人GPx1基因的克隆及其序列分析

目的 克隆中国人谷胱甘肽过氧化物酶 (GPx1)的cDNA。方法 用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR) ,以中国人胎盘组织总RNA为模板 ,扩增中国人谷胱甘肽过氧化物酶 (GPx1)的cDNA ,进行序列分析。计算机分析其二级结构并比较已发现的人GPx家族的 5种GPx氨基酸序列。结果 从中国人胎盘组织中克隆的GPx1基因 ,与国外文献报道相比 ,只有 1个氨基酸残基发生变异 ,即leu2 2 变为Val2 2 ,该变化不影响GPx1活性中心的结构 ;人GPx的硒结合区及活性中心区域的氨基酸序列是高度保守的。结论 首次克隆了中国人体特异的胞质内GPx1基因 ,为其生物学活性及结构与功能的关系的研究创造了条件。

口服外源SOD的完整生物大分子吸收的研究

分别用Cu2 + ,降解成多肽的无活性的SOD和完整SOD对ICR小鼠灌胃 ,发现Cu2 +不引起血液中红细胞SOD的活性变化 ,而降解后的无活性的SOD却能使红细胞中SOD活性升高 ,可见降解后的SOD片段可能诱导了内源SOD的生成 ,口服完整的SOD也能使其活性升高 ,通过Western blotting分析 ,找到了完整的SOD分子经胃肠道吸收、穿过了红细胞膜 ,进入了红细胞内的证据。

磁场对大肠杆菌及胞内谷氨酸脱羧酶的影响

研制了大肠杆菌电极 ,采用部分干燥法处理大肠杆菌膜 ,使电极寿命达到了 38d 用此电极研究分别磁化底物及大肠杆菌膜对其胞内谷氨酸脱羧酶 (GAD)活性的影响 ,发现在不同磁场强度、不同作用时间下 ,磁化底物其影响不一致 ,活性最高可达 4 5 2 % ,且有滞后和恢复效应 ;磁物菌体膜未见膜活性显著变化 磁场处理菌液 ,未见明显灭菌作用 。

磁场对纤维素酶的活性及构象的影响

以羧甲基纤维素钠（CMC）为底物评价纤维素酶的活性，研究了不同条件下静磁场对酶的活性及构象的影响。9℃，pH4．0条件下磁化，其活性及荧光光谱均不见明显变化；但若改变反应时的pH，可使活性增加达16.4％；并发现磁处理后的酶有滞后效应及可逆性。较高温度下，磁化处理酶液，其活性及构橡均发生不同程度的变化，且对其抑制动力学表现为混合型抑制模式；其构象变化也基本上随失活的增加荧光强度增大。

磁场对酶构象的影响

用荧光光谱法研究了在不同磁场强度、温度、介质和磁化时间下，磁场对乳酸脱氨酶、肌酸激酶、尿酶、超氧化物歧化酶构象的影响。发现磁场能影响酶的构象，但光谱变化与酶活力变化无一定规律，并对其可能的作用机制和原因作了初步探讨。

超氧化物歧化酶的体内吸收与超氧化物歧化酶受体

综述了有关肝等细胞内吞SOD过程中的形态学方面的证据和配体印迹等方面的结果 。

磁场对碳酸酐酶的影响

建立了流动注射分析方法 ,评价了碳酸酐酶 (CA)的活性 ,并用此方法研究了磁场对酶催化活性的影响。发现磁场作用使酶活力升高 ,2 10mT下作用 4h ,其活力增加了 17% ;随着磁化时间的延长 ,其磁场效应基本上趋于一致 ,且观察到了磁酶效应的可逆性。实验还发现磁场使酶 -底物反应的活化能降低 ,并对可能机理作了初步探讨。

Mn-SOD与抗癌胚抗原单链抗体基因的融合及高效表达

将Mn SOD与抗癌胚抗原 (CEA)单链抗体基因 (ScFvgene)融合 ,重组到含T7启动子的表达载体 pET 2 2b(+)中 ,构建表达质粒pETMn SOD ScFv ,并转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,进行高效表达 ,表达物占菌体可溶性总蛋白的 2 4%。SDS PAGE和蛋白质印迹图谱显示表达物分子量为 45kD与融合基因编码蛋白质的理论值相符。该蛋白质在大肠杆菌中为分泌型表达有利于纯化。RIA测定表明表达产物能特异性的与抗原CEA结合 ,同时邻苯三酚法测定也表明表达产物具有SOD酶的活性 ,该融合蛋白为分泌CEA肿瘤的靶向性治疗提供新的途径。

磁场影响固定化葡萄糖异构酶活性的研究

采用丹麦Novo公司测固定化葡萄糖异构酶 (SweetzymeT)活力的反应体系 ,用半胱氨酸 -咔唑法评价酶的活性 ,研究了磁场在不同条件下对酶活力的影响。实验发现 :在不同磁化时间、温度、磁场强度和pH条件下磁化底物 ,使其活性增加可达 2 8 6 % ,并且具有可逆性 ,但磁化固定化酶或磁场作用于酶—底物反应体系 ,未见酶活力的明显变化。

分泌癌胚抗原肿瘤靶向性Cu,Zn-SOD的基因克隆及表达

将 Cu,Zn- SOD与抗癌胚抗原 ( CEA)单链抗体基因 ( Sc Fv gene)融合 ,重组到含 T7启动子的表达载体 p ET- 2 2 b( + )中 ,构建表达质粒 p ETSOD- Sc Fv,并转化大肠杆菌 BL2 1 ( DE3) ,进行高效表达 ,表达物占菌体可溶性总蛋白的 1 8%。SDS- PAGE和蛋白质印迹图谱显示表达物相对分子质量为 41 k D,与融合基因编码蛋白质的理论值相符。该蛋白质在大肠杆菌中为分泌型表达 ,有利于纯化。RIA测定表明表达产物能特异性地与抗原 CEA结合 ,邻苯三酚法测定也表明表达产物具有 SOD酶的活性 ,该融合蛋白为分泌 CEA肿瘤的靶向性治疗及放疗。

磁场影响离体酶和微生物体内酶催化活性的研究(摘要)

作为一种生物催化剂,酶是促进一切代谢反应的物质,在人类生产生活和生命过程中起着非常重要的作用。因此,酶学的研究始终是生物学的重大课题。近年来,随着生物磁学的发展,人们对磁场影响生物特性和生命活动的研究日益深入,已开始把目标转向与生命活动息息相关的物质——酶的研究,而且也转向遗传物质——染色体和 DNA 的研究。研究这两种影响具有十分重要而深远的意义,不仅可以从理论上探讨磁生物效应的机制,还将使磁生物效应在工农业生产及医疗、环保等方面得到更广泛的应用。

中枢神经系统靶向性Mn-SOD的克隆和在大肠杆菌中的表达研究

靶向性超氧化物歧化酶 (SOD)是治疗氧自由基引起神经细胞损伤所致疾病等的有效途径 .将破伤风毒素C部分 (tetanustoxinfragmentC ,TTC)基因与编码Mn SOD的cDNA融合克隆进pET 2 2b(+)载体 ,1mmol/L异丙基 D 硫代半乳糖 (IPTG)诱导在大肠杆菌中表达 .SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)图谱可见约 71ku有表达产物条带 ,与理论计算值相符 ;蛋白质印迹 (Westernblot)分析显示 ,表达产物与抗Mn SOD及破伤风毒素的多抗有免疫反应 ,而且表达产物用邻苯三酚自氧化法测定具有SOD活性 .融合蛋白可作为有效的试剂靶向性输送Mn SOD到神经元细胞 。

人EC-SOD的克隆及高效表达

将编码人胞外超氧化物歧化酶 ( EC- SOD)成熟肽的 c DNA插入含 T7启动子的质粒p ET- 2 8a( + )中构建表达质粒 p ET- EC- SOD,表达菌株用 1 mmol/ L异丙基硫代 - β- D-半乳糖苷( IPTG)诱导表达 3h～ 5 h后 ,产生较多的重组人 EC- SOD,并形成包含体。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 ( SDS- PAGE)分析表明 ,表达的重组蛋白占菌体可溶性蛋白质的 2 6%以上。经纯化和复性后的EC- SOD比活为每毫克纯化酶蛋白 1 2 0 0 U。将 EC- SOD c DNA基因插入昆虫杆状病毒供体质粒p Fast Bac HTb中 ,重组杆状病毒 Bac HT- EC- SOD转染粉纹夜蛾 Tn- 5 Bl- 4细胞 ,经扩增后在细胞内进行表达。SDS- PAGE分析结果表明 ,粉纹夜蛾细胞中表达一相对分子质量约为 2 8ku的特异蛋白质带 ,Western blot分析表明 ,该特异条带即为 EC- SOD蛋白 ,连苯三酚自氧化法测得表达产物比活为每毫克细胞裂解物 2 60

大肠杆菌肉碱脱水酶基因的克隆、测序及高效表达

［摘 要］目的 克隆并表达大肠杆菌肉碱脱水酶基因。方法 用聚合酶链反应（PCR）从大肠杆菌K12s中扩增大肠杆菌肉碱脱水酶基因caiB，测定其DNA序列，将caiB基因重组到T7启动子控制下的表达载体pET－28a（＋）中，构建表达质粒pETCaiB，转化大肠杆菌BL21（DE3），用1mmol/L异两基硫代-β-D半乳糖苷（IPTG）诱导表达。结果 克隆得到的肉碱脱水酶编码基因 caiB长度为 1221bp，与文献报道值相比,DNA序列有26个不同，氨基酸序列只有一个不同，即302位的丙氨酸变为苏氨酸。重组菌经IPTG诱导，可高效表达，SDS－PAGE分析表达蛋白相对分子质量约43000，表达产物含量占菌体总蛋白45％以上。结论 得到了高效表达肉碱脱水酶的重组菌，为制备L-肉碱创造了条件。

抗癌胚抗原微型抗体基因在昆虫细胞中的表达

目的获得生物活性更高的癌胚抗原 (CEA)微型抗体用于放免显像。 方法将抗癌胚抗原微型抗体基因插入昆虫杆状病毒供体质粒pFastBacHTb中 ,经大肠杆菌DH10Bac体内转座 ,产生重组杆状病毒BacHT -VH-L ,将其转染粉纹夜蛾 (Tn - 5B1- 4)细胞 ,经扩增后在细胞内进行表达。 结果SDS -PAGE分析结果表明 ,在Tn- 5B1- 4细胞中表达产生一条特异性蛋白质 ,其分子量为 2 6kd左右 ;以Westernblot分析表明 ,该特异条带即为VH-L蛋白。RIA表明重组杆状病毒表达产生的VH -L蛋白能特异性的结合CEA ,较大肠杆菌表达物活性更高。结论昆虫细胞表达可制备生物活性更高的癌胚抗原微型抗体。

核心素养视域下小学道德与法治教学研究

在当前阶段下,我国的教育正向着完善核心素养的方向迈进,着重于提升学生的综合能力,改变传统的单纯教授理论知识的模式。面对社会的进步和综合建设的发展,如何在教学中提高学生的核心素养,是我们当前重点思考的问题。本文主要以培养小学生核心素养为根本目的,以小学道德与法治的教学为例,试分析如何在课堂教学中提高学生的综合能力。