乙醇脱氢酶(ADH)产酶菌株的选育

从食醋生产企业的醋醅中采集样品,以乙醇为唯一碳源,用碳酸钙透明圈平板法分离出185株菌株,然后以产酸量和耐乙醇能力为标准,瓶发酵选育出20株ADH产酶菌株；A5-2产酸量为49.85 g/L,耐乙醇能力强,A5-2的菌种形态学和16S rDNA序列分析初步鉴定为巴斯德醋酸杆菌（ Acetobacter pasteurianus）；A5-2乙醇脱氢酶酶学性质研究表明：最适作用温度和pH分别为45℃和pH 4.0,具有一定的耐热性和良好的耐酸碱性；A5-2乙醇脱氢酶粗酶制备条件为硫酸铵饱和度70%~80%,回收率84%。

双孢蘑菇和姬松茸灭活原生质体融合育种研究

以双孢蘑菇和姬松茸为亲本菌株，通过灭活原生质体融合，经过初筛和复筛，1株新的稳定的双孢蘑菇和姬松茸杂交高产菌株被选育出来。双孢蘑菇原生质体被热灭活（65％，30rain），姬松茸原生质体被紫外线灭活（30w，30cm，10min），双亲存活率为3．1×10^-7～3．3×10^-8。在聚乙二醇诱导下融合继续生存，亲本原生质体融合被实现，重组频率为4．8×10^-5。

紫外诱变选育高产碱性木聚糖酶优良短小芽胞杆菌

以短小芽胞杆菌M-11为研究对象,选育碱性木聚糖酶高产优良短小芽胞杆菌,并对其发酵条件进行研究.对短小芽胞杆菌M-11用紫外线（UV）诱变,用刚果红平板染色法初筛、摇瓶发酵复筛及稳定性筛选,选育出高产碱性木聚糖酶突变菌株M-11-2,研究发酵条件.结果表明：突变菌株M-11-2基础产酶活力500～600 IU·mL-,是M-11酶活314.93 IU·mL-1的1.5倍;摇瓶发酵产酶活力811.28 IU·mL-1,是原始菌株M-11（613 IU·mL-1）1.3倍;发酵罐发酵产酶活力2 703.68 IU·mL-,发酵液产酶能力1600000IU·L-1（以成品酶活计）,发酵条件：发酵周期24h,温度37℃,培养基：麸皮7.0％、氯化钠7.0 mmol· L-1、硫酸锌5.0mmol·L-1、硫酸镁0.02％、酵母膏1.0％、氯化铵1.0％、磷酸氢二钾0.4％,pH调节至8.0.因此,采用紫外线诱变方法,成功选育出高产碱性木聚糖酶的短小芽胞杆菌菌株,稳定性良好,适宜发酵工程应用的优良菌株.

碱性木聚糖酶在麦草浆漂白中的应用研究

将碱性木聚糖酶应用于造纸工艺中,使传统的化学漂白向着生物漂白改进,以减少废水中含氯有毒物的排放,有利于环境保护。用麦草浆作为研究对象,进行碱性木聚糖酶预处理麦草浆的条件研究(浆浓、时间、pH、温度及酶用量)和生物漂白工艺条件研究。碱性木聚糖酶用于纸浆生物漂白的工艺条件:5%浆浓,1h,pH9.6,50℃,20IU/g绝干浆,5.5%有效氯用量。

麦芽根发酵生产碱性木聚糖酶

目的:Bacillus pumilus M-26以麦芽根为碳源发酵生产碱性木聚糖酶。方法:以单一麦芽根和复合麦芽根分别为碳源,首先确定碳源组成及浓度、氮源组成及浓度、无机盐种类及浓度,然后通过正交试验得出摇瓶发酵的培养基配方,最后进行20L发酵罐发酵生产碱性木聚糖酶工艺条件研究。结果:碳源:麦芽根,麦芽根:麸皮=7∶3,5%和8%,氮源:牛肉膏和氯化铵;无机盐:氯化钠、氯化钙及硫酸镁。摇瓶发酵条件,37℃,220 r·h-1,48 h,发酵罐发酵条件,37℃,24 h。单一碳源发酵培养基,麦芽根5%,Mg SO40.01%,氯化钠5 mmol·L-1,氯化钙1 mmol·L-1,氯化铵1.2%,牛肉膏1.2%,K2HPO40.4%,p H8.0;复合碳源发酵培养基,麦芽根麸皮7%,Mg SO40.03%,氯化钠1 mmol·L-1,氯化钙5 mmol·L-1,氯化铵1.0%,牛肉膏1.2%,K2HPO40.4%,p H8.0。摇瓶发酵最高产酶活力分别为268.38 IU·m L-1和363.13 IU·m L-1,发酵罐发酵最高产酶活力分别为748.58 IU·m L-1和1 348.99 IU·m L-1。结论:麦芽根与麸皮组成复合碳源经Bacillus pumilus M-26发酵生产碱性木聚糖酶,摇瓶产酶活力363.13 IU·m L-1,发酵罐产酶活力1 348.99 IU·m L-1。

碱性木聚糖酶热稳定性及半衰期研究

目的：通过碱性木聚糖酶热稳定性的研究探究其半衰期和保质期。方法：首先对碱性木聚糖酶溶液的热稳定性进行研究,然后再进行碱性木聚糖没固体制剂的热稳定性研究,最后应用一级动力学模型得出各自的半衰期和保质期。结果：碱性木聚糖酶溶液的温度范围60~70℃,热处理时间1~6 min,6 min后残留酶活最高为35.87%~0,25℃的半衰期和保质期分别为13.73 d和2.08 d;碱性木聚糖酶固体制剂的温度范围100~120℃,热处理时间1~6 h,6 h后残留酶活为81.96%~25.99%,25℃的半衰期和保质期分别为4 920.37 d和748.25 d10结论：碱性木聚糖酶固体制剂具有良好的热稳定性,保质期优于酶制剂国家标准。

中国药典2015年版抑菌效力检查法解读

目的:解读中国药典2015年版抑菌效力检查法的主要增修订情况。方法:对比中国药典2015年版和2010年版抑菌效力检查法的主要差异。结果:中国药典2015年版抑菌效力检查法在抑菌效力检查的定位、产品分类、判定标准等方面都做了较大修订。结论:中国药典2015年版将抑菌效力检查法完善成为更加科学与国际接轨的检查方法。

软膏剂水分活度分布规律及在制药行业的应用指导

目的调查目前市面上软膏剂的水分活度(aw)分布状况,为“水分活度测定在非无菌制剂中的应用指导原则”提供数据支撑。方法2019年8月在西安市各大药店采集43家生产企业34个品种共102批次软膏剂,并在25℃下对其aw进行检测。结果软膏剂的平均aw分布在0.0326~0.9804。去除离群值后,软膏剂平均aw的95%置信区间为0.7013~0.7661。结论对高aw软膏剂研发提出优化处方原则,提高自我防腐能力;对低aw软膏剂提出减少释放检验频次原则,合理微生物控制策略;软膏剂aw分布规律为《中国药典》“水分活度测定在非无菌制剂中的应用指导原则”提供坚实的数据支撑。

利用猕猴桃枝条和油桃枝条木屑栽培平菇试验初报

利用猕猴桃和油桃枝条木屑,添加麸皮、白糖、石膏粉和石灰粉等栽培平菇,生物效率可达到67%~69%,棉籽壳对照,生物效率可达到135%~137%。此项培养方法在平菇生产中取得了满意的效果。

丙泊酚乳状注射液抑菌效力评价及抑菌效力检查法解析

目的评价添加低浓度乙二胺四乙酸(EDTA,0.005%)的丙泊酚乳状注射液的抑菌效力,并比较低硼硅和中硼硅玻璃安瓿包装材料的丙泊酚乳状注射液抑菌效力的差异性。方法按2015年版《中国药典》抑菌效力检查法规定,以金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、黑曲霉和白色念珠菌为试验菌,分别加入丙泊酚乳状注射液中进行微生物挑战试验,在不同时间点检测样品中微生物的存活情况。结果样品(低硼硅和中硼硅玻璃安瓿)的抑菌效力均不符合2015年版《中国药典》抑菌效力检查法的规定,2种包装材料的样品抑菌效力无显著差异。结论添加低浓度EDTA(0.005%)可有效排除单剂量包装注射液使用过程微生物污染隐患。

小规格高浓度奥硝唑注射液无菌检查方法学研究

目的建立适宜的小规格高浓度(3mL∶0.5g)奥硝唑注射液无菌检查方法。方法参考2015年版《中国药典(四部)》通则1101无菌检查法,采用薄膜过滤-中和剂、稀释-中和联合法探索。结果阳性对照组培养管均混浊;试验Ⅰ组中6种试验菌培养管均未出现混浊;试验Ⅱ组和试验Ⅲ组中白色念珠菌和黑曲霉培养管均混浊,而其余菌均未生长;试验Ⅳ组中枯草芽孢杆菌、白色念珠菌和黑曲霉培养管均混浊,其余菌均未生长;试验Ⅴ组中枯草芽孢杆菌、白色念珠菌和黑曲霉培养管明显混浊,但金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和生孢梭菌由于过滤过程中产生泡沫不易观察;试验Ⅵ组中试验菌培养管均混浊(生孢梭菌培养管在第5天出现混浊),浊度较阳性对照组轻;试验Ⅶ组中试验菌培养管均混浊(生孢梭菌培养管第3天变混浊),浊度与对照组相近;试验Ⅷ组试验菌培养管均混浊(生孢梭菌培养管第2天混浊),该组方法较试验Ⅶ组更合理。结论所建立的稀释-中和剂薄膜过滤法适用于小规格(3mL∶0.5g)奥硝唑注射液的无菌检查。

2015年至2017年陕西省保健用品微生物污染现状调查与分析

目的了解陕西省近3年保健用品微生物污染状况,为提升产品质量提供参考。方法对陕西省2015年至2017年企业送检和抽检的570份样品进行微生物检验,对不合格样品中的微生物进行分离、鉴定,将分离出的菌落进行统计、分析。结果 3年送检和抽检的570份保健用品中不合格样品共25批,共分离出8种致病菌及条件致病菌。结论对保健用品中检出菌进行分离确定有利于了解生产厂家在保健用品生产过程中存在的问题,使企业在人、机、料、法、环5个方面提升产品质量。

硝酸咪康唑阴道软胶囊中、美药典计数方法对比研究

目的对依据《中国药典》2020年版和《美国药典》41版(即USP41-NF36)建立的硝酸咪康唑阴道软胶囊微生物计数方法进行对比研究。方法依据《中国药典》2020年版和《美国药典》41版的微生物计数方法适用性要求进行方法确认试验。结果两种硝酸咪康唑阴道软胶囊微生物计数方法都选择薄膜过滤法,在供试液制备上有所不同;稀释液、培养基选择不同;冲洗量不同,但各试验菌回收均在0.5~2.0之间,方法适用性试验均通过。结论依据《美国药典》41版建立的硝酸咪康唑阴道软胶囊计数方法中供试液制备更准确,采用先加入试验菌的方式更科学。

复方角菜酸酯乳膏中抑菌剂效力测试

目的:探索复方角菜酸酯乳膏中抑菌剂的合理添加剂量。方法:对不同浓度抑菌剂的抑菌效果进行考察,筛选出抑菌剂的合理添加量。选择有代表性的挑战微生物加入供试品中进行挑战试验,测试微生物在不同时间段的存活情况。结果:0.10%羟苯甲酯与0.05%山梨酸复合使用对铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌和黑曲霉5种代表试验菌均有良好的抑制作用,为最低有效剂量。结论:0.10%羟苯甲酯与0.05%山梨酸复合使用可作为复方角菜酸酯乳膏的抑菌剂,且抑菌效力安全有效。

玉米秸秆发酵生产碱性木聚糖酶

目的:Bacillus pumilus M-26以玉米秸秆为碳源发酵生产碱性木聚糖酶。方法:首先确定碳源组成及浓度、氮源组成及浓度、无机盐种类及浓度,然后通过正交试验得出摇瓶发酵的培养基配方,最后进行20L发酵罐发酵及发酵液处理制备碱性木聚糖酶工艺条件研究。结果:碳源(8%):玉米秸秆:麸皮=4:3;氮源:酵母膏和氯化铵;无机盐:氯化钠、氯化钙及硫酸镁。摇瓶发酵条件,37℃、220r/h、48h,发酵罐发酵条件,37℃、24h。发酵培养基组成:玉米秸秆复合碳源8%,MgSO43 mmol/L,氯化钠3mmol/L,氯化钙7 mmol/L,氯化铵0.9%,K2HPO40.4%,酵母膏0.3%,pH 8.0。摇瓶发酵最高产酶活力620IU/ml,发酵罐发酵最高产酶活力1 815.82IU/ml。碱性木聚糖酶制剂收率80%以上,产品酶活30 000 IU/g,发酵产酶能力800 000IU/L。结论:玉米秸秆与麸皮组成复合碳源经Bacillus pumilus M-26发酵生产碱性木聚糖酶,摇瓶产酶活力620IU/ml,发酵罐产酶活力1 815.82IU/ml。

硫酸软骨素滴眼液抑菌剂筛选与抑菌效力研究

目的:探索硫酸软骨素滴眼液中抑菌剂的合理添加剂量,分别按中国药典2010年版和中国药典2015年版抑菌效力检查法测定硫酸软骨素滴眼液的抑菌效力。方法:对不同浓度抑菌剂的抑菌效果进行考察,筛选出抑菌剂的合理添加量。选择有代表性的挑战微生物为试验菌株进行菌落计数方法学验证,然后进行微生物的挑战试验,按验证方法测定各时间点的菌落数。结果:按2010年版中国药典,含羟苯甲酯0.03%、羟苯丙酯0.015%的硫酸软骨素滴眼液对铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌和黑曲霉5种代表试验菌的抑菌性均符合药典要求;按2015年版中国药典,均不符合药典的要求。结论:中国药典2015年版抑菌效力检查法相对中国药典2010年版抑菌效力判断标准差异较大,硫酸软骨素滴眼液目前的抑菌剂处方无法达到2015年版中国药典的要求,建议更换抑菌剂。