毒害艾美耳球虫第二代裂殖子cDNA文库的构建

本文采用Trizol试剂提取毒害艾美耳球虫第二代裂殖子总RNA,用oliogo（d T）磁珠法纯化m RNA后,采用SMART技术构建了毒害艾美耳球虫第二代裂殖子cDNA噬菌体表达文库。经鉴定,原始文库容量为2.14×106pfu/m L,扩增后的文库容量为4.47×1010pfu/m L,扩增文库的重组率为90%。随机挑取100个单克隆,通过菌液PCR检测得知文库插入片段长度以400～1000 bp为主。本研究结果为毒害艾美耳球虫新基因的筛选和功能研究奠定了基础。

江苏省宿迁地区猫弓形虫流行病学调查和分析

为了解江苏省宿迁地区猫弓形虫病的感染情况,分别采用粪便检查、PCR组织检测及IHA血清检测等方法对该地区家养猫和流浪猫开展弓形虫流行病学调查。粪检结果未发现弓形虫卵囊,但显示该地区猫感染主要肠道寄生虫是猫弓首蛔虫及等孢球虫;采用PCR及IHA方法检测发现,猫弓形虫病平均感染率分别为22.64%和35.85%;2种方法弓形虫阳性符合率为52.63%(10/19),阴性符合率达94.12%(32/34)。调查表明,宿迁地区猫弓形虫感染较为广泛,相比家养猫,流浪猫弓形虫感染率更高,但2种方法检测流浪猫与家养猫弓形虫感染率差异均无统计学意义(P>0.05)。

大量制备毒害艾美耳球虫配子体方法的研究

鸡经嗉囊接种毒害艾美耳球虫孢子化卵囊148 h后,从鸡小肠中段分离成熟的第二代裂殖子;经外科手术方法,将第二代裂殖子直接注入鸡盲肠内,使第二代裂殖子同步发育至配子体;手术后30 h剖检鸡,刮取盲肠黏膜,随后依次通过透明质酸酶消化、滤膜过滤、红细胞裂解、Percoll密度梯度离心等步骤,分离、纯化毒害艾美耳球虫配子体。结果显示,通过本方法分离、纯化的配子体纯度高、数量多,可用于基因转录组学、蛋白质组学、免疫学和疫苗等方面的研究。