变异型EBER2通过抑制PKR通路增强鼻咽癌细胞抗凋亡能力

目的:前期研究发现变异型EB病毒编码小RNA 2(EBER2)基因EB-8m可能与鼻咽癌(NPC)相关,本研究旨在探讨变异型EBER2是否通过增强对RNA激活蛋白激酶(PKR)的抑制作用从而提高NPC细胞的抗凋亡能力。方法:以野生型和EB-8m变异型EBER2基因稳定转染的EB病毒阴性NPC细胞系HONE1和CNE1为研究对象,以未转染EBER2基因细胞为对照,分别用10 000 IU/mLα-干扰素(IFN-α)和2μg/mL顺铂诱导凋亡后以流式细胞术检测细胞凋亡;采用Western blot检测IFN-α诱导凋亡细胞中PKR及下游eIF2α和c-Jun的磷酸化蛋白及Bcl-2蛋白表达水平。对EBER2基因转染细胞进行RNA和PKR蛋白免疫共沉淀,检测共沉淀产物中EBER2富集倍数。结果:EBER2基因转染细胞的凋亡率低于未转染EBER2基因细胞(P<0.05或P<0.01),且变异型的细胞凋亡率低于野生型(P<0.05)。与未转染EBER2基因细胞比较,EBER2转染细胞中磷酸化PKR、eIF2α和c-Jun减少,Bcl-2表达升高,且磷酸化PKR在变异型转染HONE1和CNE1细胞中的水平低于野生型转染细胞,磷酸化eIF2α在变异型转染HONE1细胞中的水平亦低于野生型转染细胞,差异均有统计学意义(P均<0.05)。EBER2基因转染细胞RNA和PKR免疫共沉淀产物中可检测到EBER2,且变异型的富集倍数高于野生型(P<0.05)。结论:EB-8m变异型EBER2可能增强EBER2对PKR的结合作用,同时抑制eIF2α和c-Jun磷酸化并上调Bcl-2表达,进而增强NPC细胞抗凋亡能力。

miR-205-5p对鼻咽癌细胞系增殖、迁移和侵袭的影响及其机制

目的观察微小RNA miR-205-5p对鼻咽癌(NPC)细胞系HONE1增殖、迁移和侵袭的影响,探讨其作用机制。方法将人工合成的miR-205-5p模拟物、抑制物及相应阴性对照转染至HONE1细胞中,用CCK-8法检测细胞增殖,细胞划痕实验及Transwell小室检测细胞迁移和侵袭,Western blot检测miR-205-5p潜在靶基因PTEN、Smad4以及PTEN下游基因蛋白激酶B(AKT)的表达水平。结果与对照相比,miR-205-5p模拟物转染细胞增殖、迁移和侵袭能力增强,PTEN和Smad4表达下降,磷酸化AKT(p-AKT)表达升高;而miR-205-5p抑制物转染细胞增殖、迁移和侵袭能力减弱,PTEN和Smad4表达升高,p-AKT表达下降,差异均有统计学意义(t=2.970~8.011,P<0.05)。结论 miR-205-5p可促进NPC细胞增殖、迁移和侵袭,其机制可能与靶向调控抑癌基因PTEN和Smad4表达有关。