先天性单侧输精管缺如合并无精子症CFTR基因突变检测

目的:探讨先天性单侧输精管缺如(CUAVD)合并无精子症患者囊性纤维化跨膜转导(CFTR)基因全外显子检测的结果与意义。方法:抽取CUAVD合并无精子症6例患者外周血行CFTR全外显子突变及多态性检测,测序结果与UCSC Genome Browser on Human Dec.2013 Assembly进行在线比对及分析。结果:6例CUAVD合并无精子症患者中,1例第6号外显子中可检测到1个已知错义突变c.592G>C,2例患者第10号外显子前非编码区域发现c.1210-12T[5]剪切突变,且该2例患者合并第11号外显子上V470单倍体。结论:CUAVD合并无精子症患者CFTR全外显子基因突变有一定的检出率,有必要对这部分患者进行CFTR基因突变检测。

膀胱癌免疫治疗相关肿瘤微环境及其在人和小鼠肿瘤中的组成特征初探

目的应用生物信息学分析鉴定膀胱癌免疫治疗中起关键作用的肿瘤微环境(TME)组成特征,初步分析这些组分在人膀胱癌组织和BBN(N-butyl-N-(4-hydroxybutyl)-nitrosamine)诱导的自发小鼠膀胱肿瘤中表型的相似性。方法分析晚期膀胱癌PD-L1阻断治疗IMvigor210数据集,利用DESeq2筛选与疗效相关的差异基因,通过GO和KEGG通路富集分析找出差异富集的通路;采用IOBR分析TME中的细胞浸润特征。通过TCGA数据库分析差异浸润细胞基因集与膀胱癌预后和分期的关系,在我院32例膀胱癌组织标本中进行免疫组化验证。建立BBN诱导的自发小鼠膀胱肿瘤模型,通过H&E染色和免疫组化对BBN诱导的自发小鼠膀胱肿瘤和人膀胱癌进展相似性及其TME主要组分进行比较。结果在IMvigor210数据集中存在521个与免疫治疗疗效相关的差异基因,其中44个差异基因富集在含胶原细胞外基质上,提示成纤维细胞与免疫治疗疗效相关。TME分析发现细胞周期、组蛋白等肿瘤细胞基因集与NK细胞、CD8^(+)T细胞基因集在膀胱癌免疫治疗有效组中富集,而炎症性肿瘤相关成纤维细胞基因集在免疫治疗无效组中富集。TCGA分析显示:NK细胞和CD8^(+)T细胞基因集与膀胱癌患者总体生存时间呈正相关,CD56表达与膀胱癌病理分期呈正相关;PDGFRB表达与膀胱癌病理分期呈正相关。相比于低分期膀胱癌,PDGFRB^(+)成纤维细胞在高分期膀胱癌中数量更多。在BBN小鼠模型中,BBN诱导的自发小鼠膀胱肿瘤发生率随着诱导时间逐渐升高,最终发展为肌层浸润性膀胱癌。免疫组化染色显示:小鼠和人膀胱肿瘤的TME中NK细胞和CD8^(+)T细胞以及成纤维细胞的浸润特征相似。结论本研究结合生信分析和免疫组化评分发现:膀胱癌中NK细胞、CD8^(+)T细胞和成纤维细胞与免疫治疗疗效和预后具有相关性;这些细胞在BBN诱导的自发小鼠膀胱肿瘤与人膀胱癌组织中的浸润表型相似。这些结果可为研究膀胱癌免疫治疗的机制提供理论依据和动物模型。

基于尿动力学结果的二阶聚类分析在神经源性膀胱患者骶神经调控术二期转化中的预测价值

目的基于尿动力学检查对神经源性膀胱(NB)患者行二阶聚类分析,并探讨影响骶神经调控术(SNM)二期转化率的特征。方法回顾性分析2018年9月至2023年8月于中山大学孙逸仙纪念医院行SNM一期测试的174例NB患者的临床资料。男94例,女80例;年龄(50.4±17.9)岁;病程为2(1,3)年,体质量指数为21.5(20.0,25)kg/m^(2),50例伴慢性高血压病或糖尿病。77例(44.3%)出现排尿期症状,47例(27.0%)出现储尿期症状,50例(28.7%)出现混合症状;110例(63.2%)来源于脊髓病变,21例(12.1%)来源于颅脑病变,36例(20.7%)来源于周围神经病变,7例(4.0%)来源于其他原因病变。所有患者治疗前均行尿动力学检查。测试期内,患者主观症状或客观观察指标改善>50%,定义为一期测试成功,可行二期手术(为转化组)。分析患者的二期转化率。比较转化组与未转化组患者临床资料及尿动力学检查结果的差异。通过二阶聚类分析对174例患者进行分组,分为两组,比较两组临床资料、尿动力学检查指标及SNM二期转化率的差异。结果174例行一期手术的患者中,126例(72%)治疗成功,行二期手术。转化组较未转化组的女性比例更高[51.6%(65/126)与31.2%(15/48)]、年龄更低[(48.1±18.3)岁与(56.4±15.4)岁]、伴慢性病比例更低[23.9%(30/126)与41.7%(20/48)]、储尿期症状比例更高[33.3%(42/126)与10.4%(5/48)]、膀胱感觉敏感比例更高[50.0%(63/126)与11.1%(14/48)]、逼尿肌收缩力正常的比例更高[26.2%(33/126)与10.4%(5/48)]、逼尿肌-括约肌协同失调比例更高[21.4%(27/126)与4.2%(2/48)]残余尿量更少[105.5(49.3,231.3)ml与197.9(114.8,284.8)ml](均P<0.05)。排除共线性影响后,二阶聚类分析主要基于协同情况、逼尿肌稳定性和逼尿肌收缩力将患者分成两组,第1组为98例,第2组为76例,其中第2组二期转化率高于第1组[82.9%(63/76)与64.3%(63/98)]。第2组较第1组患者储尿期症状比例[43.4%(33/76)与14.3%(14/98)]、膀胱感觉敏感比例[67.1%(51/76)与26.5%(26/98)]、逼尿肌过度活动比例[46.1%(35/76)与3.1%(3/98)]、收缩力正常患者的比例[43.4%(33/76)与5.1%(5/98)]、逼尿肌-括约肌协同失调比例[38.2%(29/76)与0]更高,残余尿量[69.0(23.8,136.6)ml与197.9(123.2,287.4)ml]及膀胱最大灌注容量更小[(281.9±144.9)ml与(430.4±176.7)ml],差异均有统计学意义(P<0.01)。结论储尿期症状、低残余尿量、膀胱感觉敏感、逼尿肌过度活动、收缩力正常或逼尿肌-括约肌协同失调的患者提示有更高的二期转化率,更值得推荐行SNM测试。

大鼠精索静脉曲张睾丸组织的蛋白质组学研究

目的精索静脉曲张是男性不育的首要病因,本课题利用蛋白组学技术筛选精索静脉曲张大鼠睾丸中表达变化显著蛋白,探索精索静脉曲张引起不育的可能分子机制。方法雄性Wistar大鼠16只,随机分为对照组和精索静脉曲张实验组。实验组大鼠施行左肾静脉部分结扎术来诱导产生精索静脉曲张,对照组行假手术作为阴性对照。30 d后,收集全部大鼠的左侧睾丸。采用原位末端脱氧核苷酸转移酶标记(Tunel)法检测两组大鼠生精细胞凋亡情况,进而比较两组生精细胞的凋亡指数。利用双向凝胶电泳技术(2-DE)寻找两组大鼠睾丸中表达有显著性差异的蛋白质点,然后进行基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱鉴定(MALDI-TOF MS)。结果双向凝胶电泳结果显示21个蛋白质点在两组间存在显著性差异。在精索静脉曲张大鼠睾丸中有8个蛋白质点表达上升、13个下降,这些蛋白功能涉及蛋白质合成、加工、降解,基因表达调控,信号转导,能量代谢,凋亡,自由基代谢等。Tunel证实实验组大鼠睾丸中生精细胞凋亡指数显著高于对照组,且本实验筛选出14-3-3ε、hnRNPF以及LZTFL1三种蛋白与凋亡相关。结论蛋白组学筛选出精索静脉曲张大鼠睾丸差异表达蛋白,并进一步证实精索静脉曲张促进睾丸生精细胞凋亡,其中相关凋亡蛋白对揭示精索静脉曲张引起男性不育的分子机制提供了可能。

经直肠超声在精囊炎病程判定及治疗策略选择中的应用

目的探讨经直肠超声在精囊炎病程判定及治疗策略选择中的应用价值。方法回顾性分析因血精就诊于我院门诊,诊断为精囊炎并接受治疗及随访的患者临床资料,所有患者均行经直肠超声检查,检查由同一医师完成,分析患者的影像学特点并以此作为治疗策略选择的重要依据。结果本组共118例患者,超声表现分为三类:第一类(78例)为双侧精囊均增大,回声普遍减低,精囊内可见扩张管状暗区;第二类(30例)为双侧精囊腺大小正常,回声不均;第三类(10例)为双侧精囊大小正常,内可见钙化斑或射精管管壁钙化。此三类表现分别与急性精囊炎或慢性精囊炎急性发作、慢性精囊炎及病程超过10年的慢性精囊炎患者的经直肠超声表现良好相关,符合率均大于90%。且我们根据超声表现进行治疗策略的选择,若处于急性期则以抗感染保守治疗为主,若发现精囊钙化或结石则以精囊镜检查治疗为主,取得了满意的疗效。结论以精囊炎患者的经直肠超声表现来判定其所处病程并以此选择其治疗策略是可靠、方便及有效的。