血清IgG4和CA199联合检测在自身免疫性胰腺炎和胰腺癌鉴别诊断中的意义

目的研究血清IgG4在中国人自身免疫性胰腺炎(AIP)中的诊断价值,并探讨联合检测血清糖类抗原199(CA199)在AIP和胰腺癌鉴别诊断中的作用。方法 750例慢性胰腺炎患者和30例胰腺癌患者血样采自2009年8月至2010年7月消化科门诊或住院患者;30名正常健康人血样取自血站和体检部。血清IgG4浓度采用速率散射比浊法测定,血清CA199浓度采用电化学免疫发光法测定。各组间血清IgG4和CA199浓度变化的差异采用非参数统计分析。结果 750例慢性胰腺炎患者血清中有28例血清IgG4浓度高于正常参考值上限(>2.0 g/L),其中11例(1.4%)患者经影像学和胰腺穿刺活检病理检查等确诊为AIP,其IgG4浓度中位数为11.10(4.12～37.20)g/L;胰腺癌患者IgG4浓度为0.51(0.06～1.12)g/L,正常对照组IgG4浓度为0.56(0.18～1.50)g/L。AIP患者组血清中的IgG4浓度明显高于正常参考值上限,且明显高于胰腺癌患者和正常对照组(P<0.000 1)。胰腺癌组血清IgG4水平均低于正常参考值上限,与正常对照组比较差异无统计学意义。所有确诊AIP患者血清CA199浓度7例患者轻、中度升高,余低于正常参考值上限(<37 U/L),浓度中位数为41.48(0.60～136.40)U/L;然而胰腺癌组血清CA199浓度中位数为533.60(4.25～1 000)U/L,明显高于AIP患者组(P<0.01)。结论血清IgG4明显升高,用于辅助诊断AIP具有较高的特异性和敏感性,提示将IgG4水平纳入AIP的诊断标准对中国人也适用;在AIP和胰腺癌难以鉴别时,同时检测血清IgG4和CA199有助于临床对AIP和胰腺癌的鉴别诊断。

RNAi抑制肾癌细胞MDR1基因表达及对顺铂化疗耐药的逆转

目的:研究RNA干扰(RNA interference,RNAi)对肾癌细胞多药耐药基因1(multidrug resistance,MDR1)表达的抑制作用,并分析干扰前后肾癌细胞对顺铂(cisplatin)敏感度的变化。方法:根据MDR1基因序列设计3条小干扰RNA(small in-terfering RNA,siRNA),转染肾癌A498细胞;RT-PCR法检测转染前后MDR1 mRNA表达水平的变化,筛选出干扰效率最高的siRNA序列;进而利用慢病毒包装siRNA重组质粒,感染A498细胞,RT-PCR法筛选沉默效果最好的细胞株进行克隆;Western印迹法检测MDR1蛋白表达水平;MTT法检测干扰前后顺铂对半数细胞抑制浓度(half inhibitory concentration,IC50)的变化。结果:3条siRNA序列均能不同程度地抑制细胞MDR1基因的表达,其中siRNA-1序列能更有效地封闭MDR1基因,使MDR1 mRNA表达水平下降67%;筛选得到稳定转染的细胞株与未干扰细胞株相比,MDR1蛋白表达量明显下降(P<0.01),并使顺铂对细胞的IC50值降低约83.37%(P<0.01)。结论:RNAi能有效抑制肾癌A498细胞MDR1基因的表达,并可显著增加其对顺铂的敏感度,从而使肾癌细胞化疗耐药逆转成为可能。

慢性乙型肝炎患者外周血Th17细胞比例和IL-17表达水平的临床意义

目的分析临床不同疾病程度慢性乙型肝炎(CHB)患者和正常对照者外周血辅助性T细胞17(Th17)的比例和其效应分子白细胞介素17(IL-17)水平的变化与疾病严重程度、乙型肝炎病毒(HBV)DNA载量、肝脏损伤标志物等的关系,以进一步证实Th17细胞在CHB患者疾病进程中的作用。方法应用流式细胞术、实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)等检测93例CHB患者(其中轻度21例、中度37例、重度35例)和28名正常对照者外周血Th17细胞比例、血清IL-17水平,纯化CD4+T细胞经功能性抗CD3、抗CD28抗体刺激后IL-17和维甲酸相关孤儿核受体C(RORC)mRNA表达水平,纯化CD4+T细胞刺激后培养液中IL-17水平。比较和分析上述检测数据在各组间的统计学差异及与HBV DNA载量、肝脏损伤标志物等的关系。结果与正常对照组相比,CHB组外周血Th17细胞比例明显升高,且随着疾病的加重,Th17细胞的比例也随之上升。CHB重度组Th17细胞比例、IL-17和RORC mRNA表达水平显著高于中度组、轻度组和正常对照组(P<0.05),各组间血清IL-17水平差异无统计学意义(P>0.05);CHB组纯化CD4+T细胞刺激后培养液中IL-17水平显著高于正常对照组(P<0.05);CHB重度组培养液IL-17水平明显高于中度组和轻度组(P<0.05)。CHB组外周血Th17细胞比例与血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平呈明显正相关(P<0.01),而与血清HBV DNA载量无相关性。结论 CHB患者体内增高的Th17细胞可能是造成肝脏炎症、肝细胞损伤的主要原因之一,并与CHB的重症化密切相关。

不同年龄条件下泛素羧基端水解酶-L1基因多态与帕金森病发病的相关性研究

目的探讨不同年龄条件下泛素羧基端水解酶-L1基因(UCH-L1)第3外显子丝氨酸/酪氨酸(C/A)多态、第4外显子丝氨酸/苯丙氨酸(C/T)多态与帕金森病发病风险间的关系。方法采用聚合酶链式反应限制性片段长度多态性方法(PCR-RFLP),在164例帕金森病患者和172例健康对照中观察UCH-L1基因C/A和C/T多态的分布,并通过比数比(OR)进行相关分析。结果帕金森病组中UCH-L1第3外显子的C等位基因频率(62.2%)明显高于对照组(51.7%)(OR=1.534,P=0.006),CC基因型频率(36.6%)亦明显高于对照组(23.3%)(OR=1.904,P=0.008),而且这种正相关主要存在于≥60岁的帕金森病患者中(OR=2.689,P=0.002)。帕金森病组中UCH-L1第4外显子C/T多态等位基因和基因型频率的分布与对照组比较无显著差异,进行年龄分层后该基因多态在两组人群中的分布差异仍无统计学意义。结论UCH-L1第3外显子C等位基因可能是老年人帕金森病发病的危险因子,而第4外显子C/T多态则与帕金森病发病无关。

RNAi逆转肾癌细胞MDR1基因表达导致的替尼泊苷耐药

目的:研究RNA干扰(RNA interference,RNAi)对肾癌细胞多药耐药基因(MDRl)表达的抑制作用,并分析干扰前后肾癌细胞对替尼泊苷(VM-26)敏感性的变化。方法:根据MDRl基因设计3条小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)序列,在质粒的介导下转染肾癌A498细胞,RT-PCR法分析转染前后MDR1mRNA表达水平,筛选出干扰效率最高的siRNA序列;进而利用慢病毒包装siRNA重组质粒,感染A498细胞,RT-PCR法筛选沉默效果最好的细胞株进行克隆,Western bolt法检测MDR1蛋白表达水平,MTT法对比干扰前后替尼泊苷对细胞半抑制浓度(IC50)的变化。结果:3条siRNA序列均能不同程度地抑制细胞MDR1基因的表达,其中siRNA-1序列能更有效地封闭MDRl基因,使MDRl mRNA表达水平下降67%;筛选出的稳转细胞株与未干扰细胞株相比,MDR1蛋白表达量明显下降,并使替尼泊苷对细胞的IC50降低约79.8%,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:RNAi可抑制肾癌A498细胞MDRl基因的表达从而逆转其对替尼泊苷的耐药,使肾癌细胞化疗耐药逆转成为可能。

异嗜性抗体干扰引起血清多项肿瘤标志物显著升高1例

血清肿瘤标志物水平是影响肿瘤患者或肿瘤高危风险者诊治的重要指标。然而,某些患者体内存在各种干扰物质,如类风湿因子(rheumatoid factor,RF)、异嗜性抗体等,可以干扰建立在免疫学分析基础上的肿瘤标志物的检测。干扰物质和受干扰的程度可因检测系统不同而出现差异。本研究报道1例因血清存在异嗜性抗体造成多项肿瘤标志物假性增高的病例。1病例资料患者,男,22岁。因反复呼吸困难8年,加重伴胸痛1月余来海军军医大学附属长海医院就诊。患者于8年前因外伤导致支气管裂伤,并发重度皮下气肿和右肺不张,行气肿切开并减压保守治疗。2009年突发呼吸困难,行右肺上叶支气管断裂修补术(具体不详)。术后因反复气管内肉芽组织增生,多次行气管介入治疗,但效果不佳。于2013年在海军军医大学附属长海医院行支气管内镜下覆膜金属支架置入术,2014年10月更换为L型硅酮支架。近1个月出现深呼吸后胸痛、呼吸困难等情况,于2017年8月入院。