糖尿病小鼠的角膜创伤修复以及神经改变

目的通过研究糖尿病小鼠角膜创伤愈合以及创伤后血管、中性粒细胞和神经纤维的改变,了解糖尿病对小鼠角膜创伤愈合的影响。方法 80只小鼠随机分成对照组(40只)和模型组(40只),应用链脲佐菌素诱导建立糖尿病模型。对模型组和对照组小鼠血糖、体质量进行监测。制作小鼠角膜上皮创伤模型,观察糖尿病小鼠角膜上皮创伤愈合情况,并对创伤后角膜缘血管、中性粒细胞分布情况进行观察。采用免疫荧光分析神经纤维在这两组小鼠角膜分布的差异。结果模型组在注射链脲佐菌素后24h,血糖升高至(17.1±0.5)mmol·L-1,此时对照组为(6.7±0.2)mmol·L-1(P<0.05)。6 d时模型组体质量显著降低至(28.2±0.9)g,2 d、3 d、4 d、5 d、6 d时组间血糖、体质量差异均有统计学意义(均为P<0.05),符合糖尿病改变。模型组小鼠创伤愈合时间比对照组延后5 d。模型小鼠角膜缘部位的血管纤细、稀疏,创伤后2 d对照组中性粒细胞为(212.3±6.3)个/视野,模型组为(184.7±3.2)个/视野,差异有统计学意义(P<0.05)。对照组的中央、旁中央、周边角膜神经纤维密度分别为(309.2±27.2)μm3·mm-3、(234.9±11.4)μm3·mm-3、(176.8±14.3)μm3·mm-3,模型组分别为(263.8±13.2)μm3·mm-3、(175.1±18.3)μm3·mm-3、(96.3±12.7)μm3·mm-3,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论糖尿病会导致小鼠角膜上皮创伤愈合延迟,以及小鼠角膜血管、中性粒细胞及神经纤维的改变。

猪骨蛋白对骨质疏松模型大鼠血清磷水平与骨密度的影响(英文)

背景:有报道显示美国处于高风险的骨质疏松妇女中磷水平较高,这是否意味着降低血磷水平的物质将会为防治骨质疏松提供新的有效手段?目的:观察猪骨蛋白对骨质疏松大鼠骨密度和血清中钙及磷水平的影响。方法:以肌肉注射地塞米松建立Wistar大鼠骨质疏松模型。造模后以数字表法随机分为生理盐水组、接骨七哩片组、50,100,200mg/kg猪骨蛋白组,不作任何处置大鼠作为正常对照。治疗12周后,分离血清并用生物化学方法测定血清磷和血钙水平,同时收集大鼠胫骨制作成骨切片,以QDR-4000双能X射线吸收仪测定各组大鼠胫骨吸光度值;苏木精-伊红染色观察胫骨骨髓腔变化。结果与结论:各组之间血清钙浓度比较差异无显著性意义(P>0.05)。与生理盐水组比较,50,100,200mg/kg猪骨蛋白组大鼠血清磷浓度下降(P<0.05)。50,100,200mg/kg猪骨蛋白组、接骨七哩片组骨密度值高于生理盐水组(P<0.05)。正常对照组大鼠胫骨的骨髓腔是小的,生理盐水组大鼠胫骨的骨髓腔特别大,50,100,200mg/kg猪骨蛋白组、接骨七哩片组大鼠胫骨骨髓腔比生理盐水组大鼠胫骨骨髓腔小。结果提示猪骨蛋白不改变骨质疏松大鼠血清钙的水平,但它能降低骨质疏松大鼠血清磷的浓度,增加骨密度。不过,在该实验浓度范围内,没有显示剂量效应关系;猪骨蛋白也能缩小骨质疏松大鼠胫骨骨髓腔。

盐酸特比萘芬纳米乳剂点眼经角膜途径的吸收及分布特征

背景 纳米乳剂（NEs）具有稳定性好、毒性及刺激性小、载药量大及大幅度提高药物生物利用度的优点,是目前眼局部给药领域研究和应用最多的纳米给药系统之一,眼局部给药后主要经角膜途径吸收.尽管NEs具有很多物理化学和生理学优点,但其吸收分布受到角膜各层组织结构的影响.目的 观察角膜上皮和基质对眼用盐酸特比萘芬纳米乳剂（TH-NEs）经角膜途径吸收及分布的影响.方法 自乳化法制备TH-NEs,光散射粒度分析仪测定纳米乳滴的粒径及Zeta电位,高效液相色谱法（HPLC）观察TH-NEs的体外释放特征.取新西兰白兔60只,按照随机数字表法分为完整角膜组和去角膜上皮组,每组30只,其中去角膜上皮组左眼去除角膜上皮;2个组实验兔随机平均分配于5个时间点,均以左眼为实验眼.TH-NEs点实验眼,分别于给药后15、30、60、120及240 min处死动物,剖取角膜组织,HPLC法测定角膜组织中TH质量分数.以荧光素二乙酸酯（FDA）对TH-NEs进行荧光标记,取4只C57BL/6小鼠,任意取其中2只小鼠麻醉后去除左眼角膜上皮,均以左眼为实验眼,荧光标记TH-NEs点眼,双光子激光扫描共焦显微镜观察给药后30 min及60 min角膜中荧光标记TH-NEs的分布情况.结果 TH-NEs中乳滴的平均粒径为51.37 nm,Zeta电位为-0.232 7 mV;加药后12h,药物的累积释放量为0.482％;兔眼完整角膜和去上皮角膜中药物质量分数的达峰时间均为15 min,药物的峰质量分数分别为（17.85±2.79）μg/g和（4.40±1.75） μg/g.给药后15、30、60和120 min,完整角膜中药物的平均质量分数均显著高于去上皮角膜,差异均有统计学意义（t=9.998、8.658、6.903、7.576,均P=0.000）.给药后30 min和60 min,小鼠完整角膜中荧光标记TH-NEs均分布于角膜上皮,且角膜上皮表层荧光强度明显高于角膜上皮深层,而在去上皮角膜和完整角膜中,角膜基质内均未检测到FDA荧光.结论 TH-NEs点眼后,角膜上皮是TH-NEs经角膜途径吸收和分布的主要部位,而角膜基质层是TH-NEs向眼内扩散的主要屏障.角膜基质层可能是通过尺寸排阻作用阻碍TH-NEs的渗透.

酸性肽对血管性痴呆小鼠学习记忆力和脑组织APP、BACE和tau蛋白表达的影响

目的:观察酸性肽对血管性痴呆(VD)小鼠学习记忆力及脑内淀粉样前体蛋白(APP)、β-分泌酶(BACE)及tau蛋白表达的影响。方法:60只健康昆明种小鼠,随机分成6组,每组10只。除对照组外,其余5组小鼠给予高脂食物灌胃、颈动脉局部缺血及再灌注手术,建立VD小鼠模型,随后分别灌胃生理盐水(模型组)、0.3g/kg脑复康(脑复康组)和20、40和80mg/(kg·d)的酸性肽(低、中及高剂量酸性肽组),1次/d,共15d。用跳台试验检测小鼠的学习和记忆能力,免疫组化法测定脑组织APP、BACE及tau蛋白的表达。结果:6组小鼠学习能力跳台实验错误次数及受电击时间、记忆能力跳台实验错误次数及受电击时间及脑组织APP、BACE及tau蛋白表达差异均有统计学意义(F分别为6.544、2.991、11.179、6.100、484.218、59.317和40.448,P均<0.01)。与模型组相比,低、中剂量酸性肽组小鼠学习及记忆能力提高(P<0.05)。3个酸性肽组APP及BACE表达水平降低(P<0.05),低、中剂量酸性肽组与对照组比较,tau蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:适宜剂量的酸性肽可通过降低VD小鼠脑内APP和BACE的水平,改善其学习记忆力。

BALB/c小鼠角膜细胞密度和大小的活体三维测量

背景 角膜细胞的形态学参数及其密度对角膜结构的完整性及其正常功能的维持具有重要意义.目前,BALB/c小鼠已成为角膜研究中广泛应用的实验动物,了解正常角膜细胞的大小、形态及密度可为相应的实验研究提供参考依据. 目的 应用双光子激光扫描显微镜对BALB/c小鼠的不同角膜细胞进行活体扫描,对细胞密度、细胞大小参数进行活体三维测量,活体观察角膜不同细胞的形态学特征.方法 收集6只8 ～13周龄BALB/c小鼠,麻醉后荧光解剖显微镜下于角膜基质内注射20 μg/ml的胞质膜染料1μl,注射后1.5h于注射部位的对侧注射500 μg/ml Hoechst 33342 1 μl,30 min后使用双光子激光扫描荧光显微镜对角膜中央视野（XY轴）的角膜内皮层、基质层和上皮层进行Z轴逐层扫描,每层扫描厚度为2μm,图像像素为512×512,图像位数为12 bit.应用Imaris软件对扫描的图像进行细胞密度以及细胞大小参数的测量,细胞密度通过计算3维空间内细胞核数目获得;通过软件自动测量角膜上皮基底层、中基质层和内皮层细胞和细胞核的表面积和体积,并计算细胞和细胞核的表面积/体积值和细胞的核质比. 结果 BALB/c小鼠角膜上皮基底层和内皮层均为单层细胞,而中基质层包括2层细胞.小鼠角膜上皮基底层细胞密度为（108.00±18.97） ×10^4/mm3,明显大于中基质层的（9.27±0.48）×10^4/mm3和内皮层的（22.30±2.28）×10^4/mm3,3个组间总体比较差异有统计学意义（F=141.592,P=0.000）;以中基质层的细胞表面积和体积最大,其次为内皮层,上皮基底层的细胞表面积和体积最小,3层细胞间的表面积和体积的总体比较差异均有统计学意义（F=2 222.000、598.504,均P=0.000）.小鼠角膜上皮基底层、中基质层和内皮层细胞的表面积/体积值分别为（0.80±0.13）、（0.51±0.07）和（0.40±0.04）/μm,以上皮基底层细胞最大,3层间总体比较差异有统计学意义（F=127.075,P=0.000）.小鼠角膜以内皮层的细胞核表面积和体积最大,其次为中基质层,以上皮基底层细胞的细胞核表面积和体积最小,但以上皮基底层细胞核的表面积/体积值最大,以内皮层细胞核的表面积/体积值最小;小鼠角膜内皮层细胞的核质比明显大于上皮基底层和中基质层细胞. 结论 双光子激光扫描显微镜可对BALB/c小鼠中央角膜3层细胞参数,包括细胞和细胞核表面积及体积进行活体定量测定,为BALB/c小鼠角膜生理、病理和疾病的相关研究提供参考依据.

猪骨蛋白对骨质疏松大鼠血中AKP和OST的影响

目的:探讨猪骨蛋白对骨质疏松大鼠血中碱性磷酸酶(AKP)和骨钙素(OST)水平的影响。方法:取3月龄Wistar大鼠60只,随机分成对照组(A组)、生理盐水组(B组)、阳性对照组(C组)、200 mg骨蛋白组(D组)1、00 mg骨蛋白组(E组)5,0 mg骨蛋白组(F组)。A组大鼠灌胃2.5 ml/d生理盐水,其它各组大鼠2.5 ml/(kg.d)肌肉注射地塞米松,2次/周,共6周造成骨质疏松模型。之后,A和B组灌胃5 ml/d生理盐水,C组灌胃300 mg/(kg.d)接骨7厘片,D,E,F组分别灌胃200 mg/(kg.d),100 mg/(kg.d),50 mg/(kg.d)猪骨蛋白。12周后取血测AKP和OST水平。结果:C,D,E,F组AKP和OST水平均比B组明显降低(P<0.05)。结论:猪骨蛋白降低骨质疏松模型大鼠血中AKP和OST水平。

不同年龄段人血清中酸性肽的HPLC分析

目的:了解不同年龄人群血清中酸性肽的含量,以寻找神经退行性改变的早期预警的生物标志物。方法:采用内标法和高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)分析法。结果:分析结果显示:1～10岁组(A组),20～30岁组(B组),40～59岁组(C组)和60～80岁组(D组)人群血清中酸性肽的含量分别为2.943±1.340、2.338±0.371、2.052±0.328、(2.778±0.499)mg/ml。A组与B组相比P=0.082,A组与C组相比P=0.012,A组与D组相比P=0.628。结论:20～30岁组和40～59岁组人群血清中酸性肽的含量比1～10岁组和60～80岁组人群血清中酸性肽的含量低,具有统计学意义。

大豆黄酮对人肝癌SMMC7721细胞己糖激酶活性和癌干细胞CD133蛋白水平的影响

目的探讨大豆黄酮对肝癌SMMC7721细胞糖代谢和癌干细胞CD133基因表达的影响。方法培养人肝癌SMMC7721细胞并用大豆黄酮处理。MTT法测定细胞的成活率,用试剂盒法测定人肝癌SMMC7721细胞中的己糖激酶活性,并用Western Blot方法测定癌干细胞CD133蛋白的水平。结果大豆黄酮对人肝癌SMMC7721细胞增殖具有抑制作用,同时,可降低人肝癌SMMC7721细胞中己糖激酶活性和癌干细胞CD133蛋白的水平。结论大豆黄酮能抑制人肝癌SMMC7721细胞的增殖,降低人肝癌SMMC7721细胞中己糖激酶活性和癌干细胞CD133蛋白的水平。

mTOR通路抑制剂雷帕霉素对真菌性角膜炎小鼠角膜瘢痕化的影响

目的探讨mTOR通路抑制剂雷帕霉素对真菌性角膜炎小鼠角膜瘢痕化的影响。方法取96只SPF级C57BL/6J雄性小鼠,随机分为雷帕霉素组和对照组,每组各48只。两组小鼠同时建立真菌性角膜炎模型。雷帕霉素组模型制作前1 d按6.0 mg·kg-1雷帕霉素对小鼠进行腹腔注射预处理,之后按0.2 g·L^-1浓度在结膜下注射5μL,持续3 d;对照组注射PBS溶液。造模后对各组小鼠进行角膜临床评分,Western blot和实时荧光定量PCR分别检测造模后各组小鼠不同时间角膜LC-3Ⅱ、α-SMA和TGF-β1表达情况。结果造模后24 h、48 h、72 h、96 h、120 h、144 h、336 h,对照组小鼠角膜临床评分均明显高于雷帕霉素组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。造模后144 h、216 h雷帕霉素组小鼠角膜LC-3Ⅱ表达上调,LC-3Ⅱ蛋白和mRNA相对表达量与对照组相比,差异均有统计学意义(均为P<0.05);而在造模后72 h及336 h两组LC-3Ⅱ蛋白和mRNA相对表达量差异均无统计学意义(均为P>0.05)。与对照组相比,造模后144 h、216 h雷帕霉素组小鼠角膜α-SMA蛋白及mRNA相对表达量下降,差异均有统计学意义(均为P<0.05);造模后144 h、336 h雷帕霉素组TGF-β1 mRNA相对表达量亦下降,与对照组相比,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论雷帕霉素通过促进自噬作用下调角膜瘢痕化相关因子的表达,减轻了真菌性角膜炎模型小鼠角膜瘢痕化程度。

小鼠角膜γδT细胞去除效率的双光子活体动态监测

目的比较抗体中和后角膜与耳部皮肤γδT细胞的去除效率,探寻一种能够活体动态监测角膜γδT细胞数量变化的替代方法。方法应用双光子激光扫描显微镜对抗体中和前后小鼠耳部皮肤γδT细胞数量进行监测,同时于抗体中和后6 h、12 h、24 h对小鼠角膜进行取材染色,计数角膜中的γδT细胞,比较两者去除效率是否一致。结果正常小鼠角膜的γδT细胞常分布于角膜缘上皮及浅基质层,上皮层的γδT细胞形态不规则,常伴有突起,基质层γδT细胞多呈圆形或椭圆形,细胞数量为(27±4)个。抗体中和后,小鼠角膜γδT细胞数量逐渐减少,6 h、12 h和24 h细胞数量均明显少于去除前(P=0.03、0.00、0.00),去除效率分别为48%、78%、96%。正常小鼠耳部皮肤γδT细胞呈树突状,均匀分布于皮肤表皮层,细胞数量为(60±9)个,抗体中和后6 h、12 h和24 h,耳部皮肤γδT细胞数量与去除前相比亦明显减少(P=0.00、0.00、0.00),去除效率分别为43%、72%、95%。结论抗体中和后角膜与耳部皮肤γδT细胞数量均逐渐下降,两者去除效率随时间变化一致,监测小鼠耳部皮肤γδT细胞是动态监测角膜γδT细胞数量变化的理想替代方法。

我国中原地区653株真菌性角膜炎分离镰刀菌的基因型及药物敏感性

目的 研究中原地区真菌性角膜炎分离镰刀菌的基因型和体外药物敏感性.方法 测定2002-2011年河南省眼科研究所真菌性角膜炎患者角膜分离的镰刀菌758株的部分translation elongation factor （EF）1-a基因序列,通过部分EF1-α基因的序列比对进行镰刀菌菌种和基因型的鉴定.采用美国临床实验室标准研究所M38-A方案测定其中145株镰刀菌对伏立康唑、特比萘芬、那他霉素等12种药物的最低抑菌浓度（MIC）.结果 653株镰刀菌菌种及基因型通过EF1-α序列得到鉴定.中原地区真菌性角膜炎感染镰刀菌以腐皮镰刀菌种复合体（FSSC）最多,386株（59.11％）,包括15个种,43个基因型,最常见的FSSC基因型是FSSC5-d（132/20.21％）.赤霉菌种复合体（GFSC）居第2位,包括3个菌种,F.proliferatum 124株（18.99％）,F.verticillioides 112株（17.15％）和GFSC18株（2.76％）.尖孢镰刀菌复合体（FOSC）居第3位,11株（1.68％）,6个基因型.体外药物敏感试验结果显示镰刀菌属对那他霉素、伏立康唑、两性霉素B敏感,对氟胞嘧啶、氟康唑、制霉菌素、克霉唑、咪康唑耐药.超过一半的镰刀菌对益康唑、酮康唑、伊曲康唑和特比萘芬敏感.FSSC对伏立康唑、咪康唑、特比萘芬、益康唑和那他霉素的MIC50高于F.verticillioides、F.proliferatum和GFSC.结论 中原地区真菌性角膜炎感染镰刀菌大多数位于3个复合体FSSC、GFSC和FOSC内,基因型（种）多.不同种镰刀菌对伏立康唑、咪康唑、特比萘芬和那他霉素的药物敏感性有差异.

基质金属蛋白酶-8对角膜基质胶原的作用研究

目的探讨基质金属蛋白酶-8(MMP-8)对角膜的作用。方法选取健康C57BL/6J小鼠15只,右眼角膜基质内注射10μL MMP-8作为实验组,左眼给予等量生理盐水作为对照组。于0、4、8h使用双光子显微镜二次谐波成像技术对活体小鼠角膜逐层扫描,Imaris软件对所得图像三维重建,计算图像信号强度。4、8h在裂隙灯下评价角膜混浊度。8h角膜取材,测定各角膜羟脯氨酸水平。结果 0h实验组及对照组小鼠角膜基质纤维信号强度分别为89.7±11.2、85.3±7.0,4h分别为14.5±3.4、46.6±14.0,8h分别为11.0±4.6、34.6±12.5,4h及8h,实验组较对照组角膜基质信号强度明显降低(P<0.05);4h及8h,实验组较对照组角膜明显混浊(P<0.05);8h测得实验组与对照组角膜羟脯氨酸水平分别为(0.433±0.090)、(0.590±0.133)μg/mg,实验组明显低于对照组(F=7.193,P=0.014)。结论 MMP-8对小鼠角膜基质胶原有明显的降解破坏作用,导致角膜透明度下降。