小鼠MIP1-α重组腺病毒载体的构建及其在肝癌细胞中的表达

目的 :构建小鼠趋化因子 MIP1-α(m MIP1-α)的重组腺病毒载体并在小鼠肝癌细胞中表达 ,为肝癌基因治疗提供实验基础。 方法 :PCR扩增含有 m MIP1-α的质粒 ,将腺病毒骨架质粒 p Ad Easy- 1以及线性化的重组穿梭质粒 p Track- CMV-m MIP1-α共转化 BJ5 183受体菌并在其中发生同源重组 ,利用重组前后抗性的改变筛选出重组子 ,重组腺病毒质粒经过 2 93细胞的包装、扩增和纯化后 ,感染小鼠肝癌细胞株 Hepa1- 6 ,一步法提取细胞总 RNA,RT- PCR检测 m MIP1-α的 m RNA。琼脂糖凝胶打孔法体外观察感染上清中 m MIP1-α对小鼠脾细胞的趋化活性。 结果 :得到了携带 m MIP1-α的重组腺病毒 ,纯化后滴度为 4× 10 1 1 efu/ ml,在感染后的 Hepa1- 6细胞中检测到 m MIP1-α的表达 ,上清中 m MIP1-α的趋化指数为 6 .3。结论 :成功地构建了携带 m MIP1-α的重组腺病毒载体 ,为下一步应用于肝癌的基因治疗提供了基础。

茶多酚影响同型半胱氨酸对内皮细胞的作用

目的:探讨茶多酚能否减弱同型半胱氨酸(HCY)对内皮细胞(EC)的损伤作用。方法:体外培养牛主动脉内皮细胞,随机分为5组,正常对照组,用含20%小牛血清DMEM培养液培养;0.25 mmol/L HCY组,培养液中加入HCY使其终浓度为0.25 mmol/L;1 mg/L茶多酚 +0.25 mmol/L HCY组;2 mg/L茶多酚 +0.25 mmol/L HCY组;4 mg/L茶多酚 +0.25 mmol/L HCY组。培养72h后,用流式细胞仪检测细胞周期,观察细胞生长情况,同时检测培养液中的一氧化氮(NO)、 一氧化氮合酶(NOS)、内皮素(ET)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)浓度或活性。结果:浓度为1、2、4、8 mg/L茶多酚组与HCY组相比,(1)细胞形态规则性增强,立体感增加,细胞内颗粒减少;(2)细胞周期检测提示茶多酚组细胞S期比例增多;(3)功能实验提示,茶多酚组EC释放的血管舒张因子NO浓度较HCY组高;而血管收缩因子ET低;(4)MDA含量和GS H-Px活性无明显改变。结论:茶多酚有抑制HCY对EC的损伤作用。

DNA去甲基化对肝细胞人端粒酶逆转录酶上调的研究

目的:观察肝细胞系L02及肝癌细胞系SMMC-7721中人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)的表达与DNA甲基化修饰之间的相关性,观察5-杂氮胞苷(5'-aza-dC)去甲基化对肝细胞系hTERT表达和端粒酶活性的影响。方法:应用甲基化特异性PCR(Methylation-specific PCR,MSP)分析肝细胞系L02和肝癌细胞SMMC-7721中hTERT的甲基化状态,采用RT-PCR和TRAP-ELISA法检测5'-aza-dC干预对培养细胞hTERT mRNA表达及端粒酶活性的影响。结果:肝细胞系L02中hTERT有甲基化修饰,5'-aza-dC去甲基化处理上调hTERT mRNA表达并呈现端粒酶活性升高;肝癌细胞系SMMC-7721中hTERT则没有甲基化修饰,5'-aza-dC去甲基化处理对其hTERT表达和端粒酶活性无影响。结论:肝细胞中DNA甲基化可能参与抑制肝细胞hTERT的表达,hTERT去甲基化可能是肝癌发生发展的重要机制之一。

肝细胞癌端粒酶活性及hTERT mRNA表达与术后早期复发的关系

目的研究肝细胞癌端粒酶活性及人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA表达与肝细胞癌术后早期复发的关系。方法采用ELISA-TRAP法检测60例肝癌组织及其癌旁组织端粒酶活性,RT-PCR法检测hTERT mRNA表达,5例正常肝脏组织作为对照。分析端粒酶活性及hTERT mRNA表达与临床病理之间的关系。结果肝癌组织端粒酶活性及hTERTmRNA表达阳性率分别为86.7%(52/60)及90%(54/60),癌旁组织端粒酶活性及hTERT mRNA表达阳性率分别为40%(24/60)及43.3%(26/60)。正常肝脏组织均未检测到端粒酶活性及hTERT mRNA表达。癌旁组织端粒酶活性及hTERTmRNA表达与术后早期复发及包膜浸润、门静脉侵犯、肝内转移等恶性肿瘤的恶性生物学行为有关。结论癌旁组织端粒酶活性及hTERT mRNA表达可能是肝细胞癌术后早期复发的预后指标。

原发性肝癌细针活检端粒酶活性检测的临床意义

目的:探讨原发性肝癌(HCC)经皮肝穿刺细针活检端粒酶活性检测的临床意义。方法:25例直径1.2～3cm的HCC进行了无水酒精注射治疗(PEIT)。PEIT治疗前及PEIT治疗后1周在B超引导下经皮肝穿刺细针活检,所得微量肝癌组织采用非放射性同位素银染端粒重复序列扩增法(TRAP)行端粒酶活性检测及病理学检查。3例正常肝脏组织及5例肝硬变组织作为对照研究。结果:PEIT治疗前,病理学检查诊断率为80%(20/25),端粒酶活性阳性率为84%(21/25);PEIT治疗后1周,病理学检查未发现肿瘤细胞,3例端粒酶活性阳性(12%),其中1例经手术治疗后临床治愈,2例未手术治疗者1年内复发。其余22例端粒酶转阴的患者1年内未复发。3例正常肝脏组织及5例肝硬变组织端粒酶活性检测均阴性。结论:经皮肝穿刺活检微量肝脏组织端粒酶活性检测可应用于小肝癌的辅助诊断,在原发性肝癌PEIT治疗的疗效评价及预后判断方面具有一定的应用价值。

端粒酶活性及hTERT mRNA表达在鉴别肝脏良恶性病变中的意义

目的:研究端粒酶活性及人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA表达在鉴别肝脏良、恶性病变中的意义。方法:采用ELISA-TRAP法检测了130份外科切除肝脏样本及58个肝脏可疑结节的端粒酶活性,RT-PCR法检测hTERTmRNA表达。所有样本均经病理学证实。结果:外科切除的肝细胞癌、肝硬变及慢性肝炎组织端粒酶阳性率分别为85.9%(55/64)、25.0%(8/32)及8.3%(2/24),hTERTmRNA阳性率分别为89.1%(57/64)、25.0%(8/32)及8.3%(2/24),10份正常肝脏组织端粒酶及hTERTmRNA表达阴性。经皮肝穿刺活检的肝细胞癌、胆管细胞癌、局灶性结节性增生、炎性假瘤及腺瘤样增生组织的端粒酶阳性率分别为85.7%(30/35)、100%(4/4)、33.3%(4/12)、25.0%(1/4)及33.3%(1/3),hTERTmRNA阳性率分别为88.6%(31/35)、100%(4/4)、33.3%(4/12)、25.0%(1/4)及33.3%(1/3)。肝脏恶性肿瘤端粒酶及hTERTmRNA阳性率明显高于肝脏良性病变(P<0.01)。结论:经皮肝穿刺活检端粒酶活性及hTERTmRNA检测有助于肝脏良、恶性病变的鉴别诊断。

银染端粒重复序列扩增法检测肝癌模拟肝穿组织端粒酶活性的研究

目的:探讨细针穿刺肝活检组织行端粒酶活性检测用于肝细胞癌(HCC)诊断的可行性。方法:HCC共28例,每例HCC肿瘤切除后立即行肝肿瘤模拟细针穿刺。应用非放射性同位素银染的端粒重复序列扩增法(TRAP),分别对28例模拟肝穿组织和28例肿瘤切取组织行端粒酶活性检测。结果:模拟肝穿组织与肿瘤切取组织的端粒酶检测结果完全一致,阳性率均为82%(23/28)。结论:模拟肝穿组织与肿瘤切取组织在HCC端粒酶活性检测方面具有同等的效果。该结果提示,B超引导下经皮肝穿刺活检行端粒酶活性检测在HCC的诊断、治疗效果评价和预后的判断方面具有一定的应用前景。

缬沙坦对临床糖尿病肾病的治疗作用

①目的 观察缬沙坦对临床糖尿病肾病病人尿蛋白排泄量和肾功能的影响。②方法 3 2例临床糖尿病肾病病人在原抗糖尿病治疗的基础上 ,加用缬沙坦 160mg/d治疗 84d ,治疗前后测定病人的血压 ,2 4h尿中的总蛋白、清蛋白、β2 微球蛋白、IgG ,以及血中的尿素氮、肌酐、β2 微球蛋白、血钾、空腹血糖。③结果 治疗 84d后2 4h尿中的总蛋白、清蛋白、β2 微球蛋白及IgG排泄量明显降低 (t=2 .782～ 2 .889,P <0 .0 1) ;收缩压、舒张压及平均动脉压亦明显降低 (t =2 .14 6～ 2 .2 3 4 ,P <0 .0 5 ) ;但尿蛋白排泄量的降低与平均动脉压的变化无相关性 (r =0 .3 5 2 ,P >0 .0 5 )。④结论 缬沙坦可以降低临床糖尿病肾病病人的尿蛋白排泄量 ,从而产生肾脏保护作用 ,其肾脏保护作用除与降压有关外 。

重组腺病毒介导的FLT3配体和阿霉素联合治疗小鼠肝癌

目的:将重组腺病毒介导的FLT3配体(FLT3 ligand,FL)与阿霉素(adriamycin,ADM)联合治疗小鼠肝癌,探索基因治疗和化疗相结合治疗肿瘤的新方法。方法:构建携带鼠FL的重组腺病毒载体(AdmFL),单独用其或ADM以及两者联用对实验性肝癌小鼠进行治疗,观察抗肿瘤效果。结果:(1)FL+ADM组小鼠肝癌生长抑制率最大值为56.5％,明显高于ADM组和FL组的27.5％和26.6％(P<0.01);(2)FL+ADM组小鼠早期死亡率为8.3％,明显低于ADM组的37.5％(P<0.01);FL十ADM组小鼠长期生存率为86.4％,明显高于ADM组和FL组的50.0％和41.5％(P<0.01)。结论:(1)FL和ADM治疗小鼠肝癌具有协同作用,FL可显著增强化疗效果;(2)FL能明显降低化疗不良反应。

中西医结合治疗慢性肾功能衰竭28例

中西医结合治疗慢性肾功能衰竭２８例泰安市中心医院（２７１０００）董兴刚，李芳，刘守奎，贾凤岐，苏殿礼上海医科大学中山医院（２０００３２）宿燕刚关键词慢性肾功能衰竭，中药灌肠，中西医结合疗法１临床资料在２８例慢性肾功能衰竭（ＣＲＦ）患者中，男１９例，女...

缬沙坦对早期糖尿病肾病的治疗作用探讨

目的 探讨血管紧张素ⅡⅠ型受体拮抗剂 (AT1Ra)缬沙坦 (Valsartan)对伴微量白蛋白尿的早期糖尿病肾病的治疗作用。方法 6 4例Ⅱ型糖尿病患者 (2 4h尿蛋白排泄率 2 0～ 2 0 0 μg/min)在原抗糖尿病的基础上 ,随机分为四组 ,一组为正常对照 (16例 ) ,其余三组分别给予缬沙坦 80mg/d(16例 )、缬沙坦 16 0mg/d(16例 ) ;依那普利2 0mg/d(16例 )。观察 12周后平均动脉压 (MAP)、2 4hUAER、HbA1c及Ccr等指标的变化。结果 12周后 ,MAP、2 4hUAER均有明显变化 (P <0 0 5 ) ,但尿微量白蛋白排泄率的下降与血压下降无显著相关性 (r =0 36 5 )。结论 缬沙坦可以降低早期糖尿病肾病的蛋白尿 ,对早期糖尿病肾病具有肾脏保护作用 。

我国私营经济政策的演变及创新建议

新中国成立后 ,我国关于私营经济的方针政策经历了一个特殊的历程。在追寻私营经济政策在建国初期 ,改革开放后两大时期的政策演变轨迹的基础上 ,提出完善市场准入政策 ,优化私营经济结构 ,完善社会化援助改策和权益保护政策 ,优化私营经济的发展环境 。

浅议贫困地区农业产业化经营中存在的问题及对策

农业产业化经营是实现农业可持续发展和农业增效、农民增收的有效途径。目前 ,贫困地区农业产业化经营中主要存在着劳动者的素质较低、市场发育缓慢、资金短缺等问题。为此 ,贫困地区在推进农业产业化经营进程中 ,要健全农产品市场体系、加快土地制度的改革、建立多元投资机制 ,并要积极探索新的农业教育形式 。

Inhibiting effect of antisense hTRT on telomerase activity of human liver cancer cell line SMMC-7721

Objective: To induce changes in biological character of human liver cancer cell line SMMC-7721 by blocking the expression of telomerase genes hTRT and to explore its value in cancer gene therapy. Methods: The vehicle for eukaryotic expression of antisense hTRT was constructed and then transfected into SMMC-7721 cells. The effects of antisense hTRT gene on telomerase activity, cancer cell growth and malignant phenotypes were analyzed. Results: The obtained transfectants that could express antisense hTRT gene stably showed marked decrease in telomerase activity; the shortening of telomere was obvious; cells presented contact growth inhibition; in nude mice transplantation, the rate of tumor induction dramatically decreased. Conclusion: Antisense hTRT gene expression can significantly inhibit telomerase activity of cancer cells and decrease malignant phenotypes in vitro and in vivo. Therefore, as a telomerase inhibitor, antisense hTRT gene may be a new pathway for cancer therapy.

BIM技术在建筑工程施工组织与管理中的应用

建筑业是国民经济的支柱产业,数字科技是当下国家在建筑业转型发展中推广科技进步的重要导向之一,这意味着建筑工程管 理者面临的挑战日益增加。BIM 技术在国内建筑行业的应用范围越来越广,对建筑工程项目精细化管理的发展具有显著的推动作用,是未 来数字建筑的发展趋势。施工企业应用 BIM 技术可以增强行业竞争力,同时优化施工过程控制与管理,为建造优良工程提供一大助力。文 本主要分析 BIM 技术在建筑工程施工组织与管理中的应用。

腺病毒介导的小鼠Flt3配体抗肝癌基因治疗的研究

目的 观察腺病毒载体介导的小鼠Flt3配体 (mFL)对小鼠肝癌的基因治疗效果。方法 腺病毒体外感染小鼠肝癌细胞株Hepa1 6 ,4 8h后 ,用绿色荧光蛋白的表达检测感染的效率 ,ELISA检测培养上清中mFL的表达量 ,每天细胞计数 (连续 14d)观察细胞的生长曲线。建立小鼠肝癌模型 ,肿瘤局部分别单次注射 1× 10 9表达形成单位的mFL重组腺病毒、空载体对照和PBS ,观察肿瘤大小和小鼠生存期。治疗 2 0d后 ,取肿瘤消退小鼠的脾细胞过继至正常小鼠 ,3d后接种Hepa1 6细胞 ,观察肿瘤大小 ;治疗 38d后 ,再接种Hepa1 6细胞或EL4细胞对照于肿瘤消退小鼠原接种部位的对侧 ,观察肿瘤大小并作统计学处理。结果 腺病毒体外能有效地感染靶细胞Hepa1 6 ,培养上清中mFL表达量为 80 .5ng·10 -6·2 4h-1± 7.3ng·10 -6·2 4h-1,感染后Hepa1 6的生长未受到明显抑制。瘤体内注射mFL重组腺病毒导致 90 %的小鼠肿瘤消退 ,并显著延长小鼠生存期 ;脾细胞过继能保护正常小鼠免于Hepa1 6细胞的攻击 ;再接种Hepa1 6细胞于肿瘤消退小鼠 ,未见肿瘤生长 ,而再接种的EL4细胞呈渐进性生长 ,与对照组无显著差异。结论 腺病毒介导的小鼠Flt3配体的基因治疗导致肿瘤消退 ,并能激发可过继的、特异性免疫保护反应 ,可能成为有效的肝癌基因治疗的候?

巨噬细胞炎症蛋白-1α对小鼠肝癌的基因治疗

目的 观察重组腺病毒载体介导的小鼠巨噬细胞炎症蛋白 1α(MIP 1α)对小鼠肝癌的基因治疗效果。方法 携带小鼠MIP 1α基因的腺病毒载体 (AdmMIP 1α)体外感染小鼠肝癌细胞株Hepa1 6 。 48h后 ,用载体自身报告基因表达的绿色荧光蛋白检测感染效率 ;RT PCR法检测感染后细胞内MIP 1α的表达 ;每天计数细胞 ,观察细胞的体外生长曲线。皮下接种Hepa1 6细胞建立小鼠肝癌模型 ,肿瘤局部分别单次注射 1× 10 9cfu的AdmMIP 1α、空载体对照 (Ad empty)和PBS ,观察肿瘤大小和小鼠生存期。结果 腺病毒载体AdmMIP 1α体外能有效地感染靶细胞Hepa1 6 ,并在感染后的细胞内检测到mMIP 1α的mRNA ,体外感染对Hepa1 6的生长曲线无显著影响。瘤体内单次注射AdmMIP 1α导致 4/ 9只小鼠肿瘤完全消退 ,并延长小鼠生存期 ,与对照组比较 ,差异有显著性 (P <0 .0 0 1)。结论 腺病毒介导的MIP 1α基因治疗对小鼠肝癌有一定的效果 。