CRISPR-Cas12a信号放大策略与便携式血糖仪耦合定量检测黄曲霉毒素B1

建立了CRISPR-Cas12a与便携式血糖仪耦合定量检测黄曲霉毒素B1(AFB1)的方法。体系中AFB1能够激活Cas12a的反式切割活性,激活后的Cas12a切割电极上蔗糖酶修饰的发夹探针,使得蔗糖酶游离到电极表面的溶液中。蔗糖酶催化蔗糖产生可以被血糖仪监测的响应信号,进而实现对AFB1的检测。在浓度0.001~0.1 ng/mL范围内,AFB1浓度与血糖信号呈良好的线性关系,线性方程为S=3.5+229.1c,检出限为0.3 pg/mL。该方法特异性强,适用于实际样品中AFB1的检测。

基于CRISPR-Cas12a和血糖仪的便携式生物传感器定量检测三聚氰胺

CRISPR-Cas系统作为下一代分子诊断技术在生物传感领域具有很强的应用前景。基于CRISPR-Cas12a的附属切割活性与血糖仪(PGM),构建了便携式PGM-CRISPR生物传感器,实现对三聚氰胺的定量、灵敏及特异性检测。靶标三聚氰胺与双链DNA探针中的核酸适配体特异性结合,并将另一条DNA释放出来。释放出来的DNA可以激活CRISPR-Cas12a的附属切割活性。激活后的CRISPR-Cas12a进一步切割电极上蔗糖酶修饰的单链DNA探针,将蔗糖酶修饰的DNA短片段释放到溶液中。溶液中的蔗糖酶催化蔗糖生成葡萄糖,从而产生可读取的PGM信号。在最优条件下,在0.1~2.5μmol/L范围内,PGM响应信号与三聚氰胺浓度呈良好的线性关系,检出限为37 nmol/L。该便携式PGM-CRISPR生物传感器具有很强的特异性,能够用于牛奶样品中三聚氰胺的定量检测。

基于CRISPR-Cas12a与鸟嘌呤四聚体的电化学适体传感器用于双酚A的免标记检测

开发了一种基于CRISPR-Cas12a与鸟嘌呤四聚体(G-quadruplex)的免标记型电化学适体传感器并用于双酚A(BPA)的检测。当靶标BPA存在时,BPA与双链DNA探针中的核酸适配体序列特异性结合,并将另一条DNA探针释放出来。然后CRISPR-Cas12a的反式切割活性被释放出来的DNA探针激活。激活的CRISPR-Cas12a切割在金电极表面形成的G-quadruplex/氯化血红素复合物的DNA探针,使得电化学信号下降。BPA浓度在0.1~10 nmol/L范围内与电流下降百分比呈线性关系,检出限为0.05 nmol/L。该免标记型电化学适体传感器展现出高选择性并能用于环境水样中BPA的检测。