骨碎补总黄酮通过激活mTOR信号通路促进大鼠腱骨愈合的实验研究

目的 :探讨骨碎补总黄酮对大鼠腱骨愈合的作用及相关分子机制。方法 :选取10只8周龄雄性SD大鼠(体重180~220 g),培养原代跟腱干细胞,取第3代跟腱干细胞用于实验。向大鼠跟腱干细胞中加入不同浓度(0、0.1、1、10 ng/ml)骨碎补总黄酮处理,14 d后分别检测ALP、Runx2、OCN、VEGF、P-S6和P-4E/BP1表达的变化。选取40只8周龄的雄性SD大鼠(体重180~220 g)行大鼠关节外骨隧道-游离肌腱移植造模,术后随机分为实验组和对照组,实验组灌胃骨碎补总黄酮(100 mg·kg-1·d-1),对照组灌胃等量的生理盐水。分别于术后3、6周取材进行生物力学检测腱骨愈合强度,组织学切片观察腱骨愈合情况及新生血管数目。结果:不同浓度的骨碎补总黄酮处理后,ALP染色及活性指标检测提示0 ng/ml组(0.55±0.11)、0.1 ng/ml组(0.87±0.08)、1 ng/ml组(1.18±0.11)、10 ng/ml组(1.48±0.10),各组比较差异有统计学意义(P<0.05);体外培养14 d后提取细胞蛋白免疫印迹实验提示,随着骨碎补总黄酮浓度的增加,mTOR下游标记蛋白P-S6蛋白表达量逐渐增加(P<0.05),P-4E/BP1蛋白表达量逐渐减少(P<0.05),成骨相关蛋白Runx2、OCN,VEGF表达量逐渐增加(P<0.05)。生物力学检测显示术后3周时,对照组(0.51±0.02)N/mm和实验组(0.78±0.05)N/mm力学强度比较差异无统计学意义(P>0.05),而6周时实验组(1.36±0.09)N/mm的力学强度明显高于对照组(1.01±0.08)N/mm(P<0.05)。组织学结果显示实验组3周和6周时腱骨界面细胞成熟程度更高,Sharpey纤维生长更加密集,间质钙化程度更高,新骨和血管发生明显增多。结论:骨碎补总黄酮可以通过激活mTOR信号通路,促进肌腱干细胞的成骨分化,在活体可以加快腱骨愈合速度,提高腱骨愈合质量。

中药续断对跟腱愈合过程中TGF-β1表达的影响研究

目的探讨中药续断对跟腱断裂愈合的影响及其机制。方法16只8周龄雄性新西兰白兔(体重2~2.5kg)制作成跟腱断裂模型。实验动物随机分为实验组(续断治疗组)和对照组,实验组予以续断灌胃,对照组予生理盐水灌胃。术后6周采集标本。观察跟腱吻合口标本Masson染色及天狼星红染色下细胞形态和胶原分布,并采用Western blot法分析跟腱吻合口处TGF-β1的表达。结果Masson染色下实验组标本无差异,天狼星红染色可见对照组内不规则胶原纤维形成;续断组胶原纤维致密,按一定方向规则排列。续断组胶原分布较对照组整齐。续断组Western blot灰度值为(0.905±0.23),对照组为(0.590±0.21),两组比较差异有统计学意义(t=2.785,P=0.015)。以GAPDH作为内参基因,续断组qPCR为(23.15±2.38),对照组为(21.66±2.08),差异具有统计学意义(t=2.808,P=0.018);续断组qPCR相对表达值较对照组增高2.16倍。续断组TGF-β1较对照组显著上调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论续断可能通过增加TGF-β1的表达增加跟腱的愈合能力,有望为跟腱断裂的治疗提供新的中医药参考。

快速康复外科理念在普外科患者围术期护理中的应用效果

目的探讨快速康复外科理念在普外科患者围术期护理中的应用效果。方法选取湘潭县人民医院2014年6月—2016年8月收治的普外科手术患者78例,根据随机数字表法分为对照组和干预组,各39例。对照组患者予以常规护理干预,干预组患者于围术期护理引入快速康复外科理念。比较两组患者术后24、48、72 h视觉模拟评分法(VAS)评分、治疗时间(术后引流时间、尿管留置时间、住院时间及首次下床时间)、术后24 h镇痛需求率、护理满意度、并发症发生率。结果术后24、48、72 h,干预组患者VAS评分低于对照组(P<0.05)。干预组患者术后引流时间、尿管留置时间、住院时间及首次下床时间短于对照组(P<0.05)。干预组患者术后24 h镇痛需求率、并发症发生率低于对照组,护理满意度高于对照组(P<0.05)。结论快速康复外科理念在普外科患者围术期护理中的应用效果良好,可有效缓解患者术后疼痛程度,提高患者护理满意度,减少并发症发生。

探讨综合康复治疗腰椎间盘突出症的临床疗效

目的探讨综合康复治疗腰椎间盘突出症的临床疗效。方法选取128例腰椎间盘突出患者,分为观察组与对照组各64例,对照组患者采用常规康复治疗,观察组患者采用综合康复治疗,对比治疗效果。结果观察组患者治疗总有效率高于对照组患者,观察组患者治疗满意度优于对照组,P<0.05。结论采用综合康复治疗腰椎间盘突出效果显著。

黄芩素通过WNT/β-catenin信号通路促进大鼠腱骨愈合

目的探讨黄芩素对大鼠腱骨愈合的作用及相关分子机制。方法取40只8周龄的雄性SD大鼠,随机分为对照组(n=20)和实验组(n=20)。两组动物均行大鼠腱骨愈合模型造模。实验组大鼠灌胃黄芩素10 mg/(kg·d),对照组灌胃等量的生理盐水。术后3周、6周各处死10只大鼠并取材,通过生物力学、组织学观察各组腱骨愈合的程度。此外,体外培养原代大鼠肌腱干细胞,加入不同浓度(0、0.1、1、10μmol/L)的黄芩素处理,14 d后分别进行ALP、茜素红染色。Q-PCR、Western Blot检测Runx2、OSX、OCN、一型胶原以及β-catenin的变化。随后,在肌腱干细胞中加入10μmol/L的黄芩素,并且加入WNT/β-catenin通路抑制剂DKK-1共培养,14 d后收集蛋白行Western Blot检测,观察β-catenin、Runx2以及OCN蛋白表达的变化。结果生物力学结果显示术后3周和术后6周时实验组的腱骨愈合程度明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。组织学结果显示实验组在术后3周和6周时腱骨界面细胞成熟程度更高,sharpey纤维生长密集度与间质钙化程度更高。ALP、茜素红染色、Q-PCR和Western Blot结果显示不同浓度黄芩素均能提高肌腱干细胞的ALP活性,增加矿化结节形成、提高Runx2、OSX、OCN、一型胶原和β-catenin的表达。而β-catenin抑制剂DKK-1后能显著降低黄芩素的这种促成骨作用。结论黄芩素可以有效促进腱骨界面细胞成熟与腱骨界面的胶原分泌,加速腱骨愈合并提高腱骨愈合质量,这种促进作用呈现WNT/β-catenin信号依赖性。