深切缅怀李厚达教授

2022年12月30日,敬爱的长者、慈爱的老师、杰出的实验动物科学家及教育家李厚达教授永远离开了我们。2023年12月16日,在先生仙逝一周年之际,扬州大学兽医学院举办了实验动物学专业人才发展暨科技创新论坛,并隆重开展了“致敬李厚达教授”的追思活动。来自全国各地的200余名知名学者、扬州大学实验动物专业的毕业生及李厚达教授的挚友齐聚扬州,深切缅怀李厚达教授积极进取、艰苦创业、成果卓著的精彩人生。

基于科研范式变革的实验动物资源创新发展

实验动物是支撑生命科学和生物医药等领域科技创新的重要基础科研条件之一。随着科研范式的变革,准确把握科学前沿和国家重大需求,进一步凝练实验动物资源创制与发展中的难点和疑点,对加快推动实验动物新品种/新品系开发和动物模型创制与发展具有重要意义。本文梳理了我国实验动物资源建设和应用情况,就应对新形势下的科研范式变革中存在的主要问题进行了深入探讨,展望了我国实验动物资源发展新动向,以期为实验动物新资源研究开发提供新视角。

小肠结肠炎耶尔森氏菌、假结核耶尔森氏菌、志贺氏菌和空肠弯曲菌多重PCR方法的建立

目的为实验动物微生物检测提供一种简便、灵敏、快速,并且特异性强的小肠结肠炎耶尔森氏菌、假结核耶尔森氏菌、志贺氏菌和空肠弯曲菌多重PCR检测方法。方法根据小肠结肠炎耶尔森氏菌fox基因、假结核耶尔森氏菌inv基因、志贺氏菌ipa H基因及空肠弯曲菌gyr A基因设计并筛选出特异性引物;优化退火温度等条件,分析多重PCR的特异性、敏感性,使用该多重PCR方法检测小鼠和豚鼠样品。结果多重PCR扩增出了预计的PCR产物,即小肠结肠炎耶尔森氏菌(511 bp)、假结核耶尔森氏菌(779 bp)、志贺氏菌(290 bp)和空肠弯曲菌(156 bp)。该方法的灵敏度为1×10-3ng/μL(小肠结肠炎耶尔森氏菌、假结核耶尔森氏菌、志贺氏菌)和1×10-2ng/μL(空肠弯曲菌)。特异性检测未从其他菌中检测出阳性条带。使用该方法从样品中检测出不等的阳性样品数。结论该多重PCR方法对实验动物微生物检测具有很好的应用和开发前景。

英国动物试验年度统计报告的分析与启示

实验动物资源调查是一项系统性和公益性的科技基础性工作,对于推动科技进步、促进基础学科发展、支撑经济社会发展和保障国家安全具有重要战略意义和不可替代的作用。研究分析比较英国动物试验年度统计报告的框架结构和统计指标,为我国实验动物资源调查提供参考。

TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR快速检测布鲁氏菌

目的利用新一代TaqMan MGB探针技术,建立特异敏感的实时荧光定量PCR方法,用于布鲁氏菌的快速检测。方法针对布鲁氏菌基因组中16SrRNA序列设计特异性引物和探针,建立一套基于TaqMan MGB探针技术的实时荧光定量PCR方法,验证方法的特异性、敏感性和稳定性,对2008-2010年期间采集的773份动物样本中的布鲁氏菌进行检测,并与普通PCR方法进行比较分析。结果建立的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法对布鲁氏菌的检测具有高度的特异性,对小肠结肠耶尔森菌、假结核耶尔森菌、肠炎沙门氏菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、空肠弯曲菌、泰泽氏菌均无交叉反应。生成的标准曲线的相关系数为0.999,斜率为-3.301,TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR效率为100.872%。TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR能够准确地从布鲁氏菌阳性样本中检测到布鲁氏菌DNA,最低能够检测到的布鲁氏菌数量为9.3拷贝,比常规PCR方法的灵敏度高100倍。对773份动物样本进行检测,结果TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR能检出53份布鲁氏菌阳性样本,而常规PCR只检出37份阳性。结果显示,TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法比常规PCR方法更敏感,能够直接从动物样本中检出布鲁氏菌DNA,检测时间仅为2h。结论本研究首次建立了直接用于检测动物样本中布鲁氏菌的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法,该技术适用于传染性病原体的快速检测与鉴定。

动物源性生物制品病毒灭活/去除工艺的验证

目的对动物源性生物制品病毒灭活/去除工艺进行验证。方法针对不同动物源性制品,选择相关的指示病毒,对4个厂家不同的病毒灭活/去除工艺进行效果验证。结果各工艺均可灭活/去除指示病毒4Logs以上,均为有效的灭活/去除病毒工艺。结论4个厂家的灭活/去除病毒工艺均可保证制品的安全性。

中国小型猪细菌分离鉴定及药敏试验

目的对小型猪携带的细菌种群分布情况及耐药性进行调查分析。方法对小型猪采样进行细菌分离培养、生化鉴定和细菌16SrRNA基因PCR扩增、测序分析,并进行药敏试验。结果从25只小型猪中共分离到45株细菌。结果显示,小型猪携带的细菌种群主要有弯曲菌属(空肠弯曲菌)、螺杆菌属(幽门螺杆菌)、克雷伯菌属(肺炎克雷伯氏菌);肠杆菌属(阴沟肠杆菌);埃希菌属(大肠埃希菌、弗格森埃希菌);假单胞菌属(铜绿假单胞菌);窄食单胞菌属(嗜麦芽窄食单胞菌);葡萄球菌属(金黄色葡萄球菌、溶血葡萄球菌、模仿葡萄球菌);链球菌属(肺炎链球菌、猪链球菌、前庭链球菌、缓症链球菌、麻疹孪生球菌、绿色气球菌);肠球菌属(粪肠球菌);芽孢杆菌属(枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、蜂房芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌)。这些菌株对氨曲南、头孢噻吩等药物敏感,而对痢特灵等药物不敏感。结论小型猪携带的细菌种群具有多样性,研究结果为我国小型猪细菌学检测以及质量标准的制定提供了科学依据。

应用RAPD方法对近交系小鼠进行遗传检测的研究

目的 为实验室日常检测近交系小鼠的遗传背景提供一种分子生物学方法。方法 用 6条随机引物对 6个品系近交系小鼠基因组DNA进行PCR扩增。结果 6条随机引物中p2、p3、p5和p6四引物扩增的条带差异较为明显。

肝螺杆菌多重PCR检测方法的建立及应用

目的建立肝螺杆菌的多重PCR检测方法,对中国动物肝螺杆菌进行检测。方法以毒力基因flaB基因、ureA基因和cdtB基因和cdtC基因作为靶基因,建立检测肝螺杆菌的多重PCR方法。对肝螺杆菌、空肠弯曲菌、幽门螺杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌、小肠结肠炎耶尔森菌、大肠埃希氏菌和铜绿假单胞杆菌抽提的DNA进行多重PCR扩增。应用本研究建立的多重PCR检测方法对482只动物(其中:海南30只猴、江苏34只小鼠和北京32只猴、30头猪、66只犬、13只兔、29只豚鼠、69只大鼠、213只小鼠)进行检测,对扩增出的阳性结果进行测序。同时,对所有样本采用选择性培养基进行肝螺杆菌培养以作对照。结果肝螺杆菌能扩增出各自的特异性条带,而其他参考菌株均未扩增出条带,这表明该方法具有较强的特异性。482份样本中检出43份肝螺杆菌阳性样本,阳性率8.92%(43/482),其中:2只犬(3.03%,2/66)、1只兔(7.69%,1/13)、5只大鼠(7.25%,5/69)和35只小鼠(16.43%,35/247)均扩增出肝螺杆菌毒力基因片段。结果显示,肝螺杆菌flaB基因、ureA基因和cdtB基因和cdtC基因序列与GenBank中的肝螺杆菌ATCC51449的相应基因序列核苷酸同源性高达99%。用选择性培养基能培养出肝螺杆菌。结论中国动物中的犬、兔、大鼠和小鼠均能检出肝螺杆菌flaB基因、ureA基因、cdtB基因和cdtC基因。建立的多重PCR检测方法可作为肝螺杆菌大规模检测的新技术,这为在中国开展肝螺杆菌流行病学调查提供了有效科学工具。

3R理论的形成、发展及在生命科学研究中的应用

一、3R理论的形成及发展 3R是Reduction(减少)、Replacement(替代)和Refinement(优化)的简称. Reduction是指在科学研究中,使用较少量的动物获取同样多的试验数据或使用一定数量的动物能获得更多试验数据的方法. Relacement是指使用其他方法而不用动物所进行的试验或其他研究课题,达到某一试验目的.或者说是使用没有知觉的试验材料代替以往使用神志清醒的活的脊椎动物进行试验的一种科学方法.

10种常见SPF级实验大、小鼠血液学及生化指标正常参考值的探讨

目的建立10种常见SPF级实验大、小鼠血液及生化正常参考值。方法采用半自动生化测定仪及血球计数仪对不同周龄、不同性别的常见10种SPF大鼠的血液学指标及生化指标值进行测定。结果取得4周龄和8周龄不同周龄、不同性别大、小鼠血液学及生化值平均值及正常参考范围;多数生化指标受年龄及性别的影响,除了不同品系、年龄和性别的大、小鼠ALP呈现规律性变化,其他指标也与相关报道有差异。结论在基础生物学研究中,要充分考虑到性别和年龄对实验动物血液学及血清生化指标的影响。

乙脑病毒嵌套式RT-PCR检测方法的建立及初步应用

目的 建立适用于检测人用猪源性生物制品中外源性乙脑病毒(JEV)的嵌套式RT- PCR方法。方法 根据已公布的JEV序列(GenBank登录号为M5 5 5 0 6 ) ,设计合成两对引物,对JEV感染的乳鼠脑组织和培养JEV的BHK 2 1细胞抽提RNA进行RT PCR和RT nestedPCR ,将PCR产物进行了克隆测序;同时对猪细小病毒(PPV)、猴空泡病毒4 0 (SV4 0 )及正常乳鼠脑组织、正常BHK 2 1细胞、PK15细胞、BSC 1细胞提取核酸进行PCR ,并对2 10份临床样品进行了检测。结果 PCR产物经琼脂糖凝胶电泳检测,JEV感染的乳鼠脑组织和培养JEV的BHK 2 1细胞均扩增出10 15bp和6 2 2bp目的基因片段,而PPV、SV4 0及未感染JEV的乳鼠脑组织、正常BHK 2 1细胞、PK15细胞、BSC 1细胞均未见特异性扩增条带,2 10份猪组织样品中未检出阳性样品。RT nestedPCR检测的最低限度为10PFU病毒。从样品核酸的提取到PCR扩增及检测结果的报告可在8小时内完成。结论 本研究建立的RT NestedPCR方法具有快速、特异、敏感、可靠的特点,可用于人用猪源性生物制品中外源性JEV的污染检测。

多价鼠肝炎病毒抗体ELISA试剂盒的研制及应用

从6株鼠肝炎(MHV)病毒中筛选出A_(59),MHV_1及沪-79(Sh-79)3个毒株制成多价抗原的ELISA试剂盒。检测SPF和清洁级小鼠血清104份,又为0.037,SD为0.024,阳性临界值为0.207。经电镜检查,阻断抑制试验和IFA验证,证明本试剂盒特异性好。应用本试剂盒检测实验鼠群MHV抗体的敏感性单价抗原强。开放鼠MHV抗体阳性率为72％(161/223),Ⅱ级和Ⅲ级鼠为1.7％(2/117)。

猴B病毒抗体ELISA检测方法的建立和应用研究

目的 建立猴B病毒抗体ELISA检测方法。方法 采用方阵滴定法 ,比较不同血清稀释度、3种酶结合物、2种抗原对检测结果的影响 ,与国外同类参比实验室进行检测结果的比较 ,确定ELISA法的最佳实验条件。结果 HSV抗原包被浓度 10 μg ml,抗人IgG HRP为 1∶2 0 0 0时 ;或B病毒抗原包被浓度 10 μg ml,抗人IgG HRP为1∶4 0 0 0时 ,阴性血清和阳性血清的A值差距最大。与国外B病毒检测专业实验室的检测结果符合率分别为98 0 2 %和 97 5 2 %。结论 建立了猴B病毒抗体的ELISA检测方法 ,提高了检测方法的准确性。

实验动物中沙门菌的实验室检测能力验证的结果与分析

目的通过实验动物中沙门菌检测能力验证计划,了解实验动物检测机构对沙门菌的检验能力,提高实验动物质量检测水平。方法按照CNAS批准的能力验证方案,通过冷冻干燥法制备含有沙门菌及干扰菌的实验动物粪便样品,经过稳定性和均匀性检验合格,作为能力验证样品。采用随机编号,经冷链运输发放给参加单位,并附作业指导书。在规定时限提交检验报告和原始记录复印件,其结果与样品预检结果一致的判为满意结果,不一致或未能提交结果的判为不满意结果。结果全国共有20个省市的30个实验室参加沙门菌能力验证项目,其中28个实验室获满意结果,占总参加机构的93.3%,不满意的2个实验室,占6.7%。采用分离培养方法的有29个实验室,采用PCR方法的有2个实验室。结论实验动物质量检测机构沙门菌检测能力较高,实施能力验证计划能够反映实验室的检测水平。

肾内科住院患者抗菌药物应用特点的单中心分析

目的:了解肾内科住院患者抗菌药物的临床应用特点,为临床合理使用抗菌药物提供借鉴。方法:回顾性分析本院肾内科1000份出院病历,统计各种抗菌药物的使用情况。结果:1000份病历中,使用抗菌药物的有876份(87.6%),其中,使用一种抗生素者639例(72.9%),两种抗生素联合使用者237例(27.1%)。在使用抗生素的全部病例中,治疗性使用抗菌药物者606份(69.2%),预防性使用抗菌药物者270份(30.8%)。预防性使用抗生素时间≤3d者占89.3%,>3d者占10.7%。在手术前0.5～1h便开始接受预防性使用抗生素的比率较低。预防性抗生素的使用途径100%为经静脉途径。结论:本组患者抗生素的使用基本合理。肾内科住院患者预防性使用抗生素的比率较高,但预防性使用抗生素的时机、肾内科常见有创操作术后是否可以予口服抗生素代替静脉使用抗生素以预防术后感染等问题均有待临床进一步对照研究,以便为临床更合理地使用抗菌药物提供有益的借鉴。

10种雌性大鼠的中医体质学初步研究

目的 :探讨常用实验动物的中医体质学的差别 ,为中医动物实验的动物选择和实验动物饲育管理提供依据。方法 :对 1 0种北京市常用的雌性实验大鼠进行外观、大便、舌象观察 ,并测定动物的体温以及肾上腺、胸腺、脾脏重量和与中医体质学有关的生物化学指标。结果 :不同品系、同品系不同微生物等级的实验大鼠间在某些指标上有一定的差异。结论 :不同品系。

首次从中国小鼠中分离到肝螺杆菌及其鉴定

目的对中国小鼠肝螺杆菌进行分离鉴定。方法采集中国某实验动物中心发病小鼠标本,采用细菌学分离培养、血清学试验、多重PCR检测、病理组织学检查等方法进行鉴定,并对细菌的分子生物学特征进行分析。结果分离到一株能产生多种毒素的细菌,经鉴定为肝螺杆菌(HHm0801)。用螺杆菌属16SrRNA基因特异引物和肝螺杆菌16SrRNA基因、flaA基因、flaB基因、ureA基因、cdtB基因、cdtC基因特异引物对HHm0801细菌的PCR扩增为阳性,经核苷酸序列测定分析证实上述序列与肝螺杆菌ATCC51449基因序列(GenBank登录号:NC004917)同源性高达99%。肝螺杆菌感染小鼠肝脏的肝细胞肿大,出现大小不等的空泡,部分胞核深染,局部坏死,肝小叶脂肪变性;直肠部分绒毛脱落,有少量炎性细胞,局部充血。脾脏淋巴细胞散在分布,小叶间隔不清晰,脾巨噬细胞增多。眼睛巩膜增厚,晶状体部可见深色物质沉着。结论首次从中国小鼠中分离到了肝螺杆菌,为进一步研究该菌及开展流行病学调查提供了科学依据。

实验动物金黄色葡萄球菌的实验室检测能力验证结果评价

目的通过实施实验动物金黄色葡萄球菌检出能力验证计划,了解实验动物检测机构检验能力,提高实验动物质量检测水平。方法按照CNAS批准的能力验证方案,通过低温冻干制备样品,经过稳定性和均匀性检验合格,作为能力验证样品。采用随机编号,发样给参加单位,并附作业指导书。在规定时限提交检验报告和原始记录复印件,其结果与样品预检结果一致的判为满意结果,不一致或未能提交结果的判为不满意结果。结果共有28个实验室参加本次能力验证项目,其中获得满意验证结果的实验室为22个,占总参加机构的78.57%;未得到满意验证结果的实验室为6个,占21.43%。采用国标检测方法的有27个,采用PCR检测方法的有1个。结论实验动物质量检测机构对金黄色葡萄球菌的检测能力较高,实施能力验证计划能够反映实验室的检测水平。