河西绒山羊次级毛囊超微结构的周期性变化

【目的】研究成年绒山羊次级毛囊组织超微结构的周期性变化过程,为研究绒山羊绒毛生长的分子调控机理奠定形态学基础。【方法】活体采集的皮肤样品,经3%的戊二醛前固定和锇酸的后固定,通过上行酒精梯度脱水后进行包埋。制作河西绒山羊一年周期内每个月的皮肤超薄切片,经铀和铅双染色后在透射电镜下进行超微结构的观察、拍照和分析。【结果】河西绒山羊次级毛囊组织的超微结构随着毛生长周期呈周期性变化,可分为5个不同的时期,即1—2月为休止期、3—4月为生长前期、5—8月为生长期、9—10月为退行前期、11—12月为退行期。【结论】阐述了河西绒山羊次级毛囊在一个完整的生长循环过程中所处的5个不同的时期,为绒山羊绒毛相关领域的研究奠定超微结构方面的基础。

成年牦牛心室肌微血管床的形态学特征

对6头健康成年牦牛颈静脉放血致死并取出心脏,经左右冠状动脉同时灌注甲醛碳素墨水,再经40 g/L多聚甲醛水溶液充分固定,取心室组织块石蜡包埋、切片,光学显微镜观察,显微镜测微尺测量并照相。结果显示,牦牛心室微循环床中微动脉的直径小于100μm,以分叉状或梳状发出分支,走行多弯曲,呈蛇行状或螺旋状。终末微动脉管径均小于15μm。牦牛的毛细血管直径小于10μm。毛细血管之间形成H形或Y形的广泛吻合。吻合的毛细血管主要有3种不同的来源。牦牛微静脉的直径小于300μm,呈树根样结构。一条微静脉由若干条不同来源的毛细血管结合而成。牦牛心室肌中存在着动静脉吻合。

猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株自然感染病例的病理分析

为探讨猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)变异毒株的致病特点,为其发病机制研究提供重要资料。对临床感染病例的肺脏、脾、肾、淋巴结等组织进行了显微和超微病理结构变化的观察。PRRSV变异毒株的病理损伤以间质性肺炎和全身性急性淋巴结炎为特征,伴有肝、脾、肾、心脏、胃和肠等器官的变性坏死;肺泡巨噬细胞、淋巴结及脾脏中的淋巴细胞和浆细胞均被不同程度的感染,并含有大量病毒包涵体。研究表明,PRRSV变异毒株的组织嗜性与中国典型毒株ch-1a相比已有较大的改变,其感染会引起全身性免疫抑制。

成年牦牛心室壁微血管的形态特征

用ABS血管铸型、扫描电镜观察法和血管炭素墨水灌注、组织切片法研究了成年牦牛心脏微血管的构筑特征,首次对各级微血管的管径和毛细血管的密度进行了测量,并对成年牦牛心室壁的微血管进行了分类。结果显示：成年牦牛心脏微动脉、毛细血管前微动脉和毛细血管的管径平均值分别为为78.50±10.23μm,16.24±2.27μm,6.57±2.28μm。其管径范围分别为12.5-100μm,12.50~19.99μm,6.25-12.50μm。成年牦牛心脏微动脉一般经3-4级分支才发出毛细血管,其第一、第二、第三和第四级分支的管径平均值分别为87.64±4.87μm,69.46±6.67μm,48.52±5.77μm,30.45±5.44μm。其范围分别为79.55-95μm,59.31~79.55μm,37.50~59.31μm,19.99~37.50μm。成年牦牛心肌层毛细血管的密度为2528±263根/mm^2,靠近心外膜处毛细血管的密度为1864±179根/mm^2,心内膜毛细血管的密度为1636±235根/mm^2。成年牦牛心脏微动脉铸型表面呈典型的＂树皮样＂结构,偶尔可见卵圆形的内皮细胞核压痕。成年牦牛心脏毛细血管前微动脉铸型形态呈锥状,铸型表面有环行缩窄。成年牦牛心脏的毛细血管铸型表面光滑,有环形缩窄,无内皮细胞核压痕。成年牦牛心肌层中毛细血管与心肌纤维平行,并形成＂H＂形或＂Y＂形的广泛吻合,而在靠近心内膜处毛细血管形态较为扭曲,毛细血管多形成平面或立体的吻合。成年牦牛心脏微静脉管径多在300μm以下,管腔扁且不规则,微静脉铸型呈＂树根＂样结构。

环县绒山羊羔羊冬季舍饲育肥效果

为了提高环县绒山羊冬季饲养效果,把6月龄的子午岭黑山羊羔羊和辽宁绒山羊(♂)×子午岭黑山羊(♀)杂种一代羔羊(简称F1代羔羊)作为试验对象,以环县农民群众传统采用的饲养模式——放牧加少量补饲(简称"放牧+补饲")作为对照,采用全舍饲方式对两个试验群体进行60d的育肥试验,综合测定绒山羊羔羊的生长结果、屠宰性能和肉品质指标,计算经济效益。结果表明,在两个试验群体内,全舍饲组的育肥末重、育肥期增重、平均日增重、胴体重和屠宰率均极显著高于"放牧+补饲"组(P<0.01)。子午岭黑山羊羔羊全舍饲组的平均日增重、胴体重和屠宰率分别是102.5g、10.75kg和47.66%,分别较"放牧+补饲"组提高了87.2g、3.46kg和12.54%。F1代羔羊全舍饲组的平均日增重、胴体重和屠宰率分别是117.2g、11.71kg和49.62%,分别较"放牧+补饲"组提高了96.7g、4.16kg和13.83%。全舍饲组的失水率和嫩度显著低于"放牧+补饲"组(P<0.05),其它肉品质指标在全舍饲和"放牧+补饲"组间无显著差异(P>0.05)。子午岭黑山羊羔羊和F1代羔羊全舍饲组的纯收入较"放牧+补饲"组同类型羔羊分别提高了110.2和75元。因此,较传统饲养模式,全舍饲育肥能够明显增加环县绒山羊羔羊冬季生长效果和产肉性能,改善部分肉品质,显著提高养殖效益。

口蹄疫病毒整联蛋白受体的研究进展

从组织分布、各毒株利用率、配体结合区介导感染的能力及β亚基胞质区作用等方面论述了4种整联蛋白ανβ1、ανβ3、ανβ6和ανβ8的研究进展,旨在阐明各整联蛋白决定口蹄疫病毒宿主组织嗜性的作用,并为口蹄疫病毒致病机制的研究提供理论依据。

口蹄疫病毒3D基因的克隆及其编码蛋白的结构和功能预测

采用RT-PCR技术,对AsiaⅠ型口蹄疫病毒的3D基因进行克隆,并对其序列进行比对,同时利用Ex-pasy等生物软件对3D蛋白的二级、三级结构及生物学特性进行预测和分析.结果表明:3D蛋白在口蹄疫各血清型间高度保守,分子中含有一个糖基化位点及多个酪氨酸、苏氨酸、丝氨酸位点,并存在一个单股正链RNA病毒依赖RNA多聚酶的催化区;结构特点显示3D蛋白为口蹄疫病毒复制所需的多聚酶.

不同荧光染料对苜蓿原生质体染色效果的研究

以紫花苜蓿品种甘农4号(Madicago sativa L.‘Gannong No.4’)愈伤组织酶解的原生质体为材料,采用FDA、罗丹明B、罗丹明6G、吖啶橙和DAPI共5种荧光染料对原生质体进行染色效果比较,以期为原生质体活力测定、细胞核计数及原生质体融合过程的观察提供参考。结果表明:FDA、罗丹明B、罗丹明6G和吖啶橙均可使紫花苜蓿原生质体清晰染色,可用于细胞融合时亲本原生质体的标识。FDA是检测原生质体活力的理想染料;吖啶橙和DAPI可对细胞核进行特异性染色,可用于融合时细胞核的观察和计数,前者还可用于检测融合细胞的活力。通过对异源融合体的鉴别及其活力的测定,为摸索融合条件和融合细胞的培养提供了理论依据。

初生与成年牦牛心肌的组织学结构比较

为探究牦牛心肌发育过程中组织学结构的变化,采用组织学、组织化学和免疫组织化学方法对初生和成年牦牛心肌的组织学结构、心钠素(ANP)和缝隙连接蛋白43(Cx43)的表达情况进行了观察。结果显示,初生牦牛心肌细胞数量少且细短,闰盘为直线型或V型,心肌细胞间以Ⅲ型胶原纤维为主,Ⅰ型胶原纤维较少;成年牦牛心肌细胞粗长,其数量是初生牦牛的2倍,闰盘呈竹节样吻合或阶梯状,心肌细胞间以Ⅰ型胶原纤维为主。初生和成年牦牛,ANP在心房肌细胞中均表达强烈,且右心房表达量显著高于左心房,心室肌细胞中不表达。ANP在普肯耶纤维中有少量表达。初生牦牛心房肌细胞ANP表达量高于成年牦牛。在心肌细胞膜和胞质内,初生牦牛Cx43表达强于成年牦牛,但在闰盘内,成年牦牛Cx43表达强于初生牦牛。Cx43在初生和成年牦牛的普肯耶纤维中均呈膜阳性。结果提示,初生与成年牦牛相比,成年牦牛的心肌细胞变粗长且数量增多,ANP在心房肌表达减弱,Cx43在闰盘表达更显著,说明成年牦牛较初生牦牛适应循环变化的代偿能力呈进行性减弱;细胞间牢固性增加,有助于实现心肌收缩信号的迅速传导。

高原牦牛脾的组织结构特点

旨在研究牦牛脾发育过程中组织结构的变化,进一步探讨牦牛脾的结构特点。运用解剖组织学方法对初生牦牛及成年牦牛脾组织结构进行观察。结果显示,初生牦牛脾组织结构发育不全,白髓无脾小结,仅观察到动脉周围淋巴鞘(PALS)。成年牦牛脾组织结构发育完整,白髓包括脾小结和动脉周围淋巴鞘。脾小结呈现3种不同的形态,单位面积内脾小结个数Ns=0.145个·mm-2,成年牦牛脾白髓相对面积Aw=8.82%;初生牦牛脾白髓相对面积Aw=5.46%。2个年龄段牦牛脾白髓相对面积差异极显著(P<0.01)。电镜观察显示牦牛脾无完整窦壁结构。本研究首次报道了牦牛脾小结的发育特点,牦牛脾为无窦型脾,成年牦牛白髓面积大于初生牦牛。

牛源整合素β_1亚基的克隆及表达载体的构建

参照已公布整合素β1亚基的基因组序列,设计并合成了对克隆引物,以RT-PCR方法从牛肺组织扩增出约2 400 bp的β1基因,经回收纯化连入PGEM-T载体,测序.依照测序结果设计1对原核表达引物,1对真核表达引物,分别以克隆载体PGEMβ1为模板扩增目的片段,经相应的EcoR I、XhoI和EcoR I、XbaI酶切纯化后,在T4DNA连接酶的作用下,定向亚克隆到原核表达载体pET-28a和真核表达载体pCDNA3.1zero(+)中,PCR、酶切鉴定及序列测定表明,成功构建了β1亚基原核表达载体pETβ1及真核表达载体pCDNAβ1.

FMDV整联蛋白受体β1亚基的克隆及其配体黏附区多抗的制备

采用RT-PCR技术从牛气管组织扩增出2400bp的β1基因,回收纯化连入PGEM-T载体,测序。用Expasy软件对β1基因的抗原性进行分析,选取胞外区334-861bp的配体结合区与6×His融合,在大肠杆菌中大规模诱导表达,并经Ni2＋亲和柱层析纯化。通过SDS-PAGE鉴定后,应用纯化蛋白免疫新西兰家兔,获得效价在1：12800以上的多抗,Western blotting鉴定表明此抗体可特异性的与表达的融合蛋白作用。

口蹄疫病毒前导蛋白结构及功能研究进展

口蹄疫病毒前导蛋白为一种木瓜蛋白半胱氨酸酶,用一个半胱氨酸区作为亲和试剂。由于结构上的特殊性,使其能够进行自身切割,从正合成的多聚蛋白中游离自己,并通过切割宿主蛋白eIF的两种相似因子4GⅠ和4GⅡ减弱宿主细胞转录自身mRNA的能力,尤其使α/β干扰素的翻译受到抑制,从而为病毒的复制及感染创造有利条件。文章从结构特点、功能特性方面对其进行阐述。

猪繁殖与呼吸综合征病毒NX-1株ORF5,ORF7基因的克隆

为了从分子水平了解猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）ORF5和ORF7基因的特征,并为PRRSV的遗传进化和分子变异研究提供资料。对宁夏地区流行的PRRSV进行采样分析,运用RT-PCR技术分别扩增了PRRSV NX-1/2008毒株囊膜蛋白基因ORF5与衣壳蛋白基因ORF7,并对其进行了克隆,随后利用DNAS-TAR生物软件进行了同源性比对和进化分析。结果显示,PRRSV NX-1/2008毒株的ORF5,ORF7基因均与JXa-1/2007等高致病性毒株高度同源,ORF7的氨基酸同源性则达到了100%。与空间距离较远的JXa-1/2007毒株相比,NX-1株的ORF5基因在中和抗体决定区196位上发生突变,而与相距较近的HUB-1/2006,CH-1 a/2001等毒株相比较,则无此突变;与CH-1 a/2001毒株相比,GP5蛋白的免疫原性核心位点B 39位的F→I,在诱导中和抗体起重要作用的33位糖基化位点N→S,同时,诱骗位点A（30~38氨基酸）的32,33和35位氨基酸都发生了突变。NX-1株的ORF7基因与国内CH-1 a/2001等低致病性毒株间的突变有69%位于抗原决定区,而其中有56%是高致病性毒株的主动突变。研究表明,分离的PRRSV高致病性毒株与低致病性毒株的抗原性在基因组上有较大范围的变异,且这种变异可能还主要位于免疫决定区。

BMP2、HSP27基因在不同地域绒山羊皮肤组织中的表达分布研究

为探究不同地域环境与绒山羊次级毛囊发育相关因子表达分布的相关性,本实验选取原产地内蒙古绒山羊和辽宁绒山羊(2岁)以及引进到甘肃环县2年的内蒙古绒山羊和辽宁绒山羊(2岁)各8只,分别采用透射电镜技术确定毛囊的超微结构特点;利用qPCR技术检测BMP2、HSP27基因在绒山羊皮肤组织中的表达差异;通过免疫组化技术测定同种绒山羊在不同地域环境下BMP2、HSP27蛋白在毛囊中的定位表达。结果显示:8月份绒山羊毛囊结构完整,处于毛囊生长期;BMP2、HSP27基因mRNA在原产地与引入地绒山羊皮肤组织中均有表达,两地绒山羊皮肤组织中BMP2基因表达几乎无差异(P>0.05),但HSP27基因mRNA在引入地与原产地表达量相比差异显著;免疫组化发现BMP2、HSP27蛋白主要弱表达于表皮层、毛囊的内根鞘,而HSP27蛋白不仅在表皮层、次级毛囊的内根鞘表达,其在毛囊外根鞘、毛乳头也呈强阳性表达。本研究表明BMP2、HSP27基因在不同地域绒山羊皮肤组织中表达分布存在差异。

绒山羊毛囊超微结构在透射电镜下的识别依据

为阐明绒山羊毛囊超微结构在透射电镜下的识别依据,在绒山羊一个生长周期内,每个月月初活体采集皮肤样品,经固定后制作超薄切片,利用透射电镜拍照和分析。结果显示,绒山羊毛囊超微结构随生长周期的变化而出现不同特征的变化。在毛囊发育早期髓质细胞内可见透明毛质颗粒,细胞表面伸出伪足以桥粒相连,后期毛干形成后髓质细胞发生程序性死亡;毛囊发育中期内根鞘由亨勒层、赫胥黎层和内根鞘小皮由内而外呈同心圆排列,亨勒层为一层角化的扁细胞,在毛囊所有的结构中角质化出现的最早,毛囊发育早晚期内根鞘三层结构不完整。外根鞘毛囊上部和中部为多层细胞,呈正方形,在毛囊的底部为单层,呈扁平型;结缔组织鞘中富含胶原纤维、弹性纤维,感觉神经末梢和血管,在毛囊生长周期内结构变化不大。毛囊发育晚期结缔组织鞘和外根鞘分离。明确不同生长时期毛囊超微结构的特征,能够准确地对生长中的毛囊各层进行识别和定位。

羊脑多头蚴的超微结构观察

为观察羊脑多头蚴的超微结构,寻找自然感染羊脑多头蚴的病羊,采集多头带绦虫续绦期幼虫,固定于25mL/L戊二醛中,分别取其头节、囊壁、颈部区,超薄切片后进行透射电镜观察。结果表明,羊脑多头蚴的囊壁结构具有微毛,远离头节的囊壁微毛与头节附近颈部区囊壁的微毛分布情况不同;囊壁可明显分为皮层、间质层、实质区;在实质区可观察到皮层细胞、实质细胞、成石灰小体细胞、焰细胞、成肌细胞以及排泄系统结构;头节中可观察到很发达的肌纤维结构,头节内部有类似于囊壁的皮层结构,并可见粗大微毛,细胞种类明显少于囊壁实质区,含颗粒的囊泡结构明显增多。证明羊脑多头蚴囊壁的结构和细胞种类与其他绦虫相似,但有比较发达的排泄系统;头节外表面无皮层结构,仅有呈环状围绕的纤维和囊泡结构。

PRRSV-GSLZ-1/2009细胞毒和组织毒致病特征的比较

为了研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)野毒株在细胞适应中的遗传变异与其致病性的关系。在进行遗传变异分析后,将GSLZ-1/2009细胞适应毒和组织毒同时接种36日龄健康仔猪,对感染后的临床症状、体征变化、抗体及炎性因子水平进行了实时监测和动力学分析,并对组织病变进行了显微观察。结果显示:在细胞适应过程中致病相关基因并未发生任何突变,但细胞适应株所诱发的抗体及炎症因子反应均明显较组织毒弱,且所造成的病理损伤也比较轻微。表明PRRSV野毒株在细胞适应过程中毒力会减弱,而毒株的弱化可能由遗传变异之外的因素决定。

口蹄疫紧急疫苗研究进展

口蹄疫（foot-and-mouth disease,FMD）紧急疫苗为一种高效力疫苗(PD50≥6),其免疫交叉性广泛,接种34天后即可诱发保护性免疫反应,并能阻止或减少病毒在咽喉等其它易于病毒藏匿部位的复制、排泄及持续感染的形成,所诱发抗体的持久性长于传统灭活疫苗。紧急疫苗2001年在荷兰及90年代在希腊等东欧国家的成功应用,突现出其用于应急预防的优势。近来,世界口蹄疫参考实验室和其它国家的多项研究证实,紧急疫苗在抵抗间接感染和直接感染方面均有着其它现有疫苗无可比拟的优势,可作为防患未然的有力武器。目前,紧急疫苗已被英国等无口蹄疫国家作为防控口蹄疫的战略储备疫苗。本文将从紧急疫苗迅速诱发保护反应的机制、抗原普及免疫效力等方面加以阐述。