Sonic hedgehog信号通路与食管癌放射抗拒的相关性研究

目的:研究Sonic hedgehog(Shh)信号通路在食管癌放射抗拒中的作用及机制。方法:以人食管癌细胞Eca109为亲本株,通过X射线反复照射(累计照射剂量60 Gy)诱导形成放射抗拒细胞株Eca109R。分别采用集落形成实验检测细胞放射敏感性,CCK-8实验检测细胞活力的变化,来证实放射抗拒细胞株Eca109R的放射抗拒性。免疫荧光及Western blot检测Eca109R和亲本细胞Eca109内Gli1蛋白与Shh蛋白的表达。结果:集落形成实验显示2 Gy的X线照射后,Eca109和Eca109R细胞的存活分数(SF_2)分别为0.499±0.042和0.937±0.013;同时,CCK-8实验显示,Eca109R细胞的活力抑制率明显低于Eca109细胞(P<0.05),证实Eca109R细胞有明显的放射抗拒性,诱导形成放射抗拒株成功。免疫荧光结果显示Eca109R细胞中Gli1表达明显高于Eca109细胞(P<0.05)。Western blot实验结果显示Eca109R细胞中的Gli1与Shh蛋白表达明显高于Eca109细胞(P<0.05)。结论:食管癌放射抗拒性的产生可能与Shh信号通路相关蛋白的过表达有关。

上调人食管癌Eca109细胞Shh-Gli1信号通路对放射抗拒性及细胞周期的影响

目的:通过上调Sonic Hedgehog(Shh)信号通路关键因子Gli1,探究Shh信号通路与食管癌细胞放射抗拒性及细胞周期的关系。方法:用过表达Gli1质粒转染人食管癌Eca109细胞,记为Eca109-ox-Gli1组;转染空载质粒为阴性对照组;以不作处理的亲本细胞株为正常对照组。Real-time PCR与Western blot检测转染后细胞内Gli1的表达,集落形成实验检测细胞放射敏感性,流式细胞术检测转染前后细胞周期分布。结果:Real-time PCR与Western blot结果均显示Eca109-ox-Gli1组的Gli1表达显著高于阴性对照组和正常对照组(P<0.05)。集落形成实验显示2 Gy射线照射后,Eca109-ox-Gli1组的存活分数较正常对照组明显升高(P<0.05),转染后细胞对射线敏感性降低,放射抗拒性增加。Eca109-ox-Gli1组中S期细胞分布比例显著高于对照组(P<0.01),再照射6Gy后,3组细胞均出现了G_2/M期阻滞,正常对照组相比于Eca109-ox-Gli1组G_2/M期细胞分布显著增高(P<0.01)。结论 :上调Shh信号通路关键因子Gli1能够增强食管癌细胞的放射抗拒性,这一过程可能是通过调控细胞周期实现的。

HBV临床分离株复制型质粒的构建与鉴定

目的克隆HBV临床分离株全长基因组,构建真核表达复制载体,为研究HBV的耐药机制提供基础。方法从乙型肝炎患者血清中提取HBV DNA,PCR扩增HBV全长基因组,经SapI酶切后,克隆入pHY106载体,测序分析序列,然后用lipofectamine 2000将重组载体转染Huh7细胞,3 d后收集培养上清液,ELISA检测HBsAg、HBeAg水平;Real-time PCR检测细胞培养上清液中HBV含量;Southern印迹检测细胞内HBV复制中间体。结果获得5株HBV临床分离株均为野生型,其中基因B型3株,基因C型2株。成功构建5株HBV临床分离株的复制型质粒,在转染Huh7细胞的上清液中检测到HBsAg、HBeAg及HBV DNA,细胞内检测到HBV复制中间体。结论成功克隆并构建了HBV临床分离株复制型质粒,这种复制型质粒将在HBV临床分离株的耐药机制和药物敏感性等方面研究中发挥重要作用。

肝细胞癌的免疫细胞治疗研究进展

肝细胞癌是全球常见恶性肿瘤之一,在中国尤为高发。目前肝细胞癌的治疗手段主要有手术、放射治疗、局部消融治疗、肝动脉化疗栓塞、分子靶向治疗等。由于肝细胞癌起病隐匿,大多数患者发现时已失去手术时机,治疗效果十分有限,因此探索新的治疗方案具有重要意义。肿瘤免疫细胞疗法是目前最受关注的新兴治疗手段,尤其是基因修饰的T细胞疗法在肝细胞癌的治疗中显示出巨大的潜能。本文将综述免疫细胞治疗在肝细胞癌中的最新研究进展。

脉冲电磁场通过Wntβ-catenin信号通路改善膝骨关节炎大鼠炎症反应的机制

目的:探讨脉冲电磁场通过Wntβ-catenin信号转导机制改善膝骨关节炎大鼠炎症反应的机制。方法:选取90只SD大鼠,均分为正常组、模型组和脉冲电磁场组,除正常组,其余各组均构建膝骨关节炎模型。测定各组大鼠局部皮温、膝关节周径和Lequesne MG评分;采取甲苯胺蓝染色进行Mankin's评分;Western Blot检测软骨细胞凋亡调控蛋白Caspase-3和Caspase-8水平;ELISA法测定滑膜IL-1β、MMP-13、TNF-α表达;并检测Wnt和β-catenin mRNA和蛋白表达差异;检测大鼠线粒体膜电位。结果:与正常组相比,模型组大鼠膝关节局部皮温、膝关节周径、Lequesne MG评分、Mankin's评分、Wntβ-catenin表达以及滑膜IL-1β、MMP-13、TNF-α水平均上调(P<0.05);与模型组比较,脉冲电磁场组膝关节周径、Lequesne MG评分,Mankin's评分、Wntβ-catenin表达以及滑膜IL-1β、MMP-13、TNF-α水平均下调(P<0.05)。相较于正常组,其余2组的关节软骨线粒体膜电位均有所下调。与模型组相比,脉冲电磁场组线粒体膜电位有所上调,脉冲电磁场组优于模型组。结论:脉冲电磁场能抑制膝骨关节炎模型大鼠炎症反应,有效修复软骨损伤,降低炎症因子表达,抑制Wntβ-catenin信号转导。

L-02-hNTCP稳定表达细胞系的建立与鉴定

目的:建立L-02-hNTCP稳定表达细胞系并筛选对HBV感染性颗粒敏感的克隆,为研究HBV入侵细胞的机制及药物筛选提供基础。方法:用Lipofectamine 3000转染hNTCP真核表达质粒至L-02细胞,加入含嘌呤霉素(0.5μg/ml)培养基筛选耐药克隆,进一步用免疫荧光筛选hNTCP高表达克隆,RT-PCR定量hNTCP转录水平;在L-02-hNTCP细胞培养基中加入HBV感染性病毒颗粒,ELISA检测培养上清HBV抗原水平,免疫荧光检测细胞内HBcAg,Real-time PCR检测复制中间体。结果:从92个耐药克隆中筛选获得1株hNTCP高表达克隆,命名为L-02-hNTCP。L-02-hNTCP胞内检测到高水平的hNTCP mRNA,免疫荧光检测到高水平Flag标签表达,且信号主要位于胞膜;经HBV病毒感染性培养基孵育24 h后,免疫荧光在细胞内检测到HBcAg,在培养上清中检测到HBsAg、HBeAg,Real-time PCR检测到细胞内HBV复制中间体(6.57±0.36)×10^(6)拷贝/孔。结论:成功建立稳定高表达hNTCP的L-02-NTCP细胞系,可以被HBV颗粒自然感染,为研究HBV入侵细胞的机制和抗病毒药物筛选提供新的模型。

GPC3与PIVKA-Ⅱ联合诊断提升肝细胞癌诊断准确度

目的:探讨GPC3、PIVKA-Ⅱ、AFU和AFP联合诊断肝细胞癌的效能。方法:从湖北医药学院附属太和医院共收集176例血清标本,其中肝细胞癌患者95例,肝硬化患者49例,健康体检标本32例,采用ELISA法检测GPC3的表达,电化学发光法检测AFP与PIVKA-Ⅱ的表达,全自动生化分析仪检测AFU的表达,采用ROC曲线分析各标志物单独与联合诊断肝细胞癌的敏感度与特异度。结果:AFP、GPC3、PIVKA-Ⅱ和AFU在肝细胞癌患者中的水平均显著高于肝硬化组与健康对照组(P<0.05),ROC曲线下面积分别为0.767、0.817、0.872和0.708,GPC3联合PIVKA-Ⅱ的诊断准确度最高,其敏感度与特异度分别为87.4%、79.0%,四种标志物同时检测可将敏感度提高至95.8%,但特异度降为67.9%。结论:血清GPC3联合PIVKA-Ⅱ检测可以提高肝细胞癌的诊断准确度。

我和外公外婆的“爱恨情仇”

妈妈常说,我们家有三个小孩,个是我,另外两个是外公和外婆。为什么这么说呢?还请听我细细道来……争宠大赛我小时候特别喜欢小动物,尤其是兔子,天天缠着外婆给我买一只,在我不解努力下,外婆终于答应了。

核苷(酸)类药物治疗过程中发生病毒学突破的慢性乙型肝炎患者152例耐药分析

自从1998年拉米夫定(LAM)被用于治疗慢性乙型肝炎(CHB)以来,核苷(酸)类药物(NAs)的抗病毒作用和重要地位逐步得到认可[1].目前我国大陆上市的NAs除LAM外,还有阿德福韦酯(ADV)、替比夫定(LdT)和恩替卡韦(ETV),这些NAs的广泛使用大大促进了CHB的抗病毒治疗,但是随着临床实践的深入,NAs长期使用导致耐药突变株产生的风险也日益突显.目前临床上HBV对NAs的耐药已成为CHB治疗的一大难点,因此,及时监测NAs相关耐药突变的发生,指导临床合理使用NAs十分必要.本研究采用PCR产物直接测序法分析接受NAs治疗过程中出现病毒学突破的CHB患者体内HBV基因型耐药情况.

浅谈日本现代平面设计风格的形成

研究日本现代平面设计风格的主要特点,通过查阅资料、归纳总结、论证分析其设计理念以及探讨风格形成过程中的影响因素。其中社会背景、宗教以及文化对设计风格形成产生重要影响。总结概括日本平面设计在发展过程中的三个阶段,得出科技、经济、人的思想几个方面是促进现代设计发展的重要因素。