中药护心康对TLR4基因敲除小鼠动脉粥样硬化模型Wnt5a表达的影响

目的探讨TLR4基因敲除小鼠动脉粥样硬化模型Wnt5a表达的变化及中药护心康的干预作用。方法SPF级TLR4基因敲除小鼠共68只,随机取10只为对照组,予以普通饲料喂养;其余58只予以高脂饲料建立动脉粥样硬化模型,喂养13周后从造模动物中随机选取5只解剖观察其胸主动脉,光镜下发现粥样斑块为造模成功。造模成功动物随机分为模型组、护心康组、阿托伐他汀组,Wnt抑制剂WIF组,每组12只,分别予以相应处理。正常组不做处理,模型组予以生理盐水灌胃并腹腔注射,其余各组均予相应药物灌胃和腹腔注射处理,灌胃容积均为0. 5 ml、腹腔注射容积均为0. 3 ml,每日1次。治疗8周后处死小鼠,心脏采血,酶比色法检测血脂;取胸主动脉,光镜下观察动脉粥样硬化形成情况;免疫组化法检测斑块中Wnt5a蛋白的表达。结果 (1)血脂检测:造模后动物胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白和高密度脂蛋白水平比正常组明显升高(P <0. 05);阿托伐他汀和护心康可以降低胆固醇和低密度脂蛋白水平(P<0. 05),WIF对二者的降低作用不明显;三种药物对甘油三酯和高密度脂蛋白的影响相对较小。(2)光镜观察:正常组无斑块形成,模型组可见内膜增厚,大量斑块明显形成,血管腔明显减小;各药物干预组斑块病变相对较轻。(3)Wnt5a蛋白表达:模型组中Wnt5a蛋白表达明显高于正常组(P <0. 01);与模型组相比,三种药物均能降低Wnt5a,Wnt抑制剂WIF降低作用较强(P <0. 01),护心康组和阿托伐他汀组也有明显的降低作用(P <0. 05); WIF降低Wnt5a的作用较阿托伐他汀强(P <0. 05)。结论 TLR4基因敲除小鼠动脉粥样硬化时Wnt5a表达明显升高,中药护心康能降低血脂和Wnt5a在动脉粥样硬化中的表达,从而可以减轻动脉粥样硬化的形成。

护心康对TLR4^(-/-)小鼠动脉粥样硬化模型FZD的影响

目的探讨动脉粥样硬化Toll样受体4基因敲除(TLR4-/-)小鼠模型卷曲蛋白(FZD)变化特征及护心康对动脉粥样硬化的干预作用。方法 SPF级TLR4-/-小鼠70只,随机选择12只纳入正常对照组,予以普通饲料喂养;其余58只予以高脂饲料造模,喂养13周后随机选择5只解剖观察胸主动脉,光镜下发现粥样斑块为造模成功。造模成功动物随机分为模型组、护心康组、阿托伐他汀组,Wnt抑制因子(WIF)组,每组12只,分别予以相应处理。处理8周后处死小鼠,心脏穿刺采血检测血脂水平;取胸主动脉,光镜下观察动脉粥样硬化斑块形成情况;免疫组织化学法检测斑块中FZD蛋白的表达。结果模型组胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白和高密度脂蛋白水平较正常对照组明显升高(P<0.05);阿托伐他汀和护心康可降低胆固醇和低密度脂蛋白水平(P<0.05),WIF对二者的降低作用不明显(P>0.05);3种药物对三酰甘油和高密度脂蛋白的影响相对较小。正常对照组无动脉粥样斑块形成,模型组可见内膜增厚,大量斑块明显形成,血管腔明显减小;各药物干预组斑块病变相对较轻。模型组FZD蛋白表达水平明显高于正常对照组(P<0.05);与模型组相比,3种药物处理组FZD水平均降低(P<0.05),但3种药物处理组FZD水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论动脉粥样硬化TLR4-/-小鼠模型胸动脉FZD表达水平明显升高,护心康能降低模型小鼠血脂和FZD表达水平,从而减缓动脉粥样硬化的形成。

护心康对TLR4基因敲除小鼠动脉粥样硬化模型Wnt1的影响

目的:探讨TLR4基因敲除小鼠动脉粥样硬化时Wnt1的变化及护心康的干预作用。方法:SPF级TLR4基因敲除小鼠共70只,随机取12只为正常组,予以普通饲料喂养;其余58只予以高脂饲料造模,喂养13周后从造模动物中随机选取5只,观察胸主动脉,光镜下发现粥样斑块为造模成功。造模成功动物随机分为模型组、护心康组、Wnt抑制剂WIF组、阿托伐他汀组,每组12只,分别予以相应处理。干预8周后处死小鼠取胸主动脉,光镜下观察动脉粥样硬化形成情况;免疫组化法检测斑块中Wnt1蛋白的表达。结果:(1)光镜观察:正常组未见动脉粥样硬化;模型组可见动脉内膜增厚,粥样斑块形成,血管腔减小;各药物干预组斑块病变相对较轻。(2)Wnt1蛋白表达:高脂造模后,模型组中Wnt1蛋白表达明显高于正常组(P<0.01);治疗后Wnt1表达明显下降,与模型组比较,WIF组降低显著(P<0.01),护心康组和阿托伐他汀组的Wnt1表达均降低(P<0.05);WIF治疗后,Wnt1降低较其他治疗组明显(P<0.05),护心康组和阿托伐他汀组Wnt1表达比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:Wnt1在TLR4基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块中表达升高,护心康能降低Wnt1的表达,从而可以减轻动脉粥样硬化的形成。

护心康对氧化型低密度脂蛋白刺激单核细胞Wnt1表达的影响

目的研究护心康对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激单核细胞无翅和整合素1(Wnt1)的影响,探讨其抗动脉粥样硬化的机制。方法采用TOLL样受体4(TLR4)基因敲除小鼠24只,随机分为正常组和护心康组,每组12只。分别以蒸馏水和护心康连续灌胃7 d,末次灌胃1 h后采血并分离血清。培养小鼠外周静脉血单核细胞,随机分为正常组、模型组、对照组、护心康组、阿托伐他汀组、Wnt抑制剂。正常组不造模,其余各组均用ox-LDL刺激单核细胞复制高脂模型。正常组和模型组给予条件培养液,对照组给予正常小鼠血清,护心康组给予护心康含药血清,培养液血清终浓度均为15%; WIF终浓度为10μg/ml,阿托伐他汀终浓度为10μmol/L,干预24 h后用荧光定量PCR和Western blot分别测定Wnt1基因和蛋白的表达,分别进行6次独立实验。结果与正常组相比,模型组和对照组Wnt1 mRNA和蛋白表达升高(P <0. 01);护心康组、阿托伐他汀组、WIF组Wnt1 mRNA和蛋白表达较模型组和对照组低(P <0. 05)。结论高脂刺激可以诱导TLR-4基因敲除小鼠外周血单核细胞Wnt1基因和蛋白表达升高,护心康可以有效降低这种表达。