深圳市熟食中食源性致病菌污染状况的调查研究

目的 了解深圳市熟食中沙门菌、志贺菌、金黄色葡萄球菌、单增李斯特菌、致泻性大肠杆菌、副溶血性弧菌的污染及菌相分布状况,为深圳市食品中致病菌污染提供本地资料,以及食品卫生监督提供科学依据。 方法 依据国标方法,采用全自动微生物分析仪,对样本分别进行上述致病菌分离、血清学、生化鉴定。 结果 检测肉类熟食240 份、凉拌菜100份,共检出致病菌20 株,总检出率为5 .9%,烧烤类检出率为5. 0%、酱卤类检出率为2. 5%、白切类检出率为10%、凉菜类检出率为7 .0%,其中沙门菌3株、志贺菌1株、金黄色葡萄球菌9株、单增李斯特氏菌1株、致泻性大肠杆菌3株、副溶血性弧菌3株。 结论 深圳市熟食中存在食源性致病菌污染,4类食品以金黄色葡萄球菌污染最为严重,其次是致泻性大肠杆菌和副溶血性弧菌。

2001～2003年深圳市餐饮业餐具微生物污染状况调查

目的通过3年连续抽查检测,全面了解深圳市饮食行业中餐具的卫生质量情况,为今后餐饮业的卫生监督提供科学依据.方法大肠菌群按GB14934-94纸片法,致病菌按GB4789.3-28进行.结果2001～2003年餐具大肠菌群整体合格率分别为81.1%、82.2%和87.9%.致病菌均未检出. 结论深圳市餐饮业中使用的餐具卫生状况整体情况比较好,但中小餐厅污染较严重,四星级以上酒楼的餐具卫生状况最好.建议卫生监督机构加强对卫生状况差,消毒效果不好或不落实的餐厅的卫生监督力度和抽检频次,发现问题及时处理.

食品中金黄色葡萄球菌的肠毒素检测及耐药性

目的了解食品中金黄色葡萄球菌对药物的敏感性及产肠毒素的情况,对食物中毒检测提供理论依据和指导临床用药。方法药物敏感性试验采用1997年美国NCCLS药敏试验(纸片法)方法进行,用反向被动乳胶凝集试验检测肠毒素。结果金黄色葡萄球菌除对万古霉素、替考拉宁敏感外,对其余10种存在不同程度的耐药;金黄色葡萄球菌产肠毒素总检出率为38%,其中A型为25%,C型为12.5%,其次为D型为5%,E型为2.5%,B型未检出。结论检测食物中毒及食品样品中的金黄色葡萄球菌时,应考虑肠毒素的检测;临床治疗金黄色葡萄球菌感染,应建立在体外药敏试验的基础上,有针对性地选择抗菌药物。

改良分子信标实时PCR快速检测大肠杆菌O_(157):H_7

目的建立改良分子信标实时PCR快速检测大肠杆菌O157H7的快速方法。方法根据GenBank公布O157H7的rfbE保守序列,设计一对引物和改良分子信标探针,用FAM荧光剂标记探针的5’端,建立改良分子信标实时PCR检测O157H7的反应体系,应用于食物中毒快速诊断和食品微生物检测。结果共检测11种细菌,只有大肠杆菌O157H7有荧光信号,其余10种全无荧光信号,且与其他细菌无交叉反应,DNA灵敏度为64fg,菌液灵敏度为59cfu/ml或2cfu/PCR反应体系。应用改良分子信标实时PCR反应体系检测10株O157H7均出现特异的荧光信号,无干扰。对89份食品样品进行检测,5份O157H7实时PCR阳性,其余样品为阴性,检测仅需2h。5份阳性样本,经传统方法培养,有3份检出大肠杆菌O157H7。结论改良分子信标实时PCR检测体系快速、灵敏度高,特异性强,可用于大肠杆菌O157H7食物中毒的快速诊断和食品微生物检测,为食源性疾病的分子流行病学调查提供新的检测手段。

桶装饮用水不合格原因分析

目的寻找桶装水不合格的原因,针对原因,采取改进措施,提高桶装水的卫生质量,确保人民喝上真正卫生、有益身体健康的饮用水。方法通过对流通市场饮用水的抽查检测,结合生产领域、流通领域的现状进行分析。结果造成桶装水不合格原因是多方面的,虽然总合格率有所提高,但情况不容乐观。结论不同品牌的水卫生状况差异很大,消费时应选择生产规模大、信誉好的企业。

金黄色葡萄球菌半乳糖醇酶基因克隆

目的了解金黄色葡萄球菌的生物化学和代谢特征,以及其半乳糖醇酶与产生肠毒素的关系。方法利用PCR方法从金黄色葡萄球菌标准株中扩增出金黄色葡萄球菌半乳糖醇酶,克隆到pmD-18T载体上并转化到E.coliJM109菌株。结果用特异引物扩增800bp的基因片段,目的基因被克隆,经双酶切和DNA序列测定为金黄色葡萄球菌半乳糖醇酶基因。结论金黄色葡萄球菌半乳糖醇酶基因片段可以被特异性扩增和克隆。

用鸡胚和MDCK细胞分离流感病毒的实验研究

目的 通过两种分离流感病毒方法的比较 ,提高流感病毒分离率和流感监测效果。方法 对 5 0 0份咽拭子标本同时采用MDCK细胞培养法和鸡胚双腔培养法分离。结果 细胞培养法分离流感病毒 35株 ,分离率为 7% :鸡胚双腔培养法分离流感病毒 12株 ,分离率为 2 4 %。共 35株病毒株 ,其中A3 型 15株 ,S型 2 0株。结论 流感病毒分离中 ,细胞培养法比鸡胚培养法敏感 ,同时用两种方法培养 ,可明显提高流感病毒分病率。

深圳市细菌性食物中毒病原菌的调查与预防

目的了解深圳市近年引起细菌性食物中毒常见病原菌的种类、特点和趋势，为检测和预防控制细菌性食物中毒提供科学依据。方法根据《中华人民共和国国家标准食品卫生检验方法》微生物学部分对深圳市2003-2005年细菌性食物中毒检测致病菌资料进行统计分析。结果在3a中报告的63起细菌性食物中毒中依次是以副溶血弧菌（39．7％）、变形杆菌（15．9）、沙门菌（12．7）、金黄色葡萄球菌（11．1％）、蜡样芽胞杆菌（3．2％）为主要致病菌。结论深圳市为沿海城市，细菌性食物中毒病原菌以副溶血弧菌、变形杆菌为主，今后在对食品污染监测时，可重点监测上述致病菌，开发快速检测方法，这样可为预防、处理和治疗食物中毒赢得时间，确保食物中毒病人及时得到治疗，保障病人的安全和身体健康。

蛋白质功能研究方法及技术

随着后基因时代的到来,蛋白质功能研究已经成为蛋白质组学研究的核心内容,是生物科学极具挑战的领域之一。近年来虽已有大量文章涉及某些蛋白质功能方面的研究,但对蛋白质功能研究方法方面进行系统综述的文章非常少,因此,从差异蛋白的筛选鉴定、蛋白质相互作用、蛋白质亚细胞定位、蛋白质表达改变的分子遗传学手段(如RNAi)、生物信息学等方面对目前蛋白质功能研究方法和技术及其最新研究进展进行综述,研究者可根据不同的蛋白和实验需要选择适宜的方法。

深圳市肉类食品空肠弯曲菌的污染情况调查

目的了解我市常见肉类食品中空肠弯曲菌的污染状况,为控制和预防空肠弯曲菌食物中毒提供科学依据。方法在食品污监测点随机抽检肉类食品样品117份,用传统国标法和荧光PCR法进行检测。结果从117份肉类食品中检出4份空肠弯曲菌,阳性检出率为3.4%。结论深圳市肉类食品中存在空肠弯曲菌的污染,如果加工、销售不当,及监督不严,会对群众健康构成潜在威胁。

深圳市食品中单核细胞增生性李斯特菌的污染状况调查

目的了解深圳市食品中单核细胞增生性李斯特氏菌的污染状况,并评价不同方法的检测效果。方法分别用传统分离培养方法和荧光PCR方法进行分离培养及检出鉴定。结果从178份样品中检出3份(株)单核细胞增生性李斯特氏菌,检出率为1.68%。结论深圳市食品中存在单核细胞增生性李斯特氏菌污染的危险,需加强食品中单核细胞增生性李斯特氏菌监测。用传统方法结合荧光PCR方法能提高单核细胞增生性李斯特氏菌的检出率和准确性。

日本血吸虫感染者尿液中特异性IgG及亚类的检测

目的 研究日本血吸虫感染者尿液中特异性循环抗体在日本血吸虫诊断上的应用。 方法 采集粪检确诊的日本血吸虫患者尿液 ,ELISA法测定尿液中抗日本血吸虫特异性IgG及亚类 (IgG1,IgG2 ,IgG3 )抗体 ;同时肝吸虫阳性患者尿液作为考核交叉反应样本 ,无寄生虫感染者尿液作为阴性对照。 结果 粪检阳性日本血吸虫患者尿液中抗日本血吸虫IgG抗体的检出率为 81 0 % (17/ 2 1) ,其中IgG1为 81 0 % (17/ 2 1) ,IgG2 为 19 0 % (4 / 2 1) ,IgG3 为 2 3 8%(5 / 2 1) ,肝吸虫患者尿液中IgG1抗体与日本血吸虫抗原有 2 5 0 % (2 / 8)的交叉反应 ,IgG2 和IgG3 均未发生交叉反应。 结论 日本血吸虫患者尿液中存在抗日本血吸虫的特异性循环抗体 ,肝吸虫患者尿液中的IgG1抗体与日本血吸虫抗原有一定的交叉反应 ,但IgG2 和IgG3 无交叉反应现象 ,提示尿液中的IgG抗体可以作为血吸虫感染的诊断 ,尿液中的IgG2 和IgG3

2001～2003年深圳市学校食堂餐具消毒监测结果分析

目的全面了解深圳市学校食堂餐具的卫生质量情况,为今后学校师生食堂餐饮卫生监督提供科学依据.方法大肠菌群按GB 14934-94纸片法,致病菌按GB 4789.4.5-2003进行.结果深圳市学校2001～2003年餐具大肠菌群整体合格率分别为87.3%、92.5%、96.8%,致病菌均未检出.结论深圳市大中小学校使用的餐具卫生状况整体情况比较好,多数学校餐具卫生3 a保持良好状态,只有个别学校稍差.建议卫生监督机构除继续保持监测外,应着重加大对卫生状况和消毒效果稍差的学校的监督,指导学校做好消毒工作,以保护学校师生的饮食安全,避免引起食物中毒.

改良分子信标-实时PCR快速检测志贺菌

目的:建立改良分子信标-实时PCR检测志贺菌的快速方法,应用于志贺菌食物中毒的快速诊断和门诊肠道致病菌的检测。方法:根据GenBank公布志贺菌ipaH基因的保守序列,设计引物和改良分子信标探针,建立实时PCR-改良分子信标检测体系,应用于对志贺菌食物中毒的快速诊断和门诊肠道致病菌的检测。结果:改良分子信标-实时PCR反应体系DNA灵敏度为93 fgμ/l,菌液灵敏度为64 cfu/m l或2 cfu/PCR反应体系,无交叉反应。此反应体系检测67株志贺菌,均出现特异的荧光信号。对细菌性食物中毒样本等共657份样品进行志贺菌检测,42份志贺菌实时PCR阳性,其中41份志贺菌细菌培养阳性。从样品处理到检测结果仅需2 h^1 d时间。结论:改良分子信标-实时PCR检测体系快速、灵敏度高,特异性强,可用于志贺菌食物中毒的快速诊断,为食源性疾病的分子流行病学调查提供新的检测手段,对于提高肠道门诊的工作效率有重要意义。

转基因食品多重定性PCR及实时荧光定量PCR检测方法的研究

多重PCR方法是建立在传统PCR检测技术基础上的快速简便的检测手段。本研究以国际市场上转基因食品的主流产品转抗除草剂大豆 (RR大豆 )、Bt176玉米及我国自行研发的抗菌肽辣椒为材料 ,以多重PCR方法为基础 ,通过基因片段筛选及引物比例调整 ,进行了转基因食品的调控元件、外源结构基因及物种内源特性基因三种片段的单管同时扩增。结果与常规PCR方法检测结果完全相符。同时 ,针对RR大豆 ,对几类大豆产品运用实时定量PCR方法进行定量分析 ,得到相应的转基因成分的含量。操作简便快速 ,检测结果与标准相符 ,检测灵敏度较常规PCR更高。

抽检与送检桶装纯净水微生物污染的调查研究

目的研究分析抽检与送检桶装纯净水微生物污染的结果差别和卫生质量。方法对深圳市桶装纯净水的各种产品随机抽检280份;商场、超市和企业等主动送检桶装纯净水各种产品121份,采用国标标准进行微生物指标的各种检测,按国家微生物卫生标准评价。对二组结果进行比对分析研究。结果抽检的280份桶装纯净水合格率为74.3%;送检的桶装纯净水合格率为90.1%,经统计学处理两者有统计学意义(χ2=12.73,P﹤0.001)。结论抽检桶装纯净水合格率明显低于送检桶装纯净水的合格率,且两者的差别有统计学意义,说明桶装纯净水存在潜在的安全隐患,并威胁着市民的饮水安全。

金黄色葡萄球菌肠毒素快速分型体系的建立及应用

目的建立SYBR-Green荧光PCR体系金黄色葡萄球菌肠毒素快速分型体系,应用于金黄色葡萄球菌食物中毒和食品风险监测快速诊断。方法根据GenBank公布的金黄色葡萄球菌肠毒素A、B、C、D、E基因的保守序列设计特异性引物,分别建立SYBR-Green荧光PCR体系。应用该系列体系检测185株金黄色葡萄球菌野生株的肠毒素基因A～E型。结果建立的SYBR-Green荧光PCR系列体系其DNA灵敏度为1.34～2.80ng/μL,菌液灵敏度为46～96CFU/mL;用以检测185株金黄色葡萄球菌的肠毒素基因A～E型,携带一种基因型的为58.38%,同时携带两种以上毒素基因占4.86%。结论建立的荧光PCR反应体系快速、灵敏度高、特异性强,能应用于金黄色葡萄球菌肠毒素基因的准确分型,对食物中毒诊断和食品风险监测很有意义。

改良分子信标-实时PCR快速检测产单核李斯特菌

目的:建立改良分子信标-实时PCR检测产单核李斯特菌(LMO)的快速方法,应用于食品中LMO的污染状况调查及食物中毒快速诊断。方法:根据GenBank公布的LMO hlyA基因的保守序列,设计引物和改良分子信标探针,建立改良分子信标-实时PCR检测体系,应用于食品中LMO检测。结果:改良分子信标-实时PCR反应体系DNA灵敏度为110 fg,菌液灵敏度为99 cfu/m l或4 cfu/PCR反应体系,无交叉反应。以此反应体系检测28株LMO,均出现特异的荧光信号。上述方法可将检测时间由原来的至少4 d缩短至1 d。对228份食品进行LMO检测,8份增菌液LMO实时荧光PCR阳性,其中6份LMO细菌培养阳性。结论:改良分子信标-实时PCR反应体系快速、灵敏度高,特异性强,能提高LMO的检出率和准确性,可应用于LMO食品污染状况调查及食物中毒的快速诊断。