126例急性白血病异常免疫表型分析

白血病细胞异常免疫表型是区别于正常造血细胞的重要特征之一,也是流式细胞术检测微小残留病的基础。为了了解急性白血病的异常免疫表型特征,本研究采用四色流式细胞术CD45/SSC双参数散点图设门技术对126例急性白血病患者的异常免疫表型进行分析,并初步探讨其在微小残留病检测中的意义。结果显示:约76%的患者可以检测到明确的异常抗原表达,白血病异常免疫表型可分为以下四类:抗原跨系列表达、跨阶段表达、过度表达及缺失表达,其阳性率分别为39%、46%、21%和29%。约11%的患者仅发生了单一的表型异常,其余患者则可以检测到两类或更多的表型异常。结论:在大多数急性白血病患者中可以检测到明确的白血病异常免疫表型,在此基础上应用多参数流式细胞仪可以有效检测微小残留病变。

多参数流式细胞术检测B细胞非霍奇金淋巴瘤骨髓侵犯

本研究比较多参数流式细胞术(MPFC)与骨髓细胞形态学分析(BMA)检测B细胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)骨髓侵犯的临床价值。采用MPFC与BMA对96例B-NHL患者治疗前的骨髓同时进行检测,并进行二者之间的比较。96份骨髓标本中,BMA检测阳性者12例(12.5%),MPFC检测阳性者38例(39.6%),二者比较差异有显著性(p<0.05),12例BMA检测阳性者MPFC检测均为阳性。MPFC检测阴性的患者与MPFC检测阳性的患者的3年预计总生存率无明显差异,但它们的4年预计总生存率分别为(73.18±6.65)%和(44.13±19.55)%,二者差异显著(p<0.05)。结论:MPFC检测B-NHL骨髓侵犯的敏感性高于骨髓细胞形态学检测,MPFC检测阴性患者的4年平均生存率显著高于MPFC检测阳性患者,MPFC检测淋巴瘤骨髓侵犯可能成为淋巴瘤临床分期和预后判断的有效指标之一。

多参数流式细胞术对急性髓系白血病微小残留病变与疾病复发的监测

本研究探讨微小残留病变(MRD)检测对急性髓系白血病(AML)治疗后疾病复发的预测作用。采用多参数流式细胞术(multiparameter flow cytometry,MPFC)分析AML治疗前白血病相关免疫表型(leukemia associated immunphenotypes,LAIP),检测诱导和巩固治疗后MRD(Post-Ind MRD,Post-Cons MRD)的水平。结果表明:122例初发AML患者中(AML-M3除外),有115例(94.3%)存在明确的LAIP,其中存在单一LAIP类型的患者15例(13.0%),存在2个或2个以上LAIP类型的患者100例(87.0%)。抗原跨系列表达者占40.9%,抗原跨阶段表达者、抗原过度表达者和抗原表达减弱或缺失者分别占20.9%、27.0%和34.8%。对41例诱导化疗后达完全缓解并进行2个疗程以上巩固治疗的AML患者MRD监测显示,Post-Ind MRD+的24例中,巩固治疗后18例复发;Post-Ind MRD-者17例中,巩固治疗后5例复发;Post-Ind MRD-患者和Post-Ind MRD+患者的平均无病生存时间(RFS)分别为43.05±6.25个月和12.48±1.69月(p<0.0001)。Post-Cons MRD+者18例均复发;Post-Cons MRD-者23例中仅5例复发。Post-Cons MRD-患者和Post-Cons MRD+患者的平均RFS分别为39.32±5.44月,9.72±1.51个月(p<0.0001)。结论:Post-Ind MRD水平和Post-Cons MRD水平均与AML患者的RFS密切相关,可作为AML治疗依赖的预后因素。

82例SARS患者T细胞亚群的变化与肺内病变的关系

目的 观察SAR5患者T淋巴细胞亚群绝对数量的变化与肺内病变情况(病变程度及肺内炎症吸收程度)。方法 用流式细胞仪MultiTEST方法对82例发病14d内的SARS患者外周血标本进行T淋巴细胞亚群绝对数量的动态监测,同时动态观察其与肺内病变程度及炎性病变吸收程度的关系,并分析糖皮质激素对T细胞亚群的影响。结果 ①51例病情较轻患者的外周血T细胞亚群在正常范围内或轻度异常,临床上不需要糖皮质激素治疗;②31例病情呈进展状态的患者均伴有CD4^+细胞减少及肺内病变重,需糖皮质激素治疗。82例患者外周血CD4^+细胞绝对数量与病变程度的相关性为r=-0.684,P=0.000;③31例经糖皮质激素治疗的患者CD4^+细胞及CD8^+细胞绝对计数明显少于糖皮质激素治疗前(P=0.000);④CD8^+细胞数量及与肺内病变吸收程度密切相关(r=-0.816;P=0.000)。结论 ①SARS患者肺内病变程度与CD4^+细胞数量呈负相关;②糖皮质激素治疗后SARS患者外周血CD4^+细胞及CD8^+细胞绝对计数减少;③SARS患者肺内病变的吸收程度与CD8^+细胞数量有良好的负相关性。

CD56-多发性骨髓瘤患者临床特征及预后分析

目的探讨CD56-多发性骨髓瘤(MM)患者临床特征及预后。方法回顾性分析48例新发MM患者的临床资料、实验室检查资料及治疗方案,比较CD56-MM患者与CD56+MM患者临床特征及预后。结果 48例MM患者中,CD56-MM患者14例(29%),CD56+MM患者34例(71%)。比较CD56-MM与CD56+MM患者在发病年龄、性别、临床分期方面无明显差异;两组患者均以骨痛、骨质疏松、病理性骨折、贫血、感染为最常见首发症状,CD56+MM患者骨痛的发生率明显高于CD56-MM患者(P<0.05),其他临床表现和起病方式上无明显差异;反映疾病进展程度的指标,如血红蛋白、血小板、血清钙、免疫球蛋白水平、血肌酐水平及24h尿蛋白定量两组比较无明显差异(均P>0.05);反映预后相关因素如骨髓浆细胞数量、β2-微球蛋白、C-反应蛋白、血沉水平两组比较亦无明显差异(均P>0.05);CD56-MM患者多发骨质破坏发生率明显低于CD56+MM患者(64.3%vs 91.2%,P<0.05);对两组患者进行生存期分析,CD56-MM和CD56+MM患者中位生存期分别为14.7个月和15个月,两组比较无统计学差异(P=0.348)。结论 CD56-MM患者骨痛和骨质破坏的发生率明显低于CD56+MM患者,其它临床特征及预后指标与CD56+MM患者比较无明显差异。

SARS患者在疾病早期CD4^+T细胞减少及其临床意义

目的 :观察SARS患者在疾病早期CD4 + 细胞的改变及其在疾病的发展及治疗选择中的临床意义。方法 :流式细胞仪方法对 5 2例发病 10天内确诊为SARS患者的外周血标本进行T细胞亚群的绝对计数检测并动态观察胸部X光病变的变化及疾病转归。结果 :在 5 2例患者中 ,有 34例CD4 + 细胞绝对数在正常范围内的患者 ,病变范围小、病情呈稳定状态 ,病变吸收快 ,不需要肾上腺糖皮质激素治疗 ;另有 18例患者出现CD4 + 细胞的绝对值低于正常 ,其中有 13例患者病情呈进展状态 ,加用肾上腺糖皮质激素治疗 ,有 5例CD4 + 细胞绝对数轻度减低患者 ,病情处于稳定状态 ,未加用肾上腺糖皮质激素治疗。两组CD4 + 细胞数经统计学分析P =0 0 0 0 ;CD4 + 细胞数与肺内病变程度的Pearson相关性检验结果为r =- 0 737;P =0 0 0 0 ;与糖皮质激素应用的Pearson相关性检验结果为r =- 0 5 73;P =0 0 0 0。结论 :①SARS患者发病早期外周血CD4 + 细胞绝对计数与肺内病变的程度呈良好的负相关 ;②CD4 + 细胞绝对数下降明显者需糖皮质激素治疗。

ProCOUNT与单平台ISHAGE方法检测外周血及采集物中CD34^+细胞绝对计数的比较

目的评估ProCOUNT方法和单平台ISHAGE方法检测外周血及其采集物中CD34+细胞绝对计数的优缺点。方法采用流式细胞仪ProCOUNT方法和单平台ISHAGE方法,对23份动员外周血及50份采集物行CD34+细胞绝对计数,并对2种方法所得的结果进行Spearman相关分析和配对t检验。结果Spearman相关分析结果:ProCOUNT方法和单平台ISHAGE方法所得的CD34+细胞绝对数、CD34+细胞百分比高度相关(r均>0.9,P均<0.001)。配对t检验分析结果:ProCOUNT方法和单平台ISHAGE方法检测动员外周血的CD34+细胞绝对数分别为(42.7±7.5)μL-1和(52.1±7.2)μL-1(P<0.01),CD34+细胞百分比分别为(0.26±0.07)%和(0.13±0.05)%(P<0.01);检测采集物中CD34+细胞绝对数分别为(3 515.2±684.7)μL-1和(3 923.8±711.1)μL-1(P<0.01),CD34+细胞百分比分别为(0.79±0.18)%和(0.83±0.17)%(P=0.056)。ProCOUNT方法所得的结果均低于单平台ISHAGE方法所得的结果。结论ProCOUNT方法和单平台ISHAGE方法检测CD34+细胞绝对计数和百分比所得结果具有高度相关性,但前者所得结果要低于后者。

流式细胞术CD34+细胞计数在骨髓增生异常综合征分型诊断中的作用

为探讨流式细胞术(FCM)CD34+细胞计数在骨髓增生异常综合征(MDS)分型诊断中的应用价值。采用多参数FCM设门技术检测MDS患者骨髓CD34+细胞计数,与形态学分型诊断比较。结果显示:对照组和MDS组形态学原始细胞计数分别为0.43±0.64%和2.50±3.68%,FCM CD34+细胞计数分别为0.45±0.24%和1.85±2.60%,MDS组原始细胞计数和CD34+细胞计数均显著高于对照组(P<0.01)。对照组原始细胞计数和CD34+细胞计数无明显差异(P>0.05),MDS组的形态学原始细胞计数明显高于FCM CD34+细胞计数(P<0.05)。88例MDS患者中,71例FCM分型诊断结果与形态学分型诊断结果一致,符合率为80.7%。除13例有粒细胞分化异常或骨髓明显稀释标本外,其细胞形态学和FCM分型的符合率达94.7%。FCM CD34+细胞计数可用于无明显粒系分化异常的MDS分型诊断。

滤泡辅助性T细胞在自身免疫性溶血性贫血发病机制中的作用

目的研究自身免疫性溶血性贫血(autoimmune hemolytic anemia,AIHA)患者外周血滤泡辅助性T细胞(T follicular helper cells,Tfh细胞)数量的变化,探讨Tfh细胞在AIHA发病机制中的作用。方法采用流式细胞术的方法检测分析26例AIHA患者及30例正常人(对照组)外周血B细胞、成熟B细胞及CD4+T细胞比例,Tfh细胞数量。结果 AIHA患者外周血CD19+B细胞百分比为(17.46±16.65)%,高于对照组(9.12±4.60)%(P=0.011);成熟B细胞百分比为(87.33±7.80)%,明显高于对照组(76.52±13.90)%(P=0.001)。AIHA患者CD4+T细胞为(25.47±11.75)%,较正常对照组(34.36±7.21)%明显减低(P=0.001)。AIHA患者Tfh细胞比例为(6.72±5.38)%,明显高于对照组(1.52±1.05)%(P=0.000)。结论 Tfh细胞数量的扩增参与了AIHA病理过程,并在其发病过程中起重要作用。

脑脊液流式细胞术在检测中枢神经系统白血病中的应用

目的：探讨流式细胞术（flow cytometry，FCM）对患者脑脊液（cerebrospinal fluid，CSF）细胞免疫表型的检测，在诊断中枢神经系统白血病（central nervous system leukemia，CNS-L）中的价值。方法采用多色流式细胞术 CD45／SSC双参数散点图设门方法，对195例患者CSF细胞免疫表型进行分析，同时行细胞形态学检测，比较两种方法的差异。结果195例患者中有71例为非霍奇金淋巴瘤（Non-Hodgkin’s lymphoma，NHL）患者，FCM检测有24例发现异常表型细胞，阳性率为33.80％。经形态学分析，15例发现异常细胞，其阳性率为19.72％，差异具有统计学意义（P＝0.022）。58例急性淋巴细胞白血病（acute lymphoma leukemia，ALL）患者，FCM检测有13例发现异常表型细胞，阳性率为22.41％。经形态学分析，12例发现异常细胞，其阳性率为18.97％，差异无统计学意义（P＝1.000）。66例急性非淋巴细胞白血病（acute nonlymphocytic leukemia，ANLL）患者，经 FCM和形态学检测均有4例患者检测出异常细胞，其阳性率均为5.97％，差异无统计学意义（P＝1.000）。结论脑脊液 FCM检测敏感性高，淋巴瘤患者行 FCM分析更有助于中枢神经白血病的诊断，是细胞形态学检测方法的重要补充。

白血病相关免疫表型与难治性急性髓细胞白血病的关系

分析白血病相关免疫表型(LAIP)与难治性急性髓细胞白血病(AML)的关系。回顾性分析45例经两个疗程化疗未缓解的难治性白血病患者在发病时经多色流式细胞术检测的免疫表型结果,分析其抗原跨阶段表达(CD34/CD11b、CD34/CD14、CD34/CD15)和抗原跨系列表达(CD7/CD13、CD19/CD13、CD56/CD13),以54例经两个疗程化疗达到完全缓解(CR)的患者为对照。结果显示,白血病细胞CD34与CD11b共表达在难治组AML表达率为37.8%,而非难治组为13.0%(P=0.004),其它抗原跨阶段表达(CD34/CD14、CD34/CD15)及抗原跨系列表达(CD7/CD13、CD19/CD13、CD56/CD13)在两组病例中无显著差异(P>0.05)。结论:CD34/CD11b共表达与难治性AML相关。对这类患者可加大化疗剂量或考虑骨髓移植,以提高患者的长期生存率。

多色流式细胞术对骨髓增生异常综合征患者外周血免疫表型的分析

目的了解骨髓增生异常综合征(MDS)患者外周血细胞免疫表型特征。方法采用多色流式细胞术CD45/SSC双参数散点图设门方法,对38例MDS组患者及24例Non-MDS组患者外周血原始细胞群、粒细胞群及单核细胞群免疫表型进行分析。结果 MDS组患者外周血原始细胞群、粒细胞群及单核细胞群均存在异常免疫表型。MDS组和Non-MDS组外周血原始细胞群中CD34+细胞聚集的患者为16例和3例,比例分别占42.1%和12.5%,差异有统计学意义(P<0.05)。两组中,外周血原始细胞群表达CD11b+细胞的患者为10例(26.3%)和1例(2.6%)。MDS组高于Non-MDS组,差异有统计学意义(P<0.05)。MDS组粒细胞群中侧向散射光(SSC)的平均荧光强度和CD10的几何平均荧光强度(G-MFI)分别为7.4±2.8,4.0±3.4;Non-MDS组分别为9.5±2.7,8.2±6.6,MDS组均明显低于Non-MDS组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 MDS患者外周血细胞上存在异常的免疫表型,其特点有助于MDS与Non-MDS疾病的鉴别。

细胞涂片间期荧光原位杂交在血液系统疾病中的应用

本研究探讨细胞涂片间期荧光原位杂交(FISH)在血液系统疾病中的临床应用价值。以BCR/ABL双色双融合探针检测Ph染色体为例,同时应用了甲醇/冰醋酸处理的外周血、骨髓细胞涂片法间期FISH与常规细胞悬液滴片法间期FISH,检测20例经证实存在Ph染色体的慢性髓系白血病或急性淋巴细胞白血病患者。结果表明:与常规间期FISH相比,细胞涂片法间期FISH能够获得同样可靠的检测结果。结论:细胞涂片法间期FISH的检测结果可靠,检测周期短,易于进行回顾性研究,值得进一步开展。

校正后的流式细胞术原始细胞计数在骨髓增生异常综合征分型诊断中的应用

目的:探讨校正后的流式细胞术原始细胞计数在骨髓增生异常综合征(MDS)分型诊断中的应用价值。方法:采用流式细胞术多重逻辑设门技术计算73例MDS患者骨髓中CD16dim/-粒细胞和CD34+细胞比例,根据CD16dim/-粒细胞比例对骨髓外周血稀释进行校正,再计算骨髓中校正后的CD34+细胞数;采用校正后的CD34+细胞数进行MDS分型诊断,并与形态学分型诊断进行比较。结果:对照组和MDS组骨髓CD16dim/-粒细胞所占的比例分别为(50.33±17.52)%和(52.35±27.48)%(P>0.05),形态学原始细胞数分别为(0.43±0.64)%和(2.48±3.67)%(P<0.01)。MDS组校正前、后CD34+细胞数分别为(1.86±2.53)%和(3.24±4.02)%(P<0.01),前者明显低于形态学原始细胞数(P<0.05),后者明显高于形态学原始细胞数(P<0.05),但63/73例粒细胞CD16表达水平正常的MDS患者骨髓校正后的CD34+细胞数与形态学原始细胞数并无明显差异,二者用于MDS分型诊断的符合率达96.8%。结论:骨髓中CD16dim/-粒细胞数可用于骨髓外周血稀释的校正;校正后的骨髓CD34+细胞数可用于粒细胞CD16表达正常的MDS患者的分型诊断。

伴骨髓增生异常相关改变的急性髓细胞白血病的免疫表型及临床特征

目的分析伴骨髓增生异常相关改变的急性髓细胞白血病(AML-MRC)的白血病相关免疫表型(LAIP)及临床特征。方法对117例初治AML患者进行重新WHO分型诊断,分析其中37例AML-MRC患者发病时经流式细胞术(FCM)检测的免疫表型结果,以45例非特殊类型AML(AML-NOS)患者为对照组。并对两组患者的发病年龄、骨髓原始细胞比例、WBC、Hb、PLT、染色体核型以及诱导化疗疗效进行比较。结果 AML-MRC组与AML-NOS组比较,其白血病相关免疫表型阳性检出率高。AML-MRC组患者骨髓原始细胞比例(40.6%vs.54.8%,P<0.01)及WBC计数(19.2×109/L vs.49.2×109/L,P<0.01)较AML-NOS组患者低,不良预后核型比例高(28.0%vs.0%,P<0.01),CR率明显减低(22.7%vs.69.7%,P<0.01)。结论 AML-MRC做为WHO新定义的一种类型,具有易于表达白血病相关免疫表型、不良预后核型比例高、常规化疗疗效不佳等特点。

流式-荧光原位杂交技术在骨髓增生异常综合征患者骨髓CD34^+细胞相对端粒长度检测中的应用

本研究旨在初步探讨流式-荧光原位杂交(Flow-FISH)技术在骨髓增生异常综合征(MDS)患者骨髓细胞亚群端粒长度测定中的可行性。7例初治低危MDS患者为实验组,7例年龄、性别匹配的营养性贫血患者为对照组。收集肝素抗凝骨髓,以Molt-4细胞株为内对照细胞,以CD34-Alexa Fluor647标记细胞表面抗原,高温变性DNA后与FITC标记端粒探针进行荧光原位杂交,DNA复染后,采用四色流式细胞术检测骨髓有核细胞和CD34+细胞的相对端粒长度(RTL)。结果显示:实验组和对照组骨髓有核细胞经变性、杂交后,可进行细胞亚群的端粒长度检测。检测结果显示MDS患者骨髓CD34+细胞RTL显著短于骨髓有核细胞(P=0.001);与对照组相比,MDS患者骨髓有核细胞RTL及CD34+细胞RTL均显著缩短(P分别为0.020和0.002)。结论:通过耐热荧光抗体对特定细胞进行标记,Flow-FISH技术可用于细胞亚群RTL检测,值得进一步探索。

人急性淋巴母细胞白血病细胞株Molt-4遗传学特性的研究

本研究探讨人急性淋巴母细胞白血病细胞株Molt-4的遗传学特性,评价其在Flow-FISH方法检测细胞端粒长度中的应用价值。悬浮培养Molt-4细胞并进行规律传代,选取8代不同代数、处于对数生长期的Molt-4细胞进行研究。应用细胞计数法描绘细胞生长曲线并计算细胞倍增时间,流式细胞术检测细胞DNA倍体指数,常规G显带进行染色体核型分析,Southern blot检测细胞端粒长度。结果显示:Molt-4细胞的倍增时间为(1.315±0.062)d、DNA倍体指数为(2.085±0.0093)、端粒长度为(32.05±5.27)kb,不同代数之间无显著性差异(P值分别为0.931、0.888和0.935)。染色体核型分析结果显示,Molt-4细胞染色体数量为91-99条,多数为超四倍体,并且具有稳定的、特征性染色体结构异常。结论:Molt-4细胞具有稳定的遗传特性和较长的端粒长度,可作为Flow-FISH的内对照细胞。

三磷酸腺苷生物荧光法在急性髓系白血病细胞体外药物敏感性检测的初步应用

目的初步探索三磷酸腺苷生物荧光肿瘤体外药敏检测(ATP bioluminescence-tumor chemosensitivity assay,ATP-TCA)技术在急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)中的临床应用价值。方法采集18例初治AML患者的骨髓或外周血,分离单个核细胞,应用ATP-TCA技术,观察体外白血病细胞对化疗药物的敏感性,并分析体外药敏结果、危险度分层及临床疗效三者之间的关系。结果 18例初治AML患者的白血病细胞在体外对8种化疗药物显示出不同的敏感性,有效率最高的是阿柔比星,无效率最高的是吡柔比星。在14例可进行疗效评价的初治AML患者中观察到蒽环类药物体外敏感性与临床疗效之间的完全相符率为78.6%,不同危险度分层患者之间的临床疗效(P=0.012)和生存时间(P=0.018)均有显著差异,高危组患者生存时间最短。结论 AML体外药敏检测结果与临床治疗反应之间具有相关性趋势,ATP-TCA可能是开展AML个体化化疗的一种有效的体外药物筛选方法,尤其是老年AML。

FLT3^-的AML细胞对PKC412体外敏感性的初步研究

目的:探索PKC412(midostaurin,米哚妥林)在FLT3^-AM L患者治疗中的价值。方法:无菌采集21例FLT3^-的初治AML患者骨髓血或外周血肝素抗凝,应用密度梯度离心法分离单个核细胞,采用三磷酸腺苷生物荧光肿瘤体外药敏检测技术(ATP bioluminescence-tumor chemosensitivity assay,ATP-TCA)测定白血病细胞体外对8种浓度PKC412的敏感性,并分析其体外药敏结果、危险度分层及临床疗效三者之间的关系。结果:21例AML患者的白血病细胞在体外对PKC412的反应不相同,体外敏感率为42.9%,体外敏感浓度为1-5μmol/L。PKC412体外药敏结果与患者危险度分层之间无相关性,与临床疗效之间也无相关性。低、中危组患者的存活率著优于高危组患者(P=0.015)。结论:PKC412可能是FLT3^-初治AML的有效治疗手段之一;白血病细胞对PKC412的敏感性有可能成为判断PKC421疗效的独立预测指标。