A型流感病毒株A/Henan/703/2001(H3N2)核蛋白部分序列的原核表达

目的构建A型流感病毒核蛋白(NP)基因部分序列的原核表达质粒,并诱导表达谷胱甘肽巯基转移酶融合蛋白。方法采用PCR方法扩增NP基因部分序列,并定向插入原核表达载体pGEX-4T-1中,转化大肠杆菌BL21,将阳性菌落经IPTG诱导目的基因融合蛋白的表达。结果扩增到NP基因部分序列,构建成重组表达质粒pGEX-SNP,并在大肠杆菌中进行了表达。结论成功构建A型流感病毒NP部分基因序列的原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达了目的基因融合蛋白。

人食管癌中血管内皮生长因子受体3的表达及其临床意义

目的探讨血管内皮生长因子受体3(VEGFR-3)在人食管鳞癌中的表达及其在淋巴管生成和淋巴结转移中的临床意义。方法对59例食管鳞癌手术标本组织采用免疫组化SP法,检测VEGFR-3的表达及定位特征,并应用图像分析方法测定VEGFR-3表达的淋巴管数量,及其与淋巴结转移的关系。结果VEGFR-3表达与肿瘤淋巴结转移密切相关(P<0.05),癌组织和癌周组织VEGFR-3阳性淋巴管密度和积分光密度也与淋巴结转移密切相关(P<0.01)。结论VEGFR-3与淋巴结转移、新生淋巴管的形成有相关性,为肿瘤细胞淋巴道转移提供了条件。

人CD154基因绿色荧光真核表达载体的构建

目的构建携人CD154基因的重组真核绿色荧光蛋白表达载体pEGFP N3-CD154。方法体外PHA激活人外周血单个核细胞,提取总RNA,用RT-PCR技术扩增人CD154 cDNA全长开放阅读框序列,T-A克隆至pGEM_TEasy载体,再定向克隆至增强型绿色荧光蛋白载体pEGFP-N3,重组质粒pEGFP_N3_CD154用限制性内切酶酶切鉴定,通用鉴定引物PCR扩增鉴定,并进行DNA序列分析。结果多种鉴定方法证实了重组载体中的CD154基因序列与已知的序列一致。结论成功构建了携带人CD154基因的重组的增强型绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-N3-CD154,为进一步研究人CD154基因转染细胞在肿瘤免疫治疗中的生物学意义提供初步的实验基础。