甲状腺乳头状癌组织中差异表达miRNA及其靶基因的筛选和预测

目的:分析甲状腺乳头状癌组织中差异表达小分子RNA(miRNAs)并预测其靶基因,寻找影响甲状腺乳头状癌(PTC)发生发展及可用于生物标志物的miRNAs。方法:选取经病理证实的甲状腺乳头状癌组织及配对正常组织切除标本,运用高通量基因芯片的方法对差异表达的基因和miRNAs进行筛选,采用KEGG通路分析差异表达基因的功能,通过预测网站对差异表达miRNA进行靶基因预测,并对分析结果进行qRT-PCR验证。结果:与同源正常组织比较,基因芯片检测出PTC组织有248个miRNAs(P<0.01)和3 631个基因差异表达(P<0.05)。hsa-miR-101[靶基因:整合素3(ITGA3)]已验证,癌组织中hsa-miR-101表达(59.8%)低于正常甲状腺组织,ITGA3表达(100%)高于正常甲状腺组织,并且与正常组织比较,59.8%PTC组织hsa-miR-101表达下调,同时ITGA3表达上调。结论:hsa-miR-101的靶基因可能为ITGA3,两者在PTC的发生发展中可能发挥重要作用。

基于微课和翻转课堂结合的教学模式在核医学研究生教学中的应用

目的探究基于微课和翻转课堂结合的教学模式在核医学研究生教学中的应用。方法本次研究的对象为2021年1月—2022年1月参加核医学教育的68名核医学研究生。根据班级划分将所有参与的核医学研究生分为研究组(35名)和对照组(33名),对照组接受传统的核医学教学方式,研究组学生接受微课和翻转课堂结合的教学模式进行核医学学习,所有学生完成核医学教学后,均需要进行临床能力测试(包括理论知识和临床案例分析),通过问卷调查学生接受不同教学模式后对自身的影响以及两组学生对两种教学模式的整体满意度。在研究结束时,采访讲师对微课结合翻转课堂教学模式的看法和评价。结果在临床能力测试中,研究组理论知识、临床案例分析得分,总分均高于传统组,差异有统计学意义(P<0.05)。研究组自主学习能力、团队合作意识、分析解决问题以及案例分析能力得分均高于照组,差异有统计学意义(P<0.05)。研究组对微课结合翻转课堂教学模式的整体满意度高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。教师认为教学模式更有利于学生对理论知识和实际应用技能的掌握,提高其学习兴趣,但更强调学生的自主学习能力及自觉性。结论微课结合翻转课堂教学模式较传统的教学模式更有利于学生对理论知识和实际应用技能的掌握,有利于提高自身的能力。

工作场所极低频电磁辐射对作业人员健康状况影响的调查分析

目的:通过调查工作场所中极低频电磁场的暴露水平,分析工作场所中极低频电磁辐射对职业人群健康状况的影响。方法:使用EFA-300工频电磁场场强测试仪测量某工厂的2个不同车间(对照组与暴露组)的电场强度和磁感应强度,同时使用AWA5610D型积分声级计测量噪声。通过多中心单纯随机抽样的方法对183名对照组和521名暴露组作业人员进行问卷调查,调查2组人员的个人职业信息、家居信息及健康状况,采用SPSS17.0软件对资料进行统计学分析。结果:监测结果显示,暴露组车间电场强度和磁感应强度明显高于对照组(P<0.05);两车间噪声比较差异无统计学意义(P>0.05)。问卷调查结果显示,与对照组比较,暴露组作业人员脱发症状发生率高于对照组(P<0.05);听力减退症状发生率低于对照组(P<0.05),其他指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论:极低频电磁辐射暴露可能会对作业人员神经系统有一定影响。

分割剂量电离辐射对卵巢癌耐药细胞自噬性死亡的影响

目的:研究不同电离辐射方式对卵巢癌耐药细胞株SKVCR自噬性细胞死亡的影响,并探讨其相关机制。方法:实验分为假照组、分割照射组(2Gy·d-1×5)及单次照射组(10Gy·d-1×1)。采用MTT法检测各组细胞对长春新碱(VCR)、依托泊苷(VP-16)及顺铂(DDP)的药物敏感性,MDC染色及流式细胞术检测自噬发生率的变化,实时荧光定量PCR方法检测自噬特异基因MAPLC3B和Akt1mRNA水平,Western blotting法检测自噬相关蛋白MAPLC3B表达和蛋白激酶B(PKB,Akt1)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)及其下游基因P70S6K、磷酸化AKT1/mTOR/P70S6K表达的变化。结果:与假照组比较,电离辐射使SKVCR细胞对VCR、VP-16的药物敏感性提高,分割照射组更明显(P<0.05)。与假照组比较,电离辐射使细胞自噬发生率升高,尤其以分割照射组升高更明显(P<0.05);与假照组比较,照射后MAPLC3B mRNA升高、Akt1mRNA下降(P<0.05);照射后MAPLC3B蛋白表达升高,Akt1、mTOR、p-mTOR、P70S6K、p-P70S6K蛋白表达均不同程度下降,分割照射组较单次照射组下降更明显(P<0.05)。结论:不同的电离辐射作用方式可以引起卵巢癌细胞发生自噬性死亡,其机制主要涉及Akt1/mTOR/S6K通路。

脱氧胞苷激酶对HeLa细胞放化疗敏感性的影响

目的:研究脱氧胞苷激酶(DCK)对人宫颈癌细胞HeLa药物敏感性与辐射敏感性的影响,为宫颈癌的基因治疗提供理论依据。方法:采用FuGENE 6转染HeLa细胞构建细胞模型,实验分为空白对照组、空载体阴性对照组及DCK基因沉默(siRNA)组,实时荧光定量PCR及Western blotting检测转染前后DCK mRNA及蛋白的表达变化,细胞计数法检测细胞的增殖情况,MTT法检测细胞对阿糖胞苷(AraC)的药物敏感性,克隆形成实验检测细胞的辐射敏感性。结果:与空白对照组及阴性对照组比较,siRNA转染HeLa细胞后DCK mRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.05);3组细胞生长曲线无明显差异;siRNA组HeLa细胞对AraC药物的敏感性降低,辐射敏感性增高(P<0.05)。结论:抑制DCK基因表达可以降低宫颈癌细胞对药物的敏感性,增强辐射敏感性。

miR-18a对结直肠癌SW116细胞辐射敏感性的影响

目的:探讨miR-18a与结直肠癌SW116细胞辐射敏感性之间的关系,阐明miR-18a影响细胞凋亡和自噬的可能机制。方法:人结直肠癌SW116细胞分为miR-18aNC组、miR-18amimic组、miR-18aNC+4Gy组和miR-18amimic+4Gy组。qRT-PCR法检测照射前后SW116细胞中miR-18a的表达;集落形成实验观察miR-18a对SW116细胞辐射敏感性的影响;GFPLC3形态学方法检测SW116细胞自噬率;流式细胞术检测SW116细胞凋亡率;采用生物信息学方法预测miR-18a的靶基因,以荧光素酶报告基因验证miR-18a与靶基因3′UTR结合;Western blotting法检测SW116细胞中共济失调-毛细血管扩张突变基因(ATM)蛋白表达。结果:与照射前比较,照射后SW116细胞中miR-18a表达水平明显降低(P<0.05)。集落形成实验,与miR-18aNC组比较,miR-18amimic组SW116细胞辐射敏感性增强(P<0.05),细胞凋亡率和自噬率明显增加(P<0.05)。与miR-18aNC+4Gy组比较,miR-18amimic+4Gy组SW116细胞中ATM蛋白表达减少。结论:miR-18a的靶基因为ATM;miR-18amimic可促进辐射诱导的细胞凋亡和自噬,且能增加结直肠癌SW116细胞辐射敏感性。

自噬在不同分割方案放疗联合化疗中对肺癌细胞的杀伤作用及其机制

目的:通过离体实验、在体实验观察不同放疗方案以及顺铂增敏放疗对肺癌细胞的杀伤效应,探讨自噬在这一过程中发挥的作用及其机制。方法:采用人肺癌细胞A549,以不同浓度(0、1.0、2.5、5.0、10.0、20.0和40.0μmol·L-1)顺铂进行处理;40只C57BL/6小鼠随机分为对照组(n=10)、常规分割照射组(n=10)、超分割照射组(n=10)和联合组(n=10),建立C57BL/6小鼠肺癌异位移植模型。MTT法检测A549细胞存活率,Western blotting法检测各组小鼠自噬相关基因MAPLC3和Beclin1蛋白的表达。采用游标卡尺测量各组小鼠肿瘤体积;免疫组织化学法检测肿瘤组织中自噬相关基因MAPLC3Ⅱ、PI3KⅢ和Beclin1的表达水平。结果:顺铂药物浓度>5.0μmol·L-1时A549细胞的存活率呈剂量依赖性下降;与对照组(0μmol·L-1顺铂)比较,10.0、20.0和40.0μmol·L-1顺铂组细胞存活率降低(P<0.05)。与对照组比较,其他各组小鼠自噬相关基因MAPLC3Ⅱ和Beclin1蛋白表达水平明显升高;超分割照射组小鼠肿瘤体积<联合组<常规分割照射组<对照组;与对照组比较,其他各组肿瘤体积均减小(P<0.05)。肿瘤组织切片染色,与对照组比较,其他各组自噬相关基因MAPLC3Ⅱ、PI3K-Ⅲ和Beclin1表达水平均明显升高(P<0.05),且在联合组达到最高值。结论:顺铂协同增敏放疗对肺癌细胞的杀伤作用,自噬可能参与其调控。

电离辐射诱导乳腺癌细胞自噬相关基因DRAM表达的研究

目的研究电离辐射对乳腺癌细胞株MCF-7自噬相关基因DRAM表达变化的影响。方法采用GFP—LC3转染法检测自噬泡，实时荧光定量PCR方法检测DRAM基因表达，Westernblot方法检测LC3和DRAM蛋白的表达，采用磷酸钙共转染法构建DRAM沉默细胞模型。结果与假照组相比，8GyX射线照射后细胞中GFP—LC3表达升高；时间-效应关系表明，在8Gy照射后，自噬溶酶体蛋白LC3表达在2、4、8、16、24和32hi-升变化显著，各组均高于假照组（F=5．38、8．72、10．63、15．23、20．78和55．23，P〈0．05）；DRAM蛋白表达在8Gy照射后以时间依赖性增加，从2h开始上升，32h达至最高值（F=116．34，P〈0．05）。DRAM沉默细胞模型组中LC3和DRAM蛋白的表达明显低于假照组（F=20．36和40．35，P〈0．05）；对DRAM沉默细胞模型组进行8Gy照射后，DRAM蛋白表达与假照组相比虽有所增加，但仍低于8Gy照射组；DRAM沉默细胞模型组LC3蛋白的表达也低于照射组，沉默前后差异均有统计学意义（F=50．34，P〈0．05）。结论x射线可能通过激活DRAM基因来促进乳腺癌细胞株MCF-7发生自噬。