电针、埋线对小鼠吗啡戒断和耐受调整作用的对比研究

目的通过对吗啡戒断、耐受小鼠进行电针和穴位埋线治疗,观察小鼠海马和脊髓中N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA)受体和胆囊收缩素(cholecystokinin,CCK)的表达水平,探讨电针和埋线对吗啡戒断后戒断、耐受小鼠调整作用的差异。方法将56只雄性C57BL/6J小鼠随机分为戒断空白组、戒断模型组、戒断埋线组、戒断电针组和耐受空白组、耐受模型组、耐受埋线组、耐受电针组,每组7只。吗啡戒断模型根据"7 d递增成瘾法"皮下注射盐酸吗啡注射液,戒断空白组在相同时间点注射等量生理盐水,戒断电针组小鼠每次注射盐酸吗啡注射液15 min后,使用韩式穴位神经刺激仪(HANS-200)电针刺激双侧肾俞穴;戒断埋线组于注射盐酸吗啡注射液15 min后,将0.5 cm铬肠线埋入双侧肾俞穴内。第7天早上10点,腹腔注射盐酸纳洛酮注射液催瘾(4 mg/kg),并观察小鼠戒断反应。根据阿片依赖戒断症状柳田知司测评量表评分,并以酶联免疫吸附剂测定法(Elisa)检测海马和脊髓NMDA受体和CCK含量。按10 mg/kg皮下注射吗啡建立吗啡耐受模型。耐受空白组在相同的时间注射10 m L/kg的生理盐水,耐受埋线组于建立模型第1天在肾俞穴埋线治疗,耐受电针组在建立模型第1天起电针肾俞穴。经7 d治疗后,以Elisa方法检测海马和脊髓的NMDA受体和CCK含量。结果戒断模型组海马NR2B和CCK表达与戒断空白组比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。戒断电针组海马NR2B表达与戒断模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。戒断埋线组和戒断电针组海马CCK表达与戒断模型组比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。戒断模型组小鼠脊髓NR2A、NR2B、CCK表达与戒断空白组比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。戒断电针组脊髓NR2A、NR2B表达与戒断模型组比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。耐受模型组海马NR1、NR2B、CCK表达与耐受空白组比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。耐受埋线组海马CCK表达与耐受模型组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。耐受电针组海马NR1表达与耐受模型组和耐受埋线组比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。耐受埋线组和耐受电针组脊髓CCK表达与耐受模型组比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论肾俞穴穴位埋线及电针治疗对减轻吗啡耐受及戒断均有治疗效果,且电针治疗优于穴位埋线。

电针对荷乳腺癌小鼠视交叉上核Period基因表达的影响

目的观察电针对荷乳腺癌小鼠视交叉上核(suprachiasmatic nucleus,SCN)内Period基因的2个亚型Per1、Per2mRNA的表达及蛋白含量的影响,探讨荷乳腺癌小鼠电针后自发性活动节律变化的分子调控机制。方法将18只C57BL/6J雄性小鼠随机分为空白组、模型组、电针组3组,每组6只。LD驯化10d后关闭光源,使小鼠处于自由运行状态(DD状态)。DD驯化10d后将含有MA-782小鼠乳腺癌细胞株的混悬液接种于模型组及电针组小鼠左侧腋下,建立荷瘤小鼠模型,成瘤后继续监测节律。7d后电针组小鼠进行电针干预,在CT12时相点针刺百会穴和长强穴,连续电针3d;空白组和模型组小鼠均在相同时相点CT12采用相同的方法捆绑固定,不予电针刺激。第3次电针后2h处死动物,切取脑部SCN组织,采用实时荧光定量RT-PCR法测定各组小鼠SCN内Per1、Per2mRNA表达量,采用Western Blot法测定SCN内PER1、PER2蛋白含量。结果荷瘤小鼠SCN内Per1、Per2mRNA表达水平与空白组相比有明显降低趋势,无统计学意义(P>0.05),电针后,mRNA表达量较模型组有明显升高趋势,尤以Per2的差异明显(P<0.05)。荷瘤小鼠蛋白表达量与空白组及电针组相比均有明显差异,其差异具有统计学意义(P<0.05)。结论在CT12时相点电针百会和长强穴可以升高荷乳腺癌小鼠SCN内Per1、Per2mRNA的表达水平及其蛋白含量,提示电针对SCN内Per1、Per2等基因的作用,可能更多的是在转录后的翻译水平上,因为蛋白是最终执行功能的分子,这可能是电针调整荷瘤动物节律的重要机制之一。

择时电针干预荷乳腺癌C57BL/6J近交系小鼠对SCN钟基因正反馈环路表达的影响

目的：观察荷乳腺癌小鼠电针后其视交叉上核（SuprachiasmaticNucleus，SCN）中Bmall和ClockmRNA水平的变化，探讨电针对荷瘤动物自发性活动节律影响的正反馈环路的调控机制。方法：将C57BL／6J雄性小鼠随机分为空白组、模型组、模型加电针、空白加电针4组（每组6只）。针灸加模型组在造模成功后的第8-10d，于CT16相位（即：动物起始活动点后4h）进行电针治疗。所有的小鼠将在最后一次治疗后2h立即断颈处死，在相应部位取材后RT-PCR对指标进行检测。结果：检测结果显示，空白组的BmallmRNA，ClockmRNA表达要高于模型组，且模型加电针组的BmallmRNA，ClockmRNA表达要高于模型组。虽然上述结果无显著的统计学意义（P〉0．05），仍表现出一个改善的趋势。结论：本研究表明电针对荷乳腺癌小鼠在CTl6时相的治疗可升高SCNBmall以及ClockmRNA的表达使之趋于空白小鼠的表达，表明，电针干预可通过直接调控中枢Bmall以及Clock的表达，从而调节正反馈环路进而影响荷乳腺癌小鼠的自发性节律活动，对肿瘤的增殖有一定的抑制作用。

电针不同穴位对小鼠自发活动节律的影响

目的:探讨不同穴位电针对小鼠自发性活动节律调整的时相特征。方法:将筛选出的28只C57BL/6J雄性小鼠随机分为百会+长强组,肝俞+至阳组,非经非穴组,空白组4组,每组7只。小鼠先光-暗控制(L∶D为12∶12,即0100-1300光照,1300-0100暗置)14 d,使动物的转轮活动与外界的光-暗周期同步,光暗驯化14 d后关闭光源转为恒定黑暗(Dark-Dark,DD),使小鼠处于自由运行状态(Free-Running,FR)。小鼠暗置条件驯化10天后开始电针。小鼠均在CT16时间点电针,频率2/15Hz,电流0.5 m A,15 min/次,电针1次/d,连续电针7 d,空白组小鼠在相同时间点CT16捆绑固定,不予电针刺激。结果:电针后各组小鼠相位均超前,百会+长强组,肝俞+至阳组峰相位超前具有统计学意义(P<0.05),非经非穴组,空白组峰相位移动不具有统计学意义(P>0.05);电针后各组活动度均降低,与针刺前比较均具有统计学差异(P<0.05)。百会+长强组电针后起始活动时间提前,具有统计学意义(P<0.05),其余各组起始活动时间无统计学意义(P>0.05)。电针干预后,各组小鼠峰值均降低,但无统计学意义(P>0.05)。电针后各组小鼠振幅均降低,但无统计学意义(P>0.05)。干预后,各组小鼠周期均延长,但无统计学意义(P>0.05)。结论:暗置条件下小鼠自发性活动仍具有明显的昼夜节律性,电针对自由运行状态下小鼠近日节律有一定影响,其时相特征表现为:峰相位、起始活动时间超前,活动度、峰值、振幅降低,周期延长。百会+长强组能显著提前小鼠峰相位、起始活动时间,降低小鼠活动度;电针肝俞+至阳能使小鼠峰相位提前,降低活动度。

电针、埋线调整吗啡成瘾C57BL/6J小鼠昼夜节律的变化研究

目的:观察电针、埋线对吗啡成瘾C57BL/6J小鼠昼夜节律的调整作用。方法:选用C57BL/6J小鼠42只,随机分为4组,分别为空白组、模型组、电针组、埋线组。运用"7 d递增成瘾法"进行造模,造模成功后空白组不造模不电针,模型组只造模不电针,电针组造模并电针,埋线组造模并埋线。第7 d运用纳洛酮催瘾,并密切观察其戒断症状评分以及各组小鼠的昼夜节律变化。结果:戒断评分:空白组无异常(P>0.05),电针组、模型组和埋线组出现戒断症状(P<0.05)。体重:空白组小鼠体重无变化(P>0.05),模型组、电针组、埋线组小鼠体重有明显下降(P<0.05)。昼夜节律:实验前各组小鼠昼夜节律与实验前相比无异常(P>0.05);实验开始后,空白组小鼠无变化;模型组小鼠有明显改变,表现在振幅和活动度与空白组和模型组相比具有明显差异(P<0.05);电针后小鼠振幅和活动度与空白组和模型组相比均有明显改变(P<0.05);埋线后,振幅与空白组和模型组相比均有统计学意义(P<0.05);电针与埋线组相比,其差异无统计学意义;实验前后各组的周期的变化均无统计学意义(P>0.05)。结论:电针、埋线均可缓解小鼠戒断症状的严重程度,降低戒断评分,减轻吗啡成瘾小鼠体重下降的趋势;电针埋线均可明显改善吗啡成瘾小鼠昼夜节律的紊乱。

电针对荷乳腺癌小鼠肿瘤组织中雌激素和孕激素受体表达的影响

目的:观察电针"百会"、"长强"穴位对荷乳腺癌小鼠肿瘤组织内雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)表达的影响。方法:将MA-782小鼠乳腺癌细胞株接种于小鼠左侧腋下制作荷瘤小鼠模型,造模成功后将荷瘤小鼠随机分为模型组和电针组。电针治疗结束后采用免疫组织化学法检测荷乳腺癌小鼠肿瘤组织中雌激素和孕激素受体表达。结果:电针组8个样本中,ER样性表达8个,阳性表达率100%,PR阳性表达7个,阳性表达率87.5%;模型组8个样本中,ER样性表达0个,阳性表达率0%,PR阳性表达2个,阳性表达率25.0%,电针组乳腺癌小鼠ER、PR的阳性表达率明显高于非电针组。结论:ER、PR表达与肿瘤的恶性程度有关,研究结果提示电针对乳腺癌小鼠的ER、PR具有促进的作用,这可能是电针治疗对乳腺癌的预后起到积极的作用的原因之一。

电针、埋线调整吗啡成瘾小鼠SCN内Per基因表达的研究

目的:探讨电针、埋线对吗啡成瘾小鼠大脑视交叉上核(suprachiasmatic nucleus,SCN)内生物钟基因Per1、Per2表达的影响。方法:筛选雄性C57BL/6J近交系小鼠42只,随机分为空白组(n=14)、模型组(n=14)、电针组(n=7)、埋线组(n=7)。动物模型根据"7 d递增成瘾法"皮下注射盐酸吗啡注射液。第7天取小鼠SCN,采用实时荧光定量PCR法检测Per1、Per2基因的表达水平。结果:与空白组小鼠比较,模型组小鼠SCN内Per1、Per2基因表达均下调,差异具有统计学意义(P<0.05);与模型组小鼠比较,电针组Per2基因表达明显上调(P<0.05),埋线组Per1基因表达明显上调(P<0.05);电针组与埋线组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:埋线和电针可以分别调节Per1、Per2基因的表达,从而改善吗啡成瘾小鼠紊乱的节律。

针刺对癌因性疲劳干预疗效及机制研究

癌因性疲劳是临床癌症病人最常见的症状之一,具有区别于其他疲劳的临床特征,目前癌因性疲劳的治疗方法主要为药物治疗和非药物治疗。鉴于药物治疗的副作用较大,所以针灸替代治疗已经成为治疗癌因性疲劳的新方向,临床上有大量研究报道针刺对癌因性疲劳治疗的优势。但是目前关于针刺治疗癌因性疲劳的机制研究仍具有局限性。

不同浓度H22肝癌细胞株对C57BL/6J小鼠原位肝癌造模差异的影响

目的:使用H22肝癌细胞株建立C57BL/6J小鼠原位肝癌模型,比较不同浓度H22肝癌细胞悬液对C57BL/6J小鼠原位肝癌造模成瘤率、肿瘤病理学特征及其体重变化情况的影响。方法:将66只C57BL/6J小鼠随机分为4个组,分别对应1×10~6、1×10~8、1×10^(10)、1×10^(12)4个细胞浓度。在无菌条件下,将不同浓度的H22肝癌细胞悬液注入60只C57BL/6J小鼠的肝左叶。从注射之日起,连续21 d测量小鼠体重,于第21 d时脱颈椎处死,测肝脏的重量,并行肝脏外观及病理组织学观察。结果:1×10~6、1×10^(10)、1×10^(12)组成瘤率40%(6/15),1×10~8组为27%(4/15)。病理检查证实为肝细胞性肝癌。结论:不同浓度H22肝癌细胞株对成瘤影响差异不明显,造模中可根据实际情况自行选择。