正常,假手术组仅有轻微变化。与假手术组比较,视神经挫伤后各组大鼠视网膜出现明显损伤,视网膜神经节细胞数量呈时间依赖性减少且视网膜内侧部分厚度呈进行性变薄。正常对照组大鼠视网膜存在CSE、CBS和3-MST mRNA的基础表达。与正常对照组比较,假手术组CSE、CBS和3-MST的mRNA表达无明显变化。与假手术组比较,CBS mRNA表达在视神经挫伤后3 d、7 d和14 d呈时间依赖性上调;CSEmRNA表达在伤后7 d达到峰值,14 d时有所下降;3-MST mRNA表达在视神经挫伤后3 d和7 d有上调的趋势,14 d时有明显上调。结论大鼠视神经挫伤后视网膜硫化氢合成酶CBS、CSE和3-MST表达上调,这可能引起视网膜局部内源性硫化氢生成增多并产生代偿性保护效应。

脂多糖诱导大鼠肝细胞PARP-1依赖性细胞死亡的初步研究

目的:观察脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对大鼠肝细胞聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1[poly(ADP-ribose)polymerase-1,PARP-1]依赖性细胞死亡的影响。方法 :大鼠肝细胞株BRL细胞常规培养,用0.1~10 mg/L LPS处理大鼠肝细胞12 h或24 h,部分实验中大鼠肝细胞LPS处理前1 h先用PARP-1抑制剂PJ-34或3-氨基苯甲酰胺(3-aminobenzamide,3-AB)预处理。用CCK-8试剂盒检测细胞活力。用蛋白免疫印迹技术检测蛋白表达。结果 :与溶剂对照组比较,LPS能剂量和时间依赖性引起大鼠肝细胞PARP-1蛋白表达上调和PARP-1活性产物多聚二磷酸核糖[poly-(ADP-ribose),PAR]修饰蛋白数量增多,大鼠肝细胞活力降低以及反映细胞凋亡的PARP-1裂解片段增多,3-AB或PJ-34部分翻转LPS诱导的大鼠肝细胞的活力降低。结论:LPS能诱导大鼠肝细胞PARP-1依赖性细胞死亡。

硫氧还蛋白-1小干扰RNA加剧脂多糖诱导的大鼠肝细胞内质网应激

目的探讨脂多糖（LPS）诱导大鼠肝细胞内质网应激（ERS）过程中硫氧还蛋白-1（Trx-1）的变化及其作用机制。方法①体外培养大鼠肝细胞株BRL，取部分细胞，分别用0．1、1．0、5．0、10．0、20．0mg／LLPS处理细胞12h；另取部分细胞，用10．0mg／LLPS分别处理细胞1、3、6、12、24h；均以LPS溶剂磷酸盐缓冲液（PBS）为对照，从量效和时效的角度观察LPS对Trx-1蛋白表达和ERS的影响。②体外培养大鼠肝细胞株BRL，分为溶剂对照组、阴性小干扰RNA（siRNA）对照组、Trx-1 siRNA对照组、LPS刺激组、阴性siRNA＋LPS组、Trx-1 siRNA＋LPS组，Trx-1 siRNA或阴性siRNA转染24h后用10．0mg／LLPS作用12h，观察Trx-1是否参与LPS诱导大鼠肝细胞ERS。用蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）检测Trx-1、硫氧还蛋白还原酶（TrxR）和硫氧还蛋白结合蛋白（TXNIP）的蛋白表达，ERS标志性蛋白葡萄糖调节蛋白78（GRP78）和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶12（caspase-12）以及细胞凋亡执行蛋白caspase-3及其底物多聚二磷酸腺苷聚合酶-1（PARP-1）裂解片段的表达；采用细胞计数试剂盒检测细胞活性。结果①与溶剂对照组比较，LPS可诱导大鼠肝细胞Trx-1和TrxR蛋白表达上调、TXNIP蛋白表达下调，引起ERS相关蛋白GRP78、caspase-12上调，抑制细胞活性，且具有一定的剂量和时间依赖效应。②与溶剂对照组比较，除Trx-1及ERS相关蛋白外，LPS还可诱导大鼠肝细胞caspase-3及PARP-1裂解片段明显上调，同时抑制细胞活性；Trx-1 siRNA转染预处理24h能明显引起大鼠肝细胞Trx-1蛋白表达沉默（A值：0．249±0．017比0．531±0．030，P〈0．01），使LPS诱导的ERS及凋亡相关蛋白表达进一步上调[GRP78（A值）：1.247±0.124比0．786±0．048，caspase-12（A值）：0．810±0．017比0．578±0．013，caspase-3（A值）：0．508±0．008比0．308±0．009，PARP-1裂解片段（A值）：0．598±0．013比0．507±0．016，均P〈0．01]，进一步降低肝细胞活性[（61．79±1．91）％比（75．29±2．05）％，P〈O．01]。结论LPS可呈剂量依赖性和时间依赖性上调Trx-1和ERS相关蛋白表达，并导致细胞损伤；Trx-1 siRNA可加剧LPS诱导的大鼠肝细胞ERS和细胞凋亡，说明Trx-1可能参与了LPS导致的ERS和细胞损伤过程。

膝外翻与股骨颈骨折的因果关系鉴定1例

1案例1.1简要案情张某,男,11岁。2014年8月在购物广场玩耍时被铁链绊倒致左股骨颈骨折,随后送至医院行左股骨颈骨折切开复位内固定术。2015年6月摄片提示左股骨头缺血性坏死。2018年3月因左膝外翻畸形行左胫腓骨截骨矫形术。张某家属认为张某左膝外翻畸形系2014年8月其左股骨颈骨折所致,遂诉至法院要求赔偿。某人民法院委托本所对张某左膝外翻畸形与其左股骨颈骨折之间是否存在因果关系进行法医学鉴定。