牦牛“海绵吸附”bta-miR-125b的lncRNA筛选验证及慢病毒载体构建

旨在筛选在牦牛卵泡发育过程中可能吸附bta-miR-125b的长链非编码RNA(lncRNA),并构建双荧光素酶载体与慢病毒过表达载体,为研究调控牦牛生殖相关lncRNA的功能及机制提供基础。利用miRanda与RNAhybrid数据库预测可能靶向牦牛bta-miR-125b的lncRNAs,筛选出bta-miR-125b具有“海绵吸附”作用的lncRNAs,由RNAhybrid进行结合位点预测,筛选出最优的lncRNA;采集牦牛卵巢分离卵泡并提取总RNA构建cDNA池,以RT-PCR技术扩增筛选所得lncRNA;在此基础上利用pmir-GLO载体构建技术构建该lncRNA野生型及突变型双荧光素酶报告载体,并将其与bta-miR-125b mimics共转染至293T细胞,检测双荧光素酶活性;最后利用慢病毒载体构建技术将测序正确的lncRNA与pHBLV-CMV-MCS-EF1-ZsGreen-T2A-puro载体同源区的片段同源重组,通过慢病毒包装系统(psPAX2:pMD2G)包装后感染293T细胞,计算感染效率及滴度。结果:两个数据库中的lncRNA-ARS-UCD1.2与bta-miR-125b存在紧密结合位点,扩增出lncRNA-ARS-UCD1.2的序列全长为1552 bp;双荧光素酶活性检测表明牦牛lncRNA-ARS-UCD1.2与bta-miR-125b mimic具有靶向关系(P<0.01);同源重组后经酶切鉴定及测序验证表明成功构建了重组质粒,感染效率达(61.520±0.875)%,感染滴度为4×10^(8)TU/mL,表明lncRNA-ARS-UCD1.2过表达慢病毒载体成功构建。综上,本试验筛选出牦牛“海绵吸附”bta-miR-125b的lncRNA,并验证了两者的靶向结合关系,同时成功构建了该lncRNA的过表达慢病毒载体,为下一步深入研究lncRNA在细胞中的功能机制奠定了基础。

电针复合乌拉坦麻醉对家兔血小板的影响

本试验研究电针复合乌拉坦麻醉对家兔血小板的影响,18只健康家兔随机分为单纯电针(A组,电刺激足三里、百会、合谷穴)、乌拉坦(B组)、电针复合乌拉坦(C组)3组,检测麻醉后非手术处理下0、1、24 h及围术期0、1、24、48 h试验家兔外周静脉血血小板的变化,为临床麻醉和疾病治疗提供理论根据。结果表明:在非手术处理的第1 h时C组的血小板总数较A、B组差异显著(P<0.05),在围术期第24、48 h时,C组较B组差异显著(P<0.05);血小板分布宽度在第1 h时B组较C组差异显著(P<0.05);血小板分布宽度在围术期第1 h时B组较C组差异显著(P<0.05);大血小板比率在非手术处理第1 h时A、C组的大血小板比率较B组差异显著(P<0.05),第24 h时A、C组的大血小板比率较B组差异显著(P<0.05),大血小板比率在非手术处理的在第1 h时B组的大血小板比率较C组差异显著(P<0.05)。结论:电针刺激足三里、百会、合谷3个穴位可以对血小板的成熟、活性具有一定的调节作用。

电刺足三里穴,合谷穴对家兔术后恢复的影响

为探讨针刺足三里穴,合谷穴对家兔术后愈后恢复的效果。将试验家兔分为4组,2组进行电愈,2组空白对照,进行组内、组间愈后效果对比。7 d愈后数据发现,电愈后呼吸、心跳、体温均在愈后第1~2天达到明显差异,随愈后天数呈上升趋势。电愈后红细胞数和白细胞数均在愈后第1~3天达到损伤修复差异的峰值,随愈后天数呈上升趋势且恢复至正常。电愈术后恢复效果更显著。电针治疗运用术后会促进恢复效果,在临床上用针灸配合术者愈后治疗可有利于促进腹部术后胃肠功能恢复。

电针复合乌拉坦麻醉对家兔红细胞的影响

为探讨研究电针复合乌拉坦麻醉对家兔红细胞、红细胞溶血、造血功能的影响。本试验在18只健康家兔的足三里和百会穴组进行以单纯电针(A组)、乌拉坦(B组)、针灸复合乌拉坦(C组)3种方式麻醉试验家兔,检测麻醉后非手术处理下0、1、24 h、及围术期0、1、24、48 h试验家兔外周静脉血红细胞的变化,为临床麻醉和疾病治疗提供理论根据。结果表明,红细胞总数在非手术处理时24 h的A、B组较C组差异显著(P<0.05),在围术期第24 h时B组较C组差异显著(P<0.05);红细胞分布宽度CV在第24 h时C组的体积较A、B组差异极显著(P<0.01),血红蛋白在围术期第1、24 h时C组的含量较B组差异显著(P<0.05)。结论:电针刺激足三里、百会、合谷3个穴位对乌拉坦麻醉家兔产生的溶血作用有改善作用,且可促进机体造血功能。