松江鲈热休克同源蛋白70(HSC70)的基因克隆与表达分析

采用表达序列标签(EST)和cDNA末端快速扩增技术(RACE)从松江鲈(Trachidermus fasciatus)体内克隆出一个热休克同源蛋白70(即TfHsc70)。其全长2138 bp,理论分子量为71.1 kDa,等电点为5.27,并由一个1947 bp的开放阅读框(ORF)、一个78 bp的5′端未翻译区(UTR)和一个95 bp的3′端带有终止密码子(TAA)的UTR组成。通过与多种鱼类、两栖类和爬行类等动物的热休克同源蛋白70(HSC70)对比发现,其具有88.89%~97.09%的相似性。实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)显示,TfHsc70 mRNA在松江鲈的血液、心脏、肝脏、胃、肠、脾脏、肾脏、大脑、鳃中均有表达,但在皮肤中几乎未检测出。使用脂多糖(LPS)刺激发现,皮肤、血液和肝脏中TfHsc70的表达量在2 h时明显增加,鳃和脾脏中略微上调,而在大脑中呈现先减少再增加的趋势。基于对TfHsc70的蛋白序列以及TfHsc70 mRNA的表达分析,表明TfHsc70是热休克蛋白HSP70家族成员,它可能参与了松江鲈的先天免疫。

生物实验室安全培训与管理探索

参考国内外实验室安全培训与管理方法,该文阐述了当下生物实验室安全培训模式存在的不足,并结合国内外先进培训经验,针对传统培训的弊端,设计出DUSE培训体系。该体系具备科学的培训流程与创新评价机制,可明显提高安全培训的质量。

一种新型无毒的氨氮含量检测方法及其干扰因素探究

测定水体中的氨氮含量是本科生实验教学和科研中常见的实验项目。传统方法如纳氏比色法、吲哚酚蓝(IPB)比色法、水杨酸比色法中学生会接触到有毒、有味或高腐蚀性的物质,且操作过程繁琐,给教学带来潜在的安全风险。根据最近新报道的一种氨氮测定方法,设计教学实验并绘制了标准曲线。结果显示,此方法经30次重复操作,均制得R大于0.99的标准曲线,且各组数据RSD值均小于3%,加标回收率在100.9%~109.5%之间,具有较高的准确度、精密度和可重复性。另外,该方法安全性高、仪器简单、操作步骤简便、显色稳定,可在本科教学和科研中推广。在研究中还发现了该方法的干扰因素为三价铁离子和氨基酸,因此在测量富含这两种物质的水体时要预先将其去除。

仿刺参葡聚糖结合蛋白的重组表达与功能研究

β-1,3-葡聚糖结合蛋白(β-1,3-glucan-binding protein,GBP)是一种模式识别受体(Pattern recognition receptor,PRR),可识别病原微生物从而激活机体免疫应答。基于聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)从已测序的仿刺参(Apostichopus japonicus)转录组中克隆了仿刺参葡聚糖结合蛋白基因(AJ-GBP)。核苷酸序列分析表明,该基因全长660 bp,可编码219个氨基酸,不具有信号肽。AJGBP重组蛋白理论分子质量为24.64 kDa,等电点为5.94,属于糖基水解酶家族16,且在第17位和第193位存在糖基化位点。试验结果表明,该重组蛋白对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌具有凝集、结合和抑制作用;对葡聚糖具有明显结合活性,表明AJ-GBP重组蛋白可能参与了仿刺参的先天免疫反应中,研究为了解仿刺参抵抗病原微生物入侵的机制以及AJ-GBP重组蛋白实际生产利用奠定了理论基础。