囊泡诱导序列诱导的囊泡蛋白质谱及生物信息学分析

囊泡诱导序列(vesicle inducing sequence,VIS)诱导哺乳动物细胞产生的囊泡,能够装载或展示靶蛋白质,具有产量高、易于改造等特征,有望在草食动物疫苗及水产疫苗等领域得到应用。然而,VIS囊泡的结构组成及形成机制目前还不清楚。基于此,将免疫亲和纯化的VIS囊泡进行蛋白质质谱(LC-MS/MS)鉴定,对鉴定结果进行基因本体(gene ontology,GO)功能注释、KEGG代谢通路分析,同时利用Western blot技术验证排名靠前的部分蛋白质。蛋白质质谱技术共鉴定出709种蛋白质。其中,多数蛋白质为细胞囊泡组分,且部分蛋白质参与高尔基体膜泡运输。KEGG通路富集结果显示,VIS囊泡结构蛋白共参与了3条囊泡形成及运输过程相关的代谢通路,分别为吞噬体通路、内吞作用、突触囊泡途径。该研究从蛋白质水平上揭示了VIS囊泡构成及形成机制,对今后VIS囊泡在动物生物制品及疫苗等领域的应用奠定了基础。

生物囊泡分离鉴定方法及其在兽医学中的应用

生物囊泡是细胞产生的一种膜性小泡,内含丰富的DNA、蛋白质、脂质等生物活性物质,是细胞间重要的信息传递媒介。近年来,生物囊泡在兽医学领域的研究主要集中于外泌体或微囊泡,为抗寄生虫药物研究和某些动物疾病诊断提供了新思路。然而,生物囊泡的分离、纯化及鉴定技术仍是该领域的技术瓶颈,制约了生物囊泡进一步的应用及研究。文章归纳整理国内外相关文献,综述了生物囊泡的类型、分离纯化方法、鉴定技术及其在兽医学中的应用等,以期为生物囊泡应用于兽医临床诊疗提供参考。

马疱疹病毒1型gD囊膜蛋白磷酸化位点的鉴定及其对亚细胞定位的影响

为了研究蛋白质磷酸化修饰对马疱疹病毒1型(EHV-1)gD囊膜蛋白高尔基体驻留的影响,通过蛋白质修饰质谱技术鉴定gD囊膜蛋白磷酸化位点,利用Overlap PCR技术构建磷酸化位点突变型真核表达质粒pCAGGS-gD-S391A-myc及pCAGGS-gD-S391D-myc,并转染至Hela细胞,经Western blot检测野生型及突变型gD囊膜蛋白表达情况,利用间接免疫荧光技术鉴定gD囊膜蛋白及其突变体的亚细胞定位。质谱结果显示,EHV-1 gD囊膜蛋白的S391位点发生磷酸化修饰;测序结果表明,成功构建模拟磷酸化突变型质粒pCAGGS-gD-S391D-myc及模拟去磷酸化突变型质粒pCAGGS-gD-S391A-myc;间接免疫荧光结果显示,模拟磷酸化突变体gD-S391D-myc与野生型gD-myc定位情况类似,都驻留于高尔基体;而模拟去磷酸化突变体gD-S391A-myc可转运至细胞膜。S391位点的磷酸化修饰对gD囊膜蛋白驻留于高尔基体起到重要作用,阻断该位点磷酸化修饰可促进gD囊膜蛋白转运至细胞膜,为进一步研究gD高尔基体驻留机制提供参考。