阿托伐他汀的药物基因组学研究进展

阿托伐他汀是目前临床上广泛使用的口服降脂药,其对冠心病的一级和二级预防具有重要作用;但其疗效以及不良反应存在显著的个体差异,这与药物相关基因的多态性有关。本文主要介绍了基因多态性在阿托伐他汀的代谢、转运以及不良反应等方面的作用。

毛细管凝胶电泳紫外检测核酸灵敏度

以已知浓度的DNA Marker为标准样品,常规压力进样,电动进样,柱头场放大及联合使用基质场放大和柱头场放大等方法进行CGE-UV分析,对比不同进样方法的检测灵敏度。以聚合酶链式反应(PCR)后的高盐DNA样品验证方法的可靠性。当DNA样品稀释达40万倍,与电动进样和压力进样相比,在对峰形和峰宽无明显影响下,将电动进样的时间延至420s,三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液(TE)浓度降低至1.5%,柱头场放大灵敏度分别提高了约28和90倍;联合使用基质场放大和柱头场放大后,灵敏度分别提高3760和12000倍。DNA的检出限达0.1μg/L(S/N=3,CGE-FASI-UV)。同时以本法分析PCR后的DNA产物获得了极高的灵敏度(分别比普通的压力进样和电动进样提高50477倍和33354倍)。本实验采用基质场放大和柱头场放大联用,方法操作简单,灵敏度高,适用于高盐微量的DNA样品分析。

细胞色素氧化酶P4502C9基因多态性与冠心病及血脂水平的关系

目的探讨细胞色素氧化酶P450 2C9(CYP2C9)基因多态性与冠心病和血脂水平的相关性。方法应用聚合酶链反应和基因测序方法,检测218例经冠状动脉造影确诊冠心病或有明确心肌梗死的患者及200例经冠状动脉造影排除冠心病的对照者的CYP2C9基因型,并对突变基因型者和野生基因型者的血脂按常规方法测定并进行比较分析。结果冠心病组突变型CYP2C9*3基因发生率显著高于非冠心病对照组(P<0.05),突变型CYP2C9*3基因型者和野生型CYP2C9*1基因型者血脂水平差异无统计学意义。结论CYP2C9基因多态性与冠心病的发生可能相关,但未发现与血脂水平有相关性。

p63蛋白在鼠口腔黏膜干细胞中的时相表达和意义

目的:检测p63蛋白及其5种亚型在鼠口腔黏膜组织和口腔黏膜干细胞分化前后的表达特点,探讨p63作为口腔黏膜干细胞标记的可能。方法:以鼠抗人/鼠p63蛋白和兔抗人/鼠Oct-4蛋白为一抗,分别采用免疫细胞荧光和免疫组织化学技术检测p63蛋白在口腔黏膜上皮干细胞克隆、鼠上腭黏膜以及Oct-4在鼠腭黏膜中的表达情况;采用RT-PCR法检测口腔黏膜干细胞在培养5d和14d时,p63蛋白5种亚型的时相表达及变化特点。结果:免疫荧光显微镜观察,培养细胞胞核中发出p63蛋白的绿色荧光和DAPI蓝色荧光。免疫组化显示,p63蛋白主要表达在鼠腭黏膜基底层并部分表达于棘层,但Oct-4只表达于基底层。RT-PCR显示,细胞在培养5d时,表达p63蛋白的TA、ΔN、α和β亚型,不表达γ亚型;在培养14d时,表达p63蛋白的TA和γ亚型,不表达ΔN、α和β亚型。结论:p63蛋白可在口腔黏膜干细胞和次分化细胞中表达,单独标记尚不足以精确示踪口腔黏膜干细胞,但是其亚型ΔNp63α和(或)ΔNp63β可能是口腔黏膜干细胞的特异性标记。

中国肾移植患者中细胞色素P450 3A4的新突变位点(英文)

背景:环孢素A在人体内主要经过细胞色素P450 3A4 代谢。已有研究表明细胞色素 P450 3A4 基因多态性影响环孢素A的药代动力学,而且环孢素A慢性肾毒性主要是由于环孢素A在体内的长期蓄积。因此推测细胞色素 P450 3A4 基因多态性可能是肾移植移植后环孢素A慢性肾毒性的主要原因之一。目的:分析细胞色素 P450 3A4 基因多态性与肾移植移植后环孢素A慢性肾毒性的相关性。方法:纳入 200 例服用环孢素A的肾移植患者参加此项研究,其中105例经肾活检和(或)血肌酐值的变化诊断为环孢素 A慢性肾毒性,其他 95 例未发生肾毒性)。采集受试者外周静脉血并提取基因组DNA,采用聚合酶链式反应和直接测序法检测细胞色素P450 3A4基因外显子5,7,9 和 12 的点突变。结果与结论:中国肾移植患者中发现 3 个细胞色素 P450 3A4 新突变位点,即 336A>G,837 G>A 和 406 A>C。其中 3 例肾移植患者可检测出 336 A>G,8 例肾移植患者可检测出 837 G>A。新突变点 406A>C 仅发现于 3 例环孢素A慢性肾毒性患者,在非肾毒性患者中未发现新突变位点,且 406 A>C 可导致细胞色素 P4503A4 保守区 136 位苏氨酸(Thr)转变为苯丙氨酸(Phe)。文章未发现已报道的中国人群细胞色素P450 3A4基因在外显子5,7,9 和 12 的多态性。结果证实,文章在中国肾移植患者中发现了 3 个细胞色素P450 3A4 的新突变位点 336 A>G,837G>A 和 406 A>C,其中 406 A>C 可能引起细胞色素 P450 3A4 酶活性的改变。

细胞色素P450 3A5基因多态性与血脂异常的相关性

目的研究细胞色素P4503A5基因多态性与血脂异常的相关性。方法采用Taqman MGB探针建立细胞色素P4503A5*3(6986A>G)位点的实时荧光定量PCR分型方法,对321名中国汉族血脂异常患者和258名正常对照者进行细胞色素P4503A5*3(6986A>G)位点基因分型,按常规方法测定血脂水平并进行比较分析。结果血脂异常组和正常对照组中均检出AA、GA和GG三种基因型;血脂异常组AA、GA、GG基因型频率分别为9.0%、46.1%和44.9%,对照组则为9.7%、39.5%和50.8%。血脂异常组A及G等位基因频率分别为32.1%和67.9%,对照组则为29.5%和70.5%。两组基因型及等位基因频率比较差异均无统计学意义(P>0.05)。通过对不同基因型的血脂分析发现,血脂异常组A等位基因(AA+GA型)携带者的高密度脂蛋白胆固醇水平显著高于GG纯合型(P<0.05)。结论细胞色素P4503A5*3(6986A>G)多态性位点与中国汉族人血脂异常的发生可能没有关联,但A等位基因可能对血清高密度脂蛋白胆固醇水平有一定影响。

有机阴离子转运多肽1B1521T>C基因多态性与高脂血症发病的相关性

目的:探讨有机阴离子转运多肽1B1(OATP1B1)521T>C与高脂血症发病的相关性。方法:采用实时荧光定量TaqMan-MGB探针法,检测321例高脂血症患者和259例健康受试者的基因型,并将其检测结果与DNA测序结果进行比较。结果:321例原发性高脂血症人群和259例健康受试者OATP1B1521T>C位点的分布频率均为13%,两组间各基因型分布频率无统计学差异(χ2=0.575,P>0.05),两组间低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、三酰甘油、总胆固醇各个血脂指标的基因型无统计学差异(P>0.05),而Logistic回归分析法对影响高脂血症的相关因素进行回归分析,亦显示OATP1B1521T>C与高脂血症无显著相关性(P>0.05)。结论:SLCO1B1的521T>C突变为中国原发性高脂血症人群中的常见突变,但在中国原发性高脂血症人群和健康人群之间的分布差异无统计学意义,提示SLCO1B1的52IT>C突变与原发性高脂血症的发病率之间可能无相关性。

穴位针刺疗法联合昂丹司琼治疗乳腺癌术后化疗相关性恶心呕吐的临床效果

目的穴位针刺疗法联合昂丹司琼治疗乳腺癌术后化疗相关性恶心呕吐(CINV)的效果。方法选取河南省肿瘤医院2019年9月至2021年9月收治的乳腺癌术后患者98例,采用随机数字表法分为对照组(n=52)和针刺组(n=46)。对照组接受昂丹司琼,针刺组在此基础上接受穴位针刺疗法。对比两组临床疗效,在急性期、迟发期和持续期的恶心视觉模拟评分(VAS)和呕吐次数、生活功能量表(FLIE)评分和卡氏功能状态(KPS)评分及血清5-羟色胺(5-HT)水平变化。结果经过治疗后,在急性期、迟发期和持续期针刺组治疗有效率较高(P<0.05);治疗后针刺组在急性期、迟发期和持续期恶心VAS评分和呕吐次数较对照组低(P<0.05);针刺组在急性期、迟发期和持续期FLIE评分和KPS评分较对照组高(P<0.05);针刺组在急性期、迟发期和持续期血清5-HT水平较对照组低(P<0.05)。结论采用穴位针刺疗法联合昂丹司琼治疗乳腺癌术后CINV具有较好的疗效,能够减少恶心呕吐次数,提高患者生活质量,值得在临床上推广应用。

CYP2J2＊7与中国汉族人冠心病相关性研究

目的研究CYP2J2*7(即G-50T)与中国汉族人冠心病的相关性。方法采用聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性(PCR-RFLP)法对703例(347例冠心病患者+356例对照者)无血缘关系的研究对象进行基因分型并随机抽取部分样本采用直接测序的方法验证基因型。结果 (1)GT/TT基因型在冠心病组和对照组的分布频率分别为9.51%和5.07%,两组比较差异有统计学意义(P=0.02,OR=1.88,95%CI:1.08～3.27);(2)GT/TT基因型在男性冠心病病例与男性对照组中的分布频率差异无统计学意义(P=0.18),在女性冠心病病例与女性对照组中的分布频率差异有统计学意义(P=0.04)。结论 CYP2J2*7突变与中国汉族人冠心病的发生具有相关性,这种相关性主要表现在女性人群中。

CYP3A4* 1G基因多态性及功能的初步探讨

目的:采用双荧光素酶报告基因系统分析CYP3A4*1G多态性对CYP3A4基因转录活性的影响。方法:构建含CYP3A4*1G突变位点的荧光素酶基因表达载体,用Lipofectamine 2000转染HepG2细胞,化学发光法检测荧光素酶活性。结果:应用双荧光素酶报告基因系统检测显示,pGL3-promoter-A质粒转染后荧光素酶活性显著高于pGL3-promoter-G(P=0.022<0.05)。结论:CYP3A4*1G能够增强荧光素酶基因的表达,可能增强CYP3A4基因的转录活性。

CYP24A1基因多态性与中国汉族女性乳腺癌关系的病例对照研究及meta分析

目的探讨细胞色素P45024A1(CYP24A1)基因多态性与中国汉族人群女性乳腺癌的关系。方法收集2012年1月至2016年12月郑州大学附属肿瘤医院收治的674例中国汉族女性乳腺癌患者(病例组)和672例健康体检者(对照组)的全血标本,进行CYP24A1 rs6068816(C>T)多态性检测,分析该多态性与乳腺癌易感性的关系。全面检索数据库中rs6068816多态性位点与乳腺癌的相关研究,合并本研究上述结果后采用meta分析评价CYP24A1 rs6068816多态性与乳腺癌的关系。结果CYP24A1 rs6068816(C>T)多态性在病例组和对照组的分布比较,差异有统计学意义(P<0.05)。rs6068816位点T等位基因相对于C等位基因是乳腺癌的保护因素(OR=0.88,95%CI:0.79~0.98);突变纯合型TT与野生纯合型CC比较,差异有统计学意义(OR=0.61,95%CI:0.43~0.85);显性遗传模型TT与CC+CT基因型比较,差异有统计学意义(OR=0.61,95%CI:0.44~0.84)。结论CYP24A1 rs6068816(C>T)的多态性与乳腺癌的发病有关。

长、短效粒细胞刺激因子预防和治疗肺部恶性肿瘤化疗所致骨髓抑制的成本-效果分析

目的:对比长、短效粒细胞刺激因子预防和治疗肺部恶性肿瘤化疗所致骨髓抑制的成本-效果,为临床合理用药提供参考。方法:回顾性分析郑州大学附属肿瘤医院2017年1月-2018年6月期间使用长、短效粒细胞刺激因子预防和治疗肺部恶性肿瘤化疗所致骨髓抑制的132例病例,其中使用重组人粒细胞刺激因子注射液(短效,A组)60例,使用聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子注射液(长效,B组)72例,比较两组患者的临床疗效、骨髓抑制情况、不良反应发生情况,计算两组治疗方案的成本,进行成本-效果分析,并以下调药品价格20%进行敏感性分析。结果:A、B组患者的总有效率分别为71.7%、75.0%,差异无统计学意义(P>0.05),不同程度骨髓抑制情况的发生率和不良反应发生率差异也均无统计学意义(P>0.05);平均成本分别为(335.91±180.34)、(1982.75±603.15)元,A组成本明显低于B组(P<0.05),成本-效果比分别为4.69、26.44。以A组为参照,B组的增量成本-效果比为494.55。敏感性分析结果与成本-效果分析结果无差异。结论:重组人粒细胞刺激因子注射液和聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子注射液预防和治疗肺部恶性肿瘤化疗所致骨髓抑制的有效性相当,但前者的成本-效果比低于后者。

头孢克洛缓释片的制备与体外释放度考察

目的制备头孢克洛缓释片并对其体外释放度进行考察。方法以羟丙甲基纤维素(HPMC)为骨架材料,湿法制粒压片制备头孢克洛缓释片,采用相似因子法评价头孢克洛缓释片体外释放行为。考察HPMC黏度及用量、填充剂种类、释放介质及硬度对药物释放速度的影响。结果头孢克洛缓释片的体外释放行为符合零级释药动力学方程。HPMC黏度及用量、填充剂种类、释放介质对药物的释放速度有较大影响,而硬度对药物的释放速度无显著影响。结论制得的头孢克洛缓释片缓释效果良好,且制备方法简单,适于工业化生产。

乳腺癌患者多西他赛药时曲线下面积与中性粒细胞减少的相关性

目的研究乳腺癌患者化疗后,多西他赛(docetaxel,DTX)药时曲线下面积(area under curve,AUC)与血液学毒性(中性粒细胞减少)的相关性,为患者个体化给药提供理论依据。方法选择郑州大学附属肿瘤医院2016年12月—2017年7月接受AC序贯T化疗方案的94例乳腺癌患者,采用胶乳免疫比浊法测定患者静脉输注DTX后的血药浓度,并通过非混合效应模型软件计算多西他赛AUC。建立利用AUC预测化疗后中性粒细胞减少百分比的数学模型。结果多西他赛AUC在(0.7~3.9)mg·h/L之间,平均值为(2.34±0.7)mg·h/L,患者间AUC的变异系数(CV%)为30%。出现低级别(0~2级)及高级别(3~4)中性粒细胞减少的AUC平均值分别为2.29 mg·h/L和2.82 mg·h/L(P=0.003)。利用多西他赛AUC预测中性粒细胞减少百分比的模型为y=-1.8672x^2+25.658x-14.92,r=0.643。结论本研究建立的利用AUC预测中性粒细胞减少百分比的数学模型,为通过测定患者AUC进行多西他赛个体化的给药提供了理论依据。

依维莫司增强阿霉素抑制骨肉瘤干细胞的作用

背景:阿霉素能够抑制骨肉瘤细胞的增殖,但是阿霉素对骨肉瘤干细胞的作用以及依维莫司联合阿霉素对骨肉瘤干细胞的作用未见报道。目的:研究mTOR通路抑制剂依维莫司联合骨肉瘤化疗一线药物阿霉素对骨肉瘤干细胞增殖及侵袭的影响。方法:用免疫磁珠分选法分离人骨肉瘤细胞株MG63中的CD133^+骨肉瘤干细胞。MTT检测0,0.1,0.2,0.4 mg/L阿霉素以及0.2 mg/L阿霉素+20μmol/L依维莫司对骨肉瘤干细胞增殖的影响。Transwell小室检测0.2 mg/L阿霉素和0.2 mg/L阿霉素+20μmol/L依维莫司对骨肉瘤干细胞侵袭的影响。Western Blot检测0.2 mg/L阿霉素和0.2 mg/L阿霉素+20μmol/L依维莫司对骨肉瘤干细胞增殖细胞核抗原、基质金属蛋白酶蛋白表达的影响。结果与结论:(1)阿霉素能在一定质量浓度下抑制骨肉瘤干细胞的增殖,且依维莫司联合阿霉素较单独使用阿霉素时明显抑制骨肉瘤干细胞的增殖,说明依维莫司能够增强阿霉素对骨肉瘤干细胞增殖的抑制作用;(2)与单独使用阿霉素比较,依维莫司联合阿霉素作用于骨肉瘤干细胞后侵袭细胞数明显减少;(3)依维莫司联合阿霉素显著抑制骨肉瘤干细胞增殖细胞核抗原、基质金属蛋白酶蛋白的表达,提示依维莫司能够增强阿霉素抑制骨肉瘤干细胞增殖与侵袭的能力。

某医院重组人粒细胞刺激因子注射液的临床应用分析

目的对某医院重组人粒细胞刺激因子(rhG?CSF)注射液的使用情况进行调查分析与点评,为临床合理用药提供参考。方法简单随机抽样法抽取郑州大学附属肿瘤医院2017年1月至2018年1月应用rhG?CSF注射液的住院病人病历1 203份进行回顾性调查,统计其相关用药信息,并对其临床应用合理性进行分析。结果在抽取的1 203份病历中,不合理病例有438份,占总病例数的36.4%,其中主要集中在适应证、用药时机、用药剂量及疗程等方面。结论该医院rhG?CSF注射液临床应用存在不合理现象,临床药师要与临床医师共同促进rhG?CSF注射液的规范使用。

临床研究协调员在药物临床试验实施中的常见质量问题及对策

临床研究协调员(CRC)作为临床试验的重要参与者,其业务能力和职业素养直接影响临床试验质量。本研究基于药物临床试验质量控制工作经验,总结了在临床试验实施中CRC人员资质与职责分工、数据记录、文档管理、药品管理、生物样本管理、受试者管理等方面存在的质量控制常见问题。我国CRC尚处于发展阶段,存在行业标准缺乏、能力参差不齐等缺陷,临床研究机构和申办方均应采取质量应对措施,进一步保证临床研究的科学性、严谨性和规范性。建议建立机构现场管理组织(SMO)优选制度、CRC准入及培训制度,建设临床试验信息化平台,加强质量控制及受试者保护。

松树皮原花青素对乳腺癌细胞增殖和转移作用

目的:研究松树皮提取物原花青素(PMBE)对人乳腺癌MCF-7细胞体外转移及侵袭作用的影响,并初步探讨其作用机制。方法:不同浓度PMBE作用于体外培养的人乳腺癌MCF-7细胞,采用MTT法检测其对细胞增殖抑制作用的影响;通过划痕实验检测PMBE对细胞转移能力的影响;体外侵袭实验(Transwell小室)检测PMBE对细胞侵袭能力的影响;最后应用免疫印迹(Western-blot)方法检测PMBE对MCF-7细胞基质金属蛋白酶-9表达水平的影响。结果:随着PMBE浓度的增加,MTT法检测结果表明,PMBE在体外对MCF-7细胞有明显的增殖抑制作用,半数致死浓度(IC_(50))值为(71±2.1)μg·m L^(-1);PMBE质量浓度为5、15μg·m L^(-1)时,细胞划痕的闭合能力分别下降25%、36%,细胞侵袭能力下降59%、79%;PMBE能显著抑制MCF-7细胞MMP-9蛋白的表达。结论:PMBE能有效抑制乳腺癌增殖和转移,其作用机制可能与降低乳腺癌细胞运动能力有关,PMBE有潜力开发为治疗乳腺癌的药物。

体外诊断试剂临床试验的质量控制

随着体外诊断技术的发展和体外诊断试剂生产企业研发水平的不断提高,体外诊断试剂临床试验日益增多。部分体外诊断试剂在获得食品药品监督管理部门注册许可进入临床使用前,必须要经过临床试验,但体外诊断试剂临床试验在实施过程中存在较多质量问题。本文从体外诊断试剂临床试验项目预试验实施、知情同意、方案入排标准设计及执行、生物样本管理、伴随诊断试剂盒肿瘤疗效评价数据收集、临床试验记录和报告等临床试验项目实施关键点,分析了体外诊断试剂临床试验质量控制中存在的问题,为体外诊断试剂临床试验的规范化实施提供参考。