香萱益神方对血管性认知障碍大鼠模型海马小胶质细胞炎症反应调节作用的研究

目的探究香萱益神方对大脑中动脉栓塞(MCAO)法复制的血管性认知障碍(VCI)模型大鼠海马小胶质细胞炎症反应的调节作用。方法42只Wistar大鼠随机挑选12只作为假手术组,其余采用MCAO法建立VCI大鼠模型,造模成功的24只大鼠分为模型组和香萱益神方组,每组12只。香萱益神方组大鼠给予香萱益神方7.46g/kg灌胃,假手术组和模型组给予等量纯净水灌胃,每日1次,连续6周。分别于造模2周后和中药干预6周后行新物体识别实验检测大鼠认知功能,采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法观察香萱益神方干预后大鼠脑组织缺血区域大小的变化;苏木精-伊红(HE)染色法检测香萱益神方对VCI大鼠海马CA1区及齿状回(DG)区神经元结构的影响;免疫组织化学染色法观察香萱益神方对VCI大鼠海马CA1区及DG区小胶质细胞离子钙结合衔接分子1(Iba1)的激活情况;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测各组大鼠海马组织小胶质细胞标记物Iba1、M1型促炎症因子诱导性一氧化氮合酶(iNOS)、白细胞分化抗原86(CD86)和M2型抑炎症因子精氨酸-1(Arg-1)、C型凝集素CD206蛋白的表达;实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)法检测大鼠海马组织Iba1、iNOS、CD86、Arg-1和CD206mRNA的表达。结果新物体识别结果显示,与模型组大鼠比较,香萱益神方组大鼠新物体探索次数识别指数与探索时间识别指数提高(P<0.05),提示VCI模型大鼠认知功能改善。TTC染色结果显示,与模型组大鼠比较,香萱益神方组大鼠脑梗死面积减少(P<0.05)。HE染色结果显示,与模型组比较,香萱益神方组大鼠海马CA1区和DG区锥体细胞形态改善,核固缩减少,细胞间隙缩小,断裂带减少,深染程度降低。免疫组织化学结果显示,与模型组比较,香萱益神方组大鼠海马CA1区和DG区Iba1阳性细胞数减少(P<0.05),胞体形态变细。Western blot结果显示,与模型组比较,香萱益神方组大鼠海马组织Iba1、iNOS、CD86蛋白水平显著下降(P<0.05),Arg-1、CD206蛋白水平升高(P<0.05)。RT-qPCR结果显示,与模型组比较,香萱益神方组大鼠海马组织Iba1、iNOS、CD86 mRNA水平下降(P<0.05),Arg-1、CD206 mRNA水平升高(P<0.05)。结论香萱益神方可能通过调节小胶质细胞促炎表型M1型和抗炎表型M2型极化,抑制海马小胶质细胞炎症反应,从而保护海马神经元,改善大鼠认知功能。