TLR4通过NF-κB/TGF-β信号通路调节结核分枝杆菌感染巨噬细胞中的免疫反应

目的验证Toll样受体4(TLR4)在核因子-κB(NF-κB)/转化生长因子-β(TGF-β)信号通路调节结核分枝杆菌感染巨噬细胞中的免疫反应和细胞活力,并探究其作用机制。方法体外培养小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7),将所有细胞分为4组:TLR4过表达质粒(OE-TLR4组)、空白质粒(Empty vector组)、TLR4小干扰RNA(si-TLR4组)和对照si-NC(si-NC组)。将TLR4过表达质粒、空白质粒、TLR4小干扰RNA及其相应对照si-NC转染至RAW264.7细胞系中,随后使用结核分枝杆菌H37Rv菌株感染细胞。采用克隆形成实验检测细菌菌落数,CCK-8实验检测细胞活力。采用ELISA方法检测上清液中白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。Western blot检测NF-κB和MAPK信号通路相关蛋白(IκB、p-IκB、SMAD2、p-SMAD2)的表达水平。结果TLR4在结核分枝杆菌H37Rv菌株感染的RAW264.7细胞中表达水平显著高于未感染的细胞。与Empty vector组相比,OE-TLR4组细胞细菌菌落数较多(t=-10.61,P<0.05),细胞活力较低(t=-1.861,P<0.05),IL-6、IL-1β、TNF-α、p-IκB和p-SMAD2表达显著升高(P<0.05),差异均有统计学意义。与si-NC组相比,si-TLR4组细胞细菌菌落数较少(t=-5.425,P<0.05),细胞活力较高(t=-2.250,P<0.05),IL-6、IL-1β、TNF-α、p-IκB和p-SMAD2表达水平显著降低(P<0.05),差异均有统计学意义。结论TLR4促进结核分枝杆菌感染巨噬细胞中的免疫反应和细胞活力,与激活NF-κB和TGF-β信号通路有关。

回顾分析免疫球蛋白和补体联合白细胞水平对重症COVID-19转归的预测价值

目的回顾性分析武汉市第三医院收治的重症新型冠状病毒肺炎(COVID-19)患者血液白细胞计数(WBC)、淋巴细胞计数(LYM)、淋巴细胞%(LYM%)、血清免疫球蛋白(IGA、IGG、IGM)以及补体(C3、C4)等指标水平,探讨其与COVID-19重症患者转归的相关性并评价其预测价值。方法随机筛选武汉市第三医院确诊的85例COVID-19重症患者,分为转归良好组(50例)和转归不良组(35例),统计分析比较两组入院早期的WBC、LYM、LYM%、IGA、IGG、IGM以及C3、C4水平、组间的差异、各指标的相关性、以及单检和联检时的ROC曲线,判断各指标和转归的关系以及对转归的预测效能。结果两组间WBC、LYM、LYM%、IGG、IGA水平差异均有统计学意义(P=0.000,0.015,0.000,0.000,0.001),其中LYM、LYM%呈显著正相关(r=0.669,P=0.000),而WBC与LYM%水平呈显著负相关(r=-0.600,P=0.000),WBC与IGA水平之间呈显著正相关(r=0.283,P=0.009)且IGG与IGA水平亦呈显著正相关(r=0.0.442,P=0.000);Logistic回归分析后,WBC、LYM、LYM%、IGG、IGA均是转归的重要影响因素(P=0.001,0.022,0.000,0.000,0.003);但只有WBC、IGG和LYM%水平是转归不良的独立风险因素(P=0.034,0.004,0.001),对其预测转归效能分别作单检及联检ROC曲线,同时联检WBC、LYM%、IGG时AUC最大(AUC=0.890,P=0.000),约登指数YI=0.657时,对于不良转归有最大的预测效能,灵敏度为77.10%和特异度为88.00%。其它指标IGM、C3、C4、IGG/IGM、C3/C4水平的差异无统计学意义(P=0.066,0.204,0.076,0.310,0.156)。结论COVID-19重症患者入院早期的WBC、LYM、LYM%、IGG、IGA水平对COVID-19重症肺炎转归有重要预测价值,WBC、LYM%和IGG水平是不良转归的独立风险因子,联检三者对转归预测效能最佳。

武汉市健康体检人群MTHFR C677T基因多态性与血浆同型半胱氨酸水平的关系

目的研究亚甲基四氢叶酸还原酶(methylenetetrahydrofolate reductase, MTHFR)C677T基因多态性的分布,及与血浆同型半胱氨酸(homocysteine, Hcy)水平的相关性。方法采用PCR-芯片杂交法技术检测MTHFR C677T基因多态性,采用酶循环法检测血浆Hcy。根据性别、年龄、地区特征分析C677T基因型和等位基因频率分布特点,并比较C677T基因型与血浆Hcy水平的关系。结果武汉地区1 076名体检人员中,不同性别间C677T基因型分布差异无统计学意义(χ^(2)=2.236,P>0.05);不同年龄人群C677T基因型分布差异无统计学意义(χ^(2)=4.225,P>0.05);与北京、延边、深圳地区比较,武汉地区C677T基因多态性分布差异均有统计学意义(P<0.05);3种不同C677T基因型的血浆Hcy水平差异有统计学意义(χ^(2)=64.824,P<0.01)。结论武汉地区MTHFR C677T基因多态性分布不受性别和年龄的影响,但具有地域特异性,677TT基因型与血浆Hcy的升高密切相关。