阿帕替尼通过下调STC2表达抑制肝癌细胞的紫杉醇耐药性

目的探究阿帕替尼调节斯钙素2(STC2)表达对肝癌细胞紫杉醇耐药性的影响。方法通过逐步增加紫杉醇浓度持续诱导正常肝癌细胞BEL-7402以构建肝癌紫杉醇耐药细胞株BEL-7402/PTX;CCK-8法检测不同浓度的阿帕替尼(0,0.5,1,2,4,8,16μmol/L)干预BEL-7402/PTX细胞的存活率。将BEL-7402/PTX细胞分为对照组(正常培养)、8μmol/L阿帕替尼组、16μmol/L阿帕替尼组、pcDNA组和pcDNA-STC2组,对照组细胞正常培养,8μmol/L阿帕替尼组和16μmol/L阿帕替尼组细胞分别使用8μmol/L和16μmol/L阿帕替尼干预细胞48 h,pcDNA组和pcDNA-STC2组组细胞分别转染pcDNA和pcDNA-STC2后使用16μmol/L阿帕替尼干预细胞48 h。CCK-8法检测各组BEL-7402/PTX细胞存活率,qRT-PCR检测细胞STC2的表达,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Transwell检测细胞侵袭,Western blot检测P-糖蛋白(P-gp)、血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、波形蛋白(vimentin)和E-钙黏附素(E-cadherin)蛋白表达。结果在相同的紫杉醇浓度下,BEL-7402/PTX细胞存活率明显高于BEL-7402细胞(P<0.05),表明成功构建紫杉醇耐药BEL-7402细胞株。不同浓度的阿帕替尼处理BEL-7402/PTX细胞,细胞存活率均显著降低(P<0.05),IC_(50)为(10.76±0.88)μmol/L,因此后续使用8μmol/L和16μmol/L阿帕替尼浓度进行实验。与对照组相比,8μmol/L和16μmol/L阿帕替尼组BEL-7402/PTX细胞存活率、STC2表达、侵袭个数以及P-gp、VEGF-2、MRP1、Bcl-2、vimentin蛋白表达明显下降,凋亡率和E-cadherin表达明显上升(P<0.05)。与16μmol/L阿帕替尼组和pcDNA组相比,pcDNA-STC2组BEL-7402/PTX细胞存活率、STC2表达、侵袭个数以及P-gp、VEGFR-2、MRP1、Bcl-2、vimentin表达明显升高,凋亡率和E-cadherin表达明显下降(P<0.05)。结论阿帕替尼可通过抑制STC2表达减弱肝癌细胞紫杉醇耐药性。

缺氧诱导的miRNA-210靶向HIF-1α促进胃癌发展机制研究

目的研究低氧条件下微小RNA-210(miRNA-210)靶向低氧诱导因子1α(HIF-1α)对人胃癌细胞系SGC-7901的影响,并探讨其机制。方法体外培养人胃癌细胞系SGC-7901,分别经0、100、150、200、300μmol/L氯化钴(CoCl2)作用3 h后,继续培养48 h,CCK-8法检测细胞增殖情况,Transwell实验检测细胞迁移能力;培养密度至80%~90%时,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测肺组织中miR-210水平变化,蛋白免疫印记(WB)检测HIF-1α、增殖细胞核抗原(PCNA)、胰岛素样生长因子ⅡmRNA结合蛋白3(IMP3)、β-连环蛋白(β-catenin)蛋白变化情况。200μmol/L CoCl2条件下转染antagomic miR-210,WB检测HIF-1α蛋白变化情况。结果与0μmol/L CoCl2组比较,100μmol/L CoCl2组OD450、迁移细胞数量、miR-210、PCNA、β-catenin表达升高(P<0.05),150、200、300μmol/L CoCl2组OD450、迁移细胞数量、miR-210、HIF-1α、PCNA、IMP3、β-catenin表达升高(P<0.05)。与100μmol/L CoCl2组比较,150μmol/L CoCl2组OD450、迁移细胞数量、miR-210、HIF-1α、IMP3、β-catenin表达升高(P<0.05),200、300μmol/L CoCl2组OD450、迁移细胞数量、miR-210、HIF-1α、PCNA、IMP3、β-catenin表达升高(P<0.05)。与150μmol/L CoCl2组比较,200μmol/L CoCl2组OD450、迁移细胞数量、miR-210、HIF-1α、PCNA、IMP3表达升高(P<0.05),300μmol/L CoCl2组OD450、迁移细胞数量、miR-210、HIF-1α、PCNA、IMP3、β-catenin表达升高(P<0.05)。与200μmol/L CoCl2组比较,300μmol/L CoCl2组OD450、miR-210、β-catenin表达升高(P<0.05)。Targetscan预测结果显示,HIF-1α基因3’UTR区与miR-210有结合位点,低氧条件下,200μmol/L CoCl2组和200μmol/L CoCl2+antagomic NC组差异无统计学意义(P>0.05),200μmol/L CoCl2+antagomic组细胞中HIF-1α表达水平降低(P<0.05)。结论缺氧诱导miR-210、HIF-1α上调表达,促进人胃癌细胞系SGC-7901细胞的增殖和迁移。

TIPS治疗对肝硬化门脉高压症患者血清MMP-2、MMP-9和VEGF水平的影响

目的 探讨经颈静脉肝内门体静脉分流术(TIPS)治疗对肝硬化门脉高压症患者血清基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9和血管内皮生长因子(VEGF)水平的影响及意义。方法 将2016年1月-2017年5月在青海仁济医院普外科接受TIPS治疗的60例肝硬化门脉高压患者作为研究对象,评估术后疗效并记录术后并发症,观察术后肝功能指标[总胆红素(TBil)、ALT、AST、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)]变化,血流动力学指标[门静脉直径(PVD),门静脉血流量(PVF),门静脉流速(PVV),脾静脉直径(SVD)、脾静脉血流量(SVF)和脾静脉血流速度(SVV)]变化,血清MMP-2、MMP-9和VEGF水平。结果 59例患者TIPS手术获得成功,手术成功率98.33%(59/60),手术总有效率93.33%(56/60);术后门静脉压力(18.91±4.33)cmH2O较术前[(32.54±6.17)cmH2O]明显降低(P<0.05);术后1周患者TBil、ALT、AST、γ-GT水平均较术前明显升高(P<0.05);术后3个月患者TBil、ALT、AST、γ-GT水平较术后1周明显降低(P<0.05),与术前比较差异无统计学意义(P>0.05);术后3个月患者PVD、PVF、SVD、SVF较术前明显降低(P<0.05),PVV和SVV较术前明显升高(P<0.05);术后3个月患者血清MMP-2、MMP-9和VEGF水平较术前明显下降(P<0.05);术后1年支架狭窄发生率21.67%(13/60),肝性脑病发生率18.33%(11/60),消化道再出血发生率15.00%(9/60)。结论 TIPS治疗能够降低肝硬化门脉高压患者血清MMP-2、MMP-9和VEGF水平,可能对肝内及门体侧支循环血管生成起抑制作用。

手术治疗小儿腹股沟疝1600例临床分析

目的:通过对1 600例小儿疝气的疗效探讨,进一步提高我省小儿疝气的治疗水平,减少并发症。方法:对我院自2010年5月—2011年11月收治的1 600例小儿腹股沟疝气(李嘉诚疝气项目)均按单病种临床路径管理,统一手术方法。结果:本组所有病例均治愈,平均住院时间4天,无明显并发症和复发。结论:5岁前采用疝囊高位结扎、5岁后高位结扎+加强前壁,疗效可靠。