人前列腺特异性抗原mRNA实时荧光PCR定量标准品的构建

目的构建实时荧光定量PCR(FQPCR)的标准品以定量检测人前列腺特异性抗原(PSA)mRNA的表达。方法以Trizol裂解抽提法提取LNCaP细胞的总RNA。以RTPCR法制备PSAcDNA目的片段并进行扩增;以AT载体克隆法制备重组质粒,并转化E.coliDH5α菌提取重组质粒,联合用氨苄青霉素筛选法和α筛选法、EcoRⅠ限制性酶切和序列分析法鉴定特异性重组质粒。用聚乙二醇沉淀法提纯质粒并检测λ260nm吸光度,确定原液的重组质粒的拷贝浓度并以此制备FQPCR梯度标准品。结果PSAcDNA目的片段成功制备并获得稳定的重组质粒,保持了目的片段的特异性和序列的完整性。结论成功构建了实时荧光定量PCR标准品。

eotaxin-3基因多态性与变应性哮喘的相关性

目的研究eotaxin-3基因多态性与变应性哮喘的相关性。方法用聚合酶链反应-单链构象多态性-四引物聚合酶链反应-限制性酶切的方法对湖北地区汉族成人eotaxin-3+77C/T和+2497T/G单核苷酸多态性与哮喘易感性、嗜酸性粒细胞(eosinophil,EOS)计数以及血浆总IgE水平的相关性进行了分析。结果eotaxin-3+2497位哮喘组与对照组G等位基因的频率,哮喘组IgE浓度及EOS数量差异有统计学意义,P值分别为0.011、0.021和0.029;+77位哮喘组与对照组T等位基因的频率,哮喘组IgE浓度差异无统计学意义,P值分别为0.824和0.473;+77位哮喘组EOS数量差异有统计学意义,P值为0.044。结论eotaxin-3+2497T/G多态性与哮喘易感性、EOS数量及IgE水平相关,+77位C/T基因多态性与哮喘EOS数量相关。