细胞周期蛋白G2 mRNA在急性白血病患者中的表达及临床意义

为了探讨急性白血病(AL)患者中细胞周期蛋白G2(cyclin G2)的mRNA表达及其临床意义,采用逆转录 聚合酶链反应(RT-PCR)法检测74例急性白血病患者及10例正常人骨髓细胞中的cyclin G2、G1和P53的mRNA 表达,对cyclin G2的阳性扩增产物进行序列分析。结果表明:①AL患者中cyclin G2的阳性率及mRNA表达水平 (52.7％,0.552±0.498)明显低于正常人(100％,1.953±0.675)(P<0.01)。②在初治的AL患者中,cyclin G2 阳性表达患者的完全缓解(CR)率高于阴性者(分别为69.2％和40％;P<0.05)。③耐药组AL患者cyclin G2的 阳性率(43.6％)明显低于敏感组(68.6％)(P<0.05)。④对初治28例CR的AL患者进行随访14.3个月(11- 18.5个月),11例cyclin G2低表达患者中有10例复发(90.9％),而17例cyclin G2高表达患者中有7例复发 (41.2％),两者之间有显著性差异(P<0.05)。结论:CyclinG2是影响AL患者CR的因素,其高表达可能是AL患 者良好预后的指标之一。

异基因造血干细胞移植过程中患者艰难梭菌感染与肠道微生态失调关系的临床研究

本研究探讨异基因造血干细胞移植(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation,allo-HSCT)过程中患者艰难梭菌相关性腹泻(clostridium difficile associated diarrhea,CDAD)与肠道微生态的关系,了解肠道微生态失衡的临床特征,寻找有效防治措施,保护肠道菌群,减少细菌易位及感染的发生。对44例allo-HSCT后腹泻患者采用艰难梭菌毒素A&B检测试剂盒进行毒素检测,采用厌氧培养方法进行艰难梭菌的分离、鉴定。对患者粪便标本进行肠道微生态研究;采用光冈复合式法对目的菌群(双歧杆菌、乳酸杆菌、类杆菌、消化链球菌、产气荚膜梭菌、肠杆菌、肠球菌、酵母菌)进行定性定量分析。结果表明:44例腹泻患者中共检测出12例艰难梭菌阳性,阳性率为27.27%;CDAD的发生与使用抗生素或化疗药物有关;CDAD患者的肠道微生态发生了明显变化,表现为乳酸杆菌、双歧杆菌、类杆菌、肠杆菌等细菌数量明显下降;对CDAD用万古霉素、甲硝唑等药物并配合给予益生菌治疗效果好,但有一定复发率(16.67%)。结论:allo-HSCT并发CDAD与肠道微生态的改变有关,应用敏感抗生素治疗的同时应积极扶植肠道菌群,这样的治疗有利于改善病情和减少复发。

异基因造血干细胞移植后人类巨细胞病毒pp65的监测及疗效、危险因素分析

本研究探讨异基因造血干细胞移植(alloHSCT)后受者外周血白细胞巨细胞病毒(CMV)pp65抗原阳性细胞数的变化及临床意义。以104例HSCT受者为研究对象,采集移植前后及恢复期受者的抗凝血标本,用CMVpp65单克隆抗体荧光免疫组织化学法检测CMV早期抗原,并进行动态观察。结果表明104例HSCT受者中29例移植后检出CMVpp65抗原阳性,检出率27.88%,其中16例为CMV血症,13例为CMV病。29例经抗病毒治疗后25例抗原转为阴性,有效率86.21%,死亡4例,病死率13.79%。CMV感染患者中,受非血缘或单倍体相合异基因HSCT的患者与受同胞全相合异基因HSCT的患者CMV感染率分别为39.29%和14.58%,两者相比较有显著性差异(P<0.05)。0-Ⅰ度急性GVHD组CMV感染的发生率为19.44%,而Ⅱ-IV度急性GVHD组为46.88%,两者间的差异有显著意义(P<0·05)。CMV抗原阳性与阴性患者的急性GVHD发生率有显著性差异(P<0·05)。结论外周血白细胞CMVpp65病毒抗原检测可作为造血干细胞移植后CMV病的监测指标,用于指导移植后抗病毒的治疗和疗效评价。

小鼠白血病Cyclin G和其它相关蛋白表达及凋亡研究

目的 :探讨在白血病细胞中细胞周期素zCyclin)G、CyclinD、P16、P2 1、P5 3等基因的蛋白表达水平和白血病细胞周期变化。方法 :建立白血病模型 (L615 ) ;采用免疫组织化学法检测小鼠的CyclinG、P5 3、P2 1、Cy clinD、P16和C fos、bcl 2的表达 ;流式细胞术检测小鼠白血病细胞的凋亡率和细胞周期。结果 :阳性组和复发组的CyclinG、CyclinD、C fos表达明显高于正常组和化疗组 ( P <0 .0 5 ) ,P16则相反 (P <0 .0 1) ;P2 1在四组中的表达差异无显著性意义 (P >0 .0 5 ) ;阳性组和复发组P5 3的表达为阴性 ,而化疗组与正常组表达差异无显著性意义 (P >0 .0 5 ) ;bcl 2四组表达差异无显著性意义 (P >0 .0 5 ) ;化疗组和阳性组的细胞凋亡率均较正常组增高(P <0 .0 5 ) ,且化疗组的凋亡率比阳性组的明显增高 (P <0 .0 1)。结论 :白血病的发生、发展可能与CyclinG、CyclinD、C fos基因的高表达 。

周期蛋白G1反义硫代脱氧寡核苷酸对白血病细胞增殖的调控

为了探讨脂质体转染细胞周期蛋白 (cyclin)G1反义脱氧寡核苷酸 (ASON)对HL 6 0细胞增殖调控的作用 ,用针对cyclinG1mRNA 5′端编码区起始密码子 (ATG/AUG)的ASON ,通过脂质体导入HL 6 0细胞共培养后 ,用免疫组织化学法和RT PCR分别检测cyclinG1和mRNA水平的表达 ,用电镜、细胞原位凋亡检测法 (POD)、流式细胞术(FCM)及DNA凝胶电泳等方法检测细胞凋亡。结果表明 :cyclinG1ASON组与SON及空白对照组相比 ,ASON能特异地抑制cyclinG1及mRNA水平的表达 ,当ASON的浓度达到一定程度时 ,HL 6 0细胞的增殖及集落形成率均明显受抑制 ,出现细胞凋亡 ,并且此作用随ASON浓度的升高而增强。结论 :cyclinG1的特异反义脱氧寡核苷酸能封闭其蛋白及mRNA水平的表达 ,对白血病细胞的增殖有抑制作用 ,并可促使细胞凋亡 ,且有浓度依赖性。

细胞周期蛋白A1 mRNA在骨髓增生异常综合症中的表达及其临床意义

本研究探讨骨髓增生异常综合症(MDS)患者中细胞周期蛋白A1(cyclin A1)mRNA表达及其临床意义。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测56例骨髓增生异常综合症患者及10例正常人骨髓细胞中的cyclin A1表达及cdk2、p21cip1的mRNA表达。结果表明:MDS患者中cyclin A1的阳性率及mRNA表达水平(69.64%;0.964±1.879)均较正常人(0%;0.012±0.014)明显增高(p<0.01);在初治MDS患者中,MDS-RAEB组cyclinA1表达水平(1.895±1.769)明显高于MDS-RA组(0.629±1.583)(p<0.01);治疗后MDS患者的cyclin A1表达水平较治疗前明显降低(p<0.01)。结论:MDS患者cyclin A1表达水平较正常人明显增高,其异常表达可能是影响MDS患者预后的指标之一。

白血病心脏浸润所致心肌凋亡研究

目的 :研究白血病细胞心脏浸润时心肌细胞的凋亡情况。方法 :建立小鼠白血病模型 ( L6 1 5) ,采用流式细胞术( FCM)检测小鼠心肌细胞的细胞周期和细胞凋亡率。结果 :白血病组小鼠的心肌凋亡率明显高于正常对照组 ( P<0 .0 1)。结论 :白血病细胞心脏浸润可使心肌细胞凋亡率增高。

HOX11＋急性T淋巴细胞白血病RUNX2基因启动子区域CpG岛甲基化及其表达的研究

本研究检测RUNX2基因在HOX11+急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)细胞株和T-ALL患者骨髓细胞中的甲基化状态和表达水平,探讨其表达水平与启动子区CpG岛甲基化的关系。以3株急性T淋巴细胞白血病细胞株sil-ALL、DND41和RPMI及38例T-ALL患者、29例治疗后完全缓解T-ALL患者骨髓和8例正常人骨髓为样本,采用RT-PCR检测RUNX2 mRNA表达水平,采用重硫酸盐测序法、甲基化DNA免疫沉淀技术和启动子寡核苷酸微阵列芯片分析基因启动子区CpG岛甲基化状态和基因功能。结果表明,高表达HOX11的T-ALL患者样本中会出现RUNX2基因启动子区域的甲基化。RUNX2基因启动子区域在HOX11+T-ALL的甲基化比率为78.9%,明显高于HOX11-ALL(36.8%),两组差异有统计学意义(P<0.01)。RUNX2在HOX11+的细胞株中的表达明显低于HOX11-的细胞株,RUNX2在HOX11+的T-ALL患者中的表达水平(0.581±0.257)明显低于HOX11-的T-ALL患者(0.835±0.317),并且RUNX2 mRNA的相对表达程度与HOX11 mRNA的相对表达程度成负相关(rs=-0.378,P<0.01)。RUNX2基因在T-ALL中的表达水平与其甲基化呈负相关(rs=-0.419,P<0.01)。结论:HOX11能负调控RUNX2的表达,RUNX2基因启动子甲基化是导致其在T-ALL中表达下调或基因沉默的原因,这种HOX11对RUNX2基因的抑制作用有可能就是临床上HOX11高表达T-ALL患者具有更好的无事件生存率和更长的总生存率的原因。RUNX2基因的表达和甲基化水平对判断T-ALL患者的疗效有一定意义,并有望成为一个诊断T-ALL的分子标志。

细胞周期素G的研究现状

细胞周期素G(cyclin G)在细胞周期素家族中发现较晚,其功能可能主要在细胞周期调控和DNA修复中起作用,并参与细胞凋亡过程,在不同的组织细胞中或不同来源的肿瘤细胞中,其表达水平和生物学功能是不同的。目前发现cyclin G主要存在两个亚型:cyclin G1和cyclin G2,随着对它们研究的不断深入,注意到两种cyclin G所对应的蛋白质结构、功能,对细胞周期进程的影响乃至在肿瘤中扮演的角色是不一样的,并且在不同的肿瘤发生、发展中具有不同的作用。Cyclin G1在人类多种肿瘤细胞中有基因的扩增和过表达,可能对癌症的发生有促进作用。

脂质体转染细胞周期素B1反义脱氧寡核苷酸对HL60细胞增殖调控的影响

目的 :探讨脂质体转染细胞周期素B1(cyclinB1)反义脱氧寡核苷酸 (ASON)对HL6 0细胞增殖调控的作用。方法 :用针对cyclinB1mRNA 5’端编码区起始密码子 (ATG/AUG)的ASON ,通过脂质体导入HL6 0细胞共培养后 ,用流式细胞术 (FCM)和RT -PCR分别检测cyclinB1蛋白和mRNA的表达水平 ,电镜和原位细胞凋亡检测法(POD)、FCM及DNA凝胶电泳法检测细胞凋亡。结果 :CyclinB1ASON组与SON及空白对照组相比 ,ASON能特异地抑制cyclinB1蛋白及mRNA水平的表达 ,当ASON的浓度达到一定程度时 ,HL6 0细胞的增殖及集落形成率均明显受抑制 ,出现细胞凋亡 ,并且此作用随ASON浓度的升高而增强。结论 :CyclinB1的特异ASON能封闭其蛋白及mRNA的表达水平 ,可剂量依赖性地抑制白血病细胞增殖 ,诱导细胞凋亡。

EBV病毒感染相关噬血细胞综合征的诊治分析

目的探讨EBV病毒感染相关噬血细胞综合征患者的发病机制及临床诊治。方法对1例EBV病毒感染相关噬血细胞综合征(HLH)患者依据诊断指南进行诊断,使用甲强龙160mg q12h/天联合人免疫球蛋白20g/天共3天抑制免疫风暴治疗,同时降血氨、抗感染、纠正肝功及输注新鲜冰冻血浆、人血白蛋白、纤维蛋白原及血小板等支持治疗,对病例资料进行总结分析。结果患者经治疗后体温明显下降,生命体征稳定,病情有好转过程,但该患者最终因肝性脑病、呼吸功能衰竭而死亡。结论通过对本例HLH患者使用大剂量甲强龙及丙球冲击治疗阻断细胞因子风暴,同时联合控制感染、输注新鲜冰冻血浆、纤维蛋白原等支持治疗,能控制免疫失衡,并取得了积极的治疗效果。故大剂量丙种球蛋白联合大剂量甲强龙方案适用于多器官功能障碍的极重症HLH患者。

酷似Mikulicz病的非霍奇金淋巴瘤1例

IgG4相关疾病（IgG4-related disease,IgG4-RD）是近年来逐渐被大家所认识的一种新的自身免疫病,可以累及全身多个系统,临床表现复杂多样,缺乏特异性。米库利兹病（Mikulicz disease,MD）被认为是IgG4-RD的一种亚型,有其独特的表现,包括唾液腺、泪腺、腮腺肿大,血清IgG4水平上升,腺体组织中大量IgG4^＋浆细胞浸润，糖皮质激素治疗有效。

细胞周期素A的特异反义脱氧寡核苷酸对白血病细胞增殖的调控作用

目的:探讨细胞周期素A(cyclinA)的特异反义脱氧寡核苷酸(ASON)对HL60细胞及原代白血病细胞增殖的调控作用。方法:采用反义技术将cyclinA特异的ASON与HL60细胞及原代白血病细胞共同培养,用流式细胞术及RT-PCR等方法检测cyclinA蛋白及mRNA表达水平,用苔盼蓝拒染法检测细胞生长曲线、软琼脂培养法检测CFU-HL60的集落形成情况。结果:在HL60及原代白血病细胞中,cyclinA的ASON能特异地抑制其mRNA的表达及其蛋白合成,与cyclinA的正义脱氧寡核苷酸(SON)组及对照组相比,有显著性差异(P<0.01);而且当ASON的浓度达到一定程度时,白血病细胞的增殖及其CFU-L的集落形成率均明显受抑制(P<0.01)。结论:cyclinA的ASON通过封闭cyclinA的mRNA水平,使cyclinA蛋白合成减少,能抑制白血病细胞增殖,即cyclinA是调控白血病细胞增殖的关键因子。

伴EVI1高表达的中高危急性髓系白血病临床特点及早期治疗效果

目的:探讨EVI1基因阳性的急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者的临床生物学特点及其对早期化疗疗效的影响。方法:选择2015年3月至2016年7月在北京大学血液病研究所诊治的361例AML患者病例资料进行回顾性分析,其中33例AML患者EVI1基因阳性,分析比较其临床特征和生物学特征,并比较中危及高危伴EVI1+AML患者的临床与生物学特征及诱导缓解率,分析获得完全缓解(complete remission,CR)的影响因素。32例健康供者进行EVI1/ABL基因水平检测,确定EVI1表达的异常界值。结果:以EVI1/ABL基因定量表达≥8.0%作为EVI1的阳性表达。在361例初发AML中,EVI1+AML患者共33例(9.1%),其中男性16例,女性17例,中位年龄45(18~67)岁,中位随访期为6.6(0.7~13.2)个月。中危核型17例,包括正常核型9例,1例+8;高危核型14例,包括7例-7/7q-,4例t(v;11q23),3例inv(3)/t(3;3),2例未见分裂象。33例患者1个疗程完全缓解率为42.4%,总CR率为60.6%。按《美国国立综合癌症网络(National Comprehensive Cancer Network,NCCN)指南》预后分层,分为中危组16例,高危组17例,无低危组患者。中危组与高危组1个疗程CR率分别为68.8%和17.6%(P=0.005),总CR率分别为81.3%和41.2%(P=0.032),复发率为7.7%和14.3%。单因素分析,高危染色体核型对1个疗程CR率及总体CR率均有影响(P=0.004、0.029)。高危组患者病死率显著高于中危组(41.2%vs.6.3%,P=0.039),且总生存(overall survival,OS)显著低于中危组(P=0.012)。结论:EVI1基因在AML中常伴中、高危核型表达,对于AML患者来说可能不是独立的预后因素,伴-7/7q-、t(v;11q23)及inv(3)/t(3;3)等高危染色体核型的预后差,其1个疗程CR率及总CR率、长期生存率低,病死率高,应尽早行异基因造血干细胞移植。

NK细胞在急性髓细胞性白血病过继性免疫治疗中的应用及其进展

自然杀伤(NK)细胞为体内固有免疫细胞,无需抗原致敏即可直接识别并杀伤肿瘤细胞等。随着对NK细胞抗肿瘤机制深入认识、NK细胞扩增方法优化等方面的进展,以NK细胞为基础的血液肿瘤过继免疗法越来受到关注,尤其异体NK细胞过继性免疫治疗急性髓细胞性白血病(AML)疗效显著。随着精准医学发展、NK细胞抗肿瘤机制的深入研究以及大样本多中心临床研究逐步开展,相信不久的将来更为有效的异体NK细胞过继性免疫治疗方案会使更多的AML患者获益。本文就NK细胞生物学特点、细胞的制备方法、在非移植背景下AML中的临床应用及在AML造血干细胞移植(HSCT)中的应用进行阐述,以期为后续的深入研究和临床治疗提供参考。

细胞周期蛋白A1对SKM-1细胞增殖的影响及其在骨髓异常增生综合征中的作用

目的:通过小干扰RNA(siRNA)下调Cyclin A1的表达,观察其对骨髓增生异常综合征(MDS)细胞系SKM-1细胞增殖的影响并探讨其作用机制。方法:采用阳离子脂质体转染方法,在SKM-1细胞中转染Cyclin A1的siRNA;转染48 h后收集细胞,应用Western blot及RT-PCR测定转染效率;应用CCK-8方法检测细胞增殖,Western blot及RT-PCR检测Cyclin A1基因沉默前后CDK2、RUNX1、SRSF2基因表达的水平。结果:转染Cyclin A1特异性siRNA 48 h后,Cyclin A1蛋白及mRNA表达水平显著下降(P<0.01)。下调Cyclin A1后,SKM-1细胞的增殖受抑,CDK2、RUNX1及SRSF2基因的蛋白及mRNA表达量均下调(P<0.05)。结论:Cyclin A1表达下调后,SKM-1细胞的增殖受到抑制,表明Cyclin A1可能是MDS治疗的潜在靶点之一。

阿伐曲泊帕联合环孢素治疗输血依赖非重型再生障碍性贫血研究

目的评估阿伐曲泊帕联合环孢素(Cyclosporin A,CsA)治疗在输血依赖型非重型再生障碍性贫血(transfusiondependent non-severe aplastic anemia,TD-NSAA)患者中的疗效及安全性。方法前瞻性登记分析从2020年10月到2023年10月,CsA联合阿伐曲泊帕治疗的21例TD-NSAA患者。结果中位治疗时间7.5(1.0~27.0)个月,9例(42.86%)患者脱离输血,18例(85.71%)获得三系血液学反应(HR)[完全治疗反应(CR)3例(14.29%)、良好治疗反应(GPR)4例(19.05%)、部分治疗反应(PR)11例(52.38%)],无治疗反应(NR)3例(14.29%),中位起效时间1.6(0.1~7.4)个月,在第6、12个月分别17例(80.90%)、18例(85.71%)获得疗效。白细胞计数(2.21×10^(9)/L比3.82×10^(9)/L,P=0.029)、中性粒细胞计数(0.92×10^(9)/L比1.96×10^(9)/L,P=0.001)、血小板计数(13×10^(9)/L比57×10^(9)/L,P=0.002)、网织红计数(1.84%比2.63%,P=0.011)均较治疗前显著升高。未发生与阿伐曲泊帕相关的2级或以上的不良事件。结论阿伐曲泊帕联合CsA治疗TD-NSAA起效快,且安全性较好。

环磷酰胺联合泼尼松治疗环孢菌素难治/复发的大颗粒淋巴细胞白血病相关纯红细胞再生障碍

目的:评估环磷酰胺联合泼尼松(CP)方案治疗环孢菌素(CsA)难治/复发的大颗粒淋巴细胞白血病(LGLL)相关纯红细胞再生障碍(PRCA)的疗效及耐受性。方法:回顾性分析登记于中国东部贫血协作组(CECGA)数据库的21例CsA治疗无效或复发的LGLL相关PRCA患者临床资料及接受CP方案治疗结果,评估疗效及耐受性。结果:CsA难治/复发患者共21例,其中难治性16例、复发性5例,经CP方案治疗后,15例达完全缓解(CR),3例达部分缓解(PR),3例治疗无效,治疗总有效率为85.7%(18/21),CR率为71.4%(15/21),中位达PR时间为2.2(0.5~6.6)个月,中位达CR时间为2.3(1.3~6.8)个月,中位疗效维持时间17.0(5.0~32.0)个月。8例STAT3突变阳性患者中7例达CR。13例(61.9%)患者在CP方案治疗期间出现不良反应,主要为粒细胞减少和肝功能异常,2例患者因4级粒细胞减少停药。随访期内,无治疗相关死亡事件。3例(14.3%)患者因药物减停出现复发。中位随访20.0(4.0~34.0)个月,15例仍有效,中位无复发生存时间为16.0(3.0~32.0)个月。结论:对于CsA难治/复发的LGLL相关PRCA患者,CP方案疗效确切,且对STAT3突变阳性患者也效果良好。CP方案主要不良反应为骨髓毒性。

抗人T细胞猪免疫球蛋白联合艾曲泊帕治疗初发重型再生障碍性贫血疗效分析

目的:研究抗人T细胞猪免疫球蛋白(anti-human T lymphocyte porcine immunoglobulin,p-ATG),环孢素A(Cyclosporin A,CsA)组成的强化免疫抑制治疗(intensive immunosuppressive therapy,IST)联合艾曲泊帕在重型再生障碍性贫血(severe aplastic anemia,SAA)患者的疗效及影响因素。方法:前瞻性登记纳入2020年4月—2022年8月25例初发SAA患者,接受p-ATG为基础的IST联合艾曲泊帕治疗。主要终点是6个月完全反应(complete response,CR)率和总体反应率(overall response rate,ORR)。次要终点是生存率、复发率及克隆演变风险。结果:治疗后6个月CR率和ORR分别为19.05%、71.43%。中位获得反应时间为3.00(0.10~11.80)个月,中位获得CR时间为14.40(0.90~20.00)个月,多因素分析显示疾病严重程度对获得反应时间有显著影响。中位随访时间11.30(0.70~26.40)个月,总生存率96.00%,中位无事件生存期为12.70(1.40~18.90)个月。1例于治疗后10个月出现克隆性造血。≥3级不良反应:感染8例,1例死亡;肝肾功能损害1例和牙周病2例。结论:p-ATG为基础的IST联合艾曲泊帕治疗SAA可获得较为满意的血液学反应率和反应速度,耐受性和安全性良好。