绿豆总RNA的分离及环氧水解酶基因的克隆

目的研究分离绿豆总RNA的方法,并从中克隆环氧水解酶基因。方法采用UNIQ-10柱式法、Trizol法和改良Trizol法等3种方法分离绿豆种子、胚芽和豆芽总RNA,鉴定RNA的产率、纯度及完整性,根据环氧水解酶的保守序列扩增绿豆环氧水解酶基因。结果 UNIQ-10柱式法分离的RNA降解,Trizol法获得的RNA有杂质污染,改良Trizol法得到的RNA产率、纯度及完整性最好;RT-PCR后仅从绿豆胚芽中成功扩增到环氧水解酶基因保守序列。结论改良Trizol法简便易行,能有效地去除多糖、多酚等次生物质的干扰,最适于绿豆胚芽总RNA的分离。

化疗药物卵巢毒性的研究进展

化疗药物治疗年轻女性肿瘤患者引起的生殖系统损伤之一就是卵巢损伤,能使卵巢早衰,导致生育能力下降,有的甚至对生殖系统产生不可逆的永久损害。临床上常用的化疗药物如多西他赛、伊立替康、环磷酰胺、顺铂和多柔比星(阿霉素)对卵巢均有明显毒性,不同药物诱导的卵巢毒性机制也各不相同。卵巢毒性的产生跟卵巢部位急性血管损伤、活性氧族诱导的氧化应激反应、信号转导通路中磷脂酰肌醇-3-激酶-丝氨酸/苏氨酸激酶通路异常以及类固醇激素分泌通路抑制有关。临床上已采取了一些化疗药物治疗期间保留卵巢生育功能的方法,同时一些防治卵巢毒性的方法也在积极探索中。为了更好地防治化疗药物引起的卵巢毒性,验证了卵巢储备的指标并建立一些卵巢毒性体外研究方法。随着对卵巢毒性机制的深入了解和防治方法的多元化,化疗药物治疗和卵巢生殖功能保留这两者之间未来会有一个较好的平衡点。

土豆环氧化物水解酶基因的克隆、表达及其活性包涵体分析

目的克隆、表达土豆环氧化物水解酶基因,分析其活性包涵体。方法提取土豆总RNA,以反转录获得的cDNA为模板进行聚合酶链式反应(PCR),扩增得到土豆环氧化物水解酶基因,构建大肠杆菌表达质粒pET-P.EH,将重组表达质粒pET–P.EH转化E.coli BL21(DE3)。结果 SDS-PAGE分析表明,IPTG诱导表达的重组土豆环氧化物水解酶在各种温度下均主要以包涵体形式表达,只在15℃有微量可溶表达。酶活性分析表明,28℃表达的重组酶包涵体酶活性性为0.7 U/mg。结论初步证实了存在活性包涵体的观点。

siRNA药物研究进展

RNA干扰技术(RNAi)因其具有高效、高特异性、低毒等优点在生物医药领域方面潜力巨大,为新药的研发提供了非常好的思路。通过合理设计、化学修饰及载体可在一定程度上解决小干扰RNA(siRNA)药物快速降解、细胞摄取率低和脱靶效应等问题。笔者主要从适应证、给药方式及纳米载体等几个方面对进入临床试验的siRNA药物进行综述,为从事siRNA药物研发的研究者提供参考。

siRNA沉默乳腺癌靶基因及递送治疗的研究进展

乳腺癌是最常见的女性恶性肿瘤之一,其治疗仍然存在多药耐药、复发和转移等问题。近年来,小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)在乳腺癌的研究中应用广泛,并有望成为新型的靶向性基因药物。本文检索近十年来siRNA在乳腺癌治疗研究方面的相关文献,着重从siRNA沉默乳腺癌相关的靶基因,siRNA的递送载体以及siRNA联合化疗药物治疗乳腺癌的研究3个方面进行综述,以期为乳腺癌的研究提供新方法和新思路。

脱氢表雄酮抗糖尿病作用研究进展

脱氢表雄酮（Dehydroepiandrosterone,DHEA）及其硫化物（Dehydroepiandrosterone sulfateester,DHEAS）是人血循环中含量最丰富的类固醇激素,主要由肾上腺皮质网状带中的细胞色素P450c 17催化合成.在体内DHEA绝大部分以硫化物的形式存在,其硫酸基团可与血浆蛋白结合,使之免受肝细胞的降解作用.