IGF-2r的结构和功能及其在胚胎发育中的作用

胰岛素样生长因子-2受体(insulin-like growth factor-2 receptor,IGF-2r)和非阳离子依赖型甘露糖-6-磷酸受体(cation-independent mannose-6-phosphate receptor,CI-MPR)为同一分子,属多结构域跨膜糖蛋白。IGF-2r与阳离子依赖型M6P受体(cation-dependent mannose-6-phosphotase receptor,CD-MPR) 共同介导溶酶体酶的分选和转运过程,对溶酶体的形成起重要作用。IGF-2/M6P受体除能与溶酶体酶、TGF-β前体等M6P配体结合外,还能与非糖基化的IGF-2、视黄酸等作用,调节蛋白质的转运和跨膜信号传导等活动。IGF-2r为父源性印迹(paternal imprinted)基因,基因的印迹、表达受基因印迹控制区(imprinting control region,ICR)的甲基化差异修饰所调控。IGF-2r基因表达缺失出现胎儿肥大、心脏和胎盘发育不全、围产期死亡等异常现象,证明IGF-2r在胚胎发育过程中起重要作用。

人间隙连接蛋白31相互作用蛋白AnnexinⅡ的筛选与证实

间隙连接蛋白31(connexin31,Cx31)是间隙连接蛋白(connexin)家族的一员,目前对于Cx31的功能及其调节方式知之甚少.采用固相多肽合成的方法合成Cx31羧基端一个多肽片段(250￣266),经HPLC纯化后偶联到匙孔血蓝蛋白,免疫新西兰雄兔后采血检测、并纯化、经蛋白质印迹、细胞免疫荧光染色、免疫沉淀证实得到的抗体为特异性抗Cx31的抗体.运用制备的抗Cx31多克隆抗体免疫沉淀,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离,蛋白质条带回收,蛋白质胶块酶解,Q-TOF质谱分析,数据库扫描筛选可能相互作用蛋白,运用抗体pull-down实验,筛选到可能相互作用蛋白annexinⅡ,经过免疫共沉淀、细胞免疫共定位等实验证实annexinⅡ与Cx31相互作用.

MAP法制备抗人Connexin31抗体

MAP(multipleantigenicpeptide)多肽法具有快速、简便、成本低廉的特点.用MAP法,直接在多肽合成仪上合成Connexin31羧基端一个多肽片段(250-266AA)的MAP肽,经超滤器纯化后,免疫新西兰雄兔后采血检测、并纯化.经Westernblotting、细胞免疫荧光染色、免疫沉淀证实得到的抗体为抗间隙连接蛋白31的特异抗体.