舒林酸抑制人胃腺癌细胞增殖及诱导凋亡

目的在体外对舒林酸抗人胃腺癌细胞增殖和凋亡诱导作用及其机制进行初步研究.方法采用人胃腺癌细胞株 MKN45,MKN28作为研究对象.体外药物敏感试验(MTT)检测不同浓度和作用时间的舒林酸对细胞的增殖抑制效应;分别用 Hoechst33258细胞核荧光染色、透射电镜和 DNA 琼脂糖凝胶电泳观察舒林酸诱导的细胞凋亡改变;应用 Western 斑点免疫印迹法观察经舒林酸2rnmol·L^(-1)和4mmol·L^(-1)作用24h 后细胞内环氧化酶-2(COX-2)和凋亡抑制蛋白 Bcl-2表达程度的变化.结果舒林酸对人胃腺癌细胞 MKN45,MKN28的杀伤率随着剂量的增大和作用时间的延长而增加,舒林酸对不同类型的细胞杀伤率不同.舒林酸能够诱导人胃腺癌细胞 MKN45,MKN28产生凋亡,凋亡诱导作用的强弱同样具有时间和剂量依赖性,而且对不同类型胃癌细胞的凋亡诱导效应有显著差异.经舒林酸2 mmol·L^(-1)和4mmol·L^(-1)作用24h 后,MKN45细胞内 COX-2和 Bcl-2蛋白比未经舒林酸作用的细胞表达明显减少,而 MKN28细胞内 COX-2和 Bcl-2蛋白的表达未出现明显变化.结论舒林酸在体外对人胃腺癌细胞株 MKN45和 MKN28有良好的增殖抑制作用,诱导凋亡是其抑制胃癌细胞增殖的重要作用机制.舒林酸对人胃腺癌细胞的抑制和凋亡诱导作用与其抑制细胞内环氧化酶-2,并进而抑制 Bcl-2的表达有关,并可能与胃癌细胞的分化状态有关.

舒林酸和吲哚美辛对人血管内皮细胞ECV304的生长抑制作用

目的 体外研究非甾体类消炎药对人血管内皮细胞的生长抑制作用。方法 采用舒林酸和吲哚美辛作用于人脐静脉内皮细胞株ECV30 4 ,并设置不同的作用浓度和作用时间 ,以体外药物敏感实验 (MTT)检测舒林酸和吲哚美辛在不同浓度及作用时间下对ECV30 4细胞的增殖抑制效应 ;以流式细胞仪技术和Hoechst332 5 8荧光染色检测药物作用后细胞有无凋亡改变及其形态学变化。结果 舒林酸和吲哚美辛在体外对ECV30 4细胞均有显著的生长抑制作用 ,并且具有时间和剂量依赖性 ,舒林酸能显著诱导ECV30 4细胞产生凋亡。结论 舒林酸和吲哚美辛在体外具有良好的抑制人脐静脉内皮细胞株ECV30 4生长的作用 ,非甾体类消炎药能够诱导血管内皮细胞产生凋亡而抑制其生长 ,同时也可能存在其他的作用机制。

乙酰胆碱酯酶染色法观察体外培养成骨细胞的凋亡

目的观察体外培养大鼠颅骨成骨细胞的凋亡。方法运用我们新建立的AChE染色识别法。结果显示原代培养第40天的培养物中有处于不同时期的凋亡细胞。结论原代培养大鼠颅骨成骨细胞在经历增殖期、基质形成期、矿化期后部分细胞进入凋亡阶段。我们建立的凋亡细胞染色识别法方法简便,成本低廉,具有开发前景。

东方蝾螈原肠形成期瓶状细胞的结构及其对胚胎发育的影响

以100只东方蝾螈早期胚胎为材料，用SEM和TEM对瓶状细胞形态结构和除去瓶状细胞的胚胎进行观察。去除瓶状细胞后，胚胎的原肠形成不会中断，外包和内卷仍能正常进行，并可以发育成幼螈，但有部分胚胎原肠前端缺失。长期培养的蝾螈胚对针刺激有反应，幼虫阶段可自由活动。我们的结论是：1）东方蝾螈原肠胚的瓶状细胞除了原肠前瑞存在外，还有部分瓶状细胞与原肠长轴垂直，从力学角度推断瓶状细胞在原肠形成过程中不起主要作用；2）除去瓶状细胞后原肠形成不被阻断，内卷和外包仍能继续进行；3）除去了瓶状细胞的胚胎仍然可以发育成基本正常的幼螈，但除去细胞过多时则会影响头腹部和尾部的发育。

用丰富培基作为选择压力在酿酒酵母PRO^+转化子中稳定遗传的分泌型表达载体

构建了一个含酿酒酵母ＰＲＯ３基因的分泌型表达载体ｐＣＢｙ３１０，在ｐＣＢｙ３１０上插入 βＨＣＧ（人绒毛膜促性腺激素β亚基）－ｃＤＮＡ以形成一个重组质粒ｐＣＢｙ３１４。利用酿酒酵母脯 氨酸合成酶基因缺陷株的独特属性，即它们不能在丰富培基中生长，ｐＣＢｙ３１４在酿酒酵母 Ｐｒｏ３~－缺陷株（ＭＢ２９９－Ａ）的转化子可以在丰富培基中生长，而且保持有丝分裂稳定性。在优 化条件（但尚非最佳条件）下，βＨＣＧ在培液中的产量是６５０μｇ／Ｌ。说明ＹＰＤ可以用为选择培 基，而且酿酒酵母在ＹＰＤ中比在选择培基中生长更旺盛，可以提高表达产物的产量，加之 ＹＰＤ的成分简单又便宜。因此得出结论，ＰＲＯ基因可以广泛地用于构建在酿酒酵母中克隆和 表达外源基因的载体，以便用丰富培基作为选择压力直接筛选。

N-苯基-2-胺和N-苯基-1-胺的大鼠体内代谢

N-苯基-2-萘胺(P2NA)和 N-苯基-1-萘胺(P1NA)主要用作橡胶制品的抗氧化剂。由于它们对大小鼠诱发癌症而引起各界对深入研究其代谢和致癌机理的重视。芳香胺类致癌物的代谢是通过羟化酶、偶氮还原酶、去甲基酶等而实现,其中尤以羟化酶较为重要。大多数致癌性芳香胺及酰胺都是通过N-羟基化而激活,生成最终致癌物。但我们在用新鲜分离的肝细胞作P2NA和P1NA体外代谢时,其主要产物首先为环氧化物,再进一步生成酚类化合物。环氧化物具有较强的使细胞恶性转化的能力,因其与核酸、蛋白质的结合较强,并具有致突变作用,因而认为环氧化物可能是某些致癌物的最终致癌物。而环羟基化的生物转化可能是解毒作用。本文研究了P2NA和P1NA的大鼠体内代谢,旨在与用大鼠肝细胞的体外代谢转化过程作比较,进一步阐明它们的致癌机理。

舒林酸诱导人肝细胞癌凋亡及对环氧合酶-2和Bcl-2蛋白表达的影响

目的 探讨舒林酸在肝细胞癌化学预防和治疗中的应用价值。方法 采用人肝细胞癌细胞株SMMC772 1、HepG2 作为研究对象。体外药物敏感试验检测不同浓度和作用时间的舒林酸对细胞的增殖抑制效应 ;分别用Hoechst 332 5 8细胞核荧光染色和透射电镜观察舒林酸诱导的细胞凋亡的形态学改变 ,并计算相应的细胞凋亡指数 (AI) ;应用Western斑点印迹法观察不同浓度舒林酸作用后细胞内环氧合酶 2 (COX 2 )和凋亡抑制蛋白Bcl 2表达程度的变化。结果 舒林酸对人肝细胞癌细胞SMMC772 1、HepG2 具有显著的增殖抑制和凋亡诱导作用 ,并且具有时间和剂量依赖性。舒林酸对不同类型细胞的杀伤率和凋亡诱导效应有显著差异。经舒林酸 2mmol/L和 4mmol/L作用 2 4h后 ,细胞内COX 2和Bcl 2蛋白的表达比未经舒林酸作用的细胞表达明显减少。结论 舒林酸在体外对人肝细胞癌细胞株SMMC 772 1和HepG2 具有显著的增殖抑制和诱导凋亡作用 ,且与其抑制细胞内COX 2和Bcl