人高密度脂蛋白受体基因3'UTR对其mRNA稳定性的影响

目的考察人高密度脂蛋白受体SR-BI基因3'UTR对其mRNA稳定性的影响。方法以人肝癌细胞株HepG2基因组DNA为模板,PCR扩增获得SR-BI基因mRNA3'UTR全长序列,克隆至荧光素酶报告基因的下游,分别构建重组质粒pc-luc-3'UTR以及pGL3-CLAp-luc-3'UTR。利用脂质体转染HepG2细胞,进而检测转染后细胞的荧光素酶活性、荧光素酶报告基因mRNA的表达水平以及荧光素酶报告基因mRNA的半衰期。结果通过PCR成功扩增获得人SR-BI基因3'UTR全长序列,分别构建重组荧光素酶报告质粒pc-luc-3'UTR以及pGL3-CLAp-luc-3'UTR,并以pGL3-CLAp-luc-3'UTR转染HepG2细胞建立稳定转染细胞株CLAp-luc-3'UTRHepG2。通过荧光素酶活性检测、实时荧光定量RT-PCR以及mRNA半衰期检测,结果证实SR-BI基因的3'UTR的存在可显著降低荧光素酶活性及其mRNA水平,mRNA半衰期也显著缩短。结论 SR-BI基因3'UTR对其mRNA的稳定性有显著的影响,是SR-BI基因转录后水平调控的关键,为SR-BI基因表达调控提供了一个新机制。

丹酚酸B在巨噬细胞胆固醇外排中的作用

目的考察丹酚酸B(SAB)对巨噬细胞胆固醇外排的影响。方法分别采用巨噬细胞RAW264.7和PMA诱导的THP-1细胞,利用流式细胞仪检测丹酚酸B对已摄取DiI-acLDL的细胞外排脂质作用的影响,对RAW264.7细胞表面ABCA1蛋白表达水平的影响。采用ABCA1的抑制剂DIDS及小分子干扰RNA的方法检测ABCA1在丹酚酸B诱导的促进脂质外排过程中的作用。进而利用靶向CD36的小分子干扰RNA,通过抑制CD36的表达,检测CD36在丹酚酸B促进载脂巨噬细胞脂质外排过程中的作用。结果采用DiI荧光标记的脂质检测巨噬细胞对脂质的外排作用,结果显示SAB显著增加了荷脂细胞对DiI-acLDL的外排作用。对脂代谢相关转运蛋白表达的检测结果显示,在荷脂的RAW264.7细胞中,SAB能够以一定剂量依赖的方式增加细胞表面ABCA1蛋白水平的表达。进一步研究显示,上述SAB促进外排的作用可被ABCA1的抑制剂或者siRNA的作用消除,确证了ABCA1在SAB介导的脂质外排过程中的重要作用。同样利用CD36小分子干扰RNA将CD36表达抑制后,SAB促进外排的作用消失,说明SAB介导的细胞脂质的外排作用同样依赖于CD36。结论丹酚酸B通过上调ABCA1的表达,促进巨噬细胞胆固醇或脂质的外排,且该作用依赖于ABCA1及CD36,为SAB抗动脉粥样硬化作用新机制的研究提供了重要依据。

人载脂蛋白A-I表达上调剂的发现与活性研究

目的筛选上调人载脂蛋白A-I(ApoA-I)基因表达的新型活性化合物,并在表达和功能水平对其作用进行研究。方法利用人ApoA-I基因表达上调剂筛选模型对化合物库进行筛选;对发现的活性化合物在ApoA-I启动子水平进行量效关系研究;利用实时荧光定量RT-PCR检测ApoA-I mRNA的表达水平;利用Western blot、ELISA和流式细胞技术检测ApoA-I的蛋白表达;利用胆固醇流出试验检测ApoA-I介导的巨噬细胞胆固醇外流的情况。结果从20 000样次化合物筛选中得到活性化合物5238B-69,在一定浓度范围内存在转录调控活性的量-效关系,当化合物浓度为0.30μg/ml时,上调ApoA-I表达活性达到最高值(408%),EC50为0.01μg/ml。5238B-69能显著上调HepG2细胞中ApoA-I mRNA的水平;同时,Western blot结果显示5238B-69能增加HepG2细胞ApoA-I蛋白的表达。ELISA结果显示,与对照相比,5238B-69作用48 h时,胞外ApoA-I水平增加了48%,流式细胞检测表明,5238B-69作用24 h后,胞内ApoA-I蛋白水平增加了21.4%。功能分析试验显示,5238B-69作用HepG2细胞上调生成的ApoA-I,能促进巨噬细胞RAW264.7内[3H]标记的胆固醇的流出。结论得到一个具有上调ApoA-I表达的活性化合物,在提高ApoA-I表达水平和生物学功能方面均有明显的效果。

有限长周期支撑结构贝叶斯概率损伤识别研究

提出了一种有限长周期支撑结构损伤概率识别方法。基于特征波导纳原理,分析谐调与存在单一扰乱周期支撑结构的自由波传播规律,建立含单扰乱周期支撑结构的频率特征方程。提出一种无量纲自振频率概念,并运用敏感性分析方法,建立有限长周期支撑结构无量纲自振频率相对于基本周期单元刚度变化敏感性矩阵的一般形式,分析表明所提出无量纲自振频率及其敏感性矩阵与周期支撑结构具体几何材料参数无关,避免敏感性分析对于精确有限元模型的依赖。结合贝叶斯理论与马尔科夫链蒙特卡洛(MCMC)模拟算法,实现基于测量自振频率变化的有限长周期支撑结构单元损伤的概率识别。通过对一含螺栓接头的周期支撑梁实验室模型开展研究,对提出方法的正确性与有效性进行验证。

人抑瘤素M在大肠杆菌中的表达、纯化及其对胆固醇代谢关键基因表达的影响

目的构建人抑瘤素M(OSM)的原核表达载体,通过表达及纯化获得重组蛋白,为深入研究OSM的功能及机制奠定基础。方法利用PCR技术,从质粒pOTB7-h OSM中扩增出人OSM蛋白编码序列,与原核表达载体pET-16b连接,构建表达质粒pET16b-OSM。在BL21(DE3)工程菌中表达目的蛋白,Western blot法检测OSM蛋白的表达。为提高OSM的可溶性表达,采用共表达分子伴侣的方法提高其上清产物的表达量。将放大发酵的产物处理后,经镍亲和层析法纯化,获得OSM成熟蛋白,SDS-PAGE电泳分析蛋白纯度。MTT法检测OSM对A375细胞的抑制活性,实时荧光定量PCR试验分析OSM对Hep G2细胞中胆固醇代谢相关基因(LDLR、ABCA1、Apo A-I和SR-BI)表达的影响。结果成功构建pET16b-OSM原核表达质粒,酶切鉴定和测序分析与预期结果完全一致。在E.coli BL21(DE3)中实现了目的蛋白的表达,通过共表达分子伴侣质粒pTf16,进一步提高了可溶性表达的水平。放大发酵产物经镍亲和层析纯化获得OSM成熟肽,电泳检测纯度大于98%。MTT法检测所制备的OSM蛋白抑制A375细胞生长的EC50为315ng/ml。mRNA水平检测证实OSM能剂量依赖地上调胆固醇代谢相关的低密度脂蛋白受体和ABCA1基因的表达。结论成功构建了OSM的原核表达载体,获得了具有生物学活性的目的蛋白,证实了其对胆固醇代谢关键基因转录的影响,为下一步功能及机制研究奠定基础。

成人学历教育线上课程优化路径研究

随着我国社会经济的不断发展,教育领域也逐渐出现了网络化、数字化和信息化,新媒体技术的不断更新应用,为各院校广泛运用线上课程进行教学打下了坚实基础,成人学历教育逐步形成了线上课程和线下课程相结合的新型教学模式。目前,我国成人学历教育线上课程主要依托于钉钉、腾信会议以及微信群等软件进行单一授课,线上课程的整体教学模式、教学方案还有待优化。本文主要通过分析当前成人学历教育线上课程的现状和存在问题,并进行研究论述,最后提出相应优化策略,以期为成人高校的线上教学活动提供借鉴意义,进而促进我国线上教育的发展,提高成人学生在线学习效果。

奶牛乳头外用蜂胶保护膜的研制

为了改善由于抗生素的长期应用,各种细菌对其产生了很强的耐药性的状况,试验利用蜂胶、聚乙烯醇(PVA)17-88、PVA05-88、吐温80、聚乙二醇、氮酮、丙二醇、东蓑若碱、白及等制备奶牛乳头外用蜂胶保护膜,以便能将其应用于奶牛乳房疾病的治疗与预防。调节基质的pH值,可控制成膜的时间与性状。实验结果表明,pH值均在5.5～6.5范围内,成膜时间在5～6 min,性状良好,可塑性较强,有良好的稳定性,成膜效果较理想。所制的乳头保护膜,基质呈透明状态,质地柔软,适合外用。

其它品种水泥的特性及其应用

研究对比低热硅酸盐水泥、新型磷铝酸盐水泥、无收缩快硬硅酸盐水泥、自应力水泥、含镁铝尖晶石的铝酸盐水泥等其它品种水泥各自的优良性能,以及在各类建筑工程中广泛的用途,以期得到更加广泛的推广与应用。

艾司西酞普兰血药浓度/剂量比的影响因素研究

目的:探讨住院患者服用艾司西酞普兰后血药浓度/剂量比(C/D)的影响因素,为临床合理用药提供依据。方法:收集2019年10月至2021年11月该院服用艾司西酞普兰的住院患者血药浓度监测数据样本275份,使用SPSS 25.0统计学软件对数据进行回顾性分析。结果:经多元线性回归分析,本研究仅发现代谢酶CYP2C19代谢类型、日剂量2个因素可解释艾司西酞普兰血药浓度的显著变化。服用艾司西酞普兰的患者,女性组C/D值显著高于男性组,差异有统计学意义(P=0.021<0.05);与艾司西酞普兰联合应用的药物方面,联合利培酮组与联合氯氮平组(P=0.035<0.05)、联合普萘洛尔组与联合奥美拉唑组(P=0.030<0.05)、联合普萘洛尔组与联合氯氮平组(P=0.021<0.05)的C/D值比较,差异均有统计学意义;代谢酶CYP2C19慢代谢型、快代谢型和中间代谢型患者组间C/D值的差异均有统计学意义(P<0.05);其他因素如年龄、厂家、其他联合用药和CYP2D6与艾司西酞普兰C/D值无相关性对艾司西酞普兰C/D值的影响,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:艾司西酞普兰的C/D值与性别、部分联合用药和CYP2C19基因分型有关,临床可加强治疗药物监测,结合血药浓度、基因分型、临床诊疗效果及药物经济学优化给药方案。

小学语文中年级体验式习作教学策略探究

中年级习作教学是习作起步阶段,但学生写作面临缺乏兴趣、素材、方法等困境。本文以本校中年级体验式习作教学实践为例,提倡要让孩子回归生活,细心观察,用真实体验调动孩子感知,用想象鼓励孩子创造,于生活中作文,写出真感情。

坚持政治引领 打造高质量的科技工作者服务体系--以中国针灸学会为例

中国针灸学会(简称"学会")自成立以来,在推动我国针灸医学事业发展、凝聚人才、服务人民群众健康等方面发挥了重要作用。尤其是近年来,学会在中国科协指导和支持下,探索总结出坚持以党的政治建设为统领、坚持以服务科技工作者为根本、坚持党建与业务融合发展的学会发展新模式,持续提升学会服务科技工作者能力,在服务科技工作者中不断提升学会服务社会、政府能力,受到广大针灸科技者好评。

胞红蛋白的结构功能与药理学活性研究进展

胞红蛋白是珠蛋白家族的新成员,能够调节O2及NO的代谢、清除胞内活性氧自由基,在组织缺氧或氧化应激发生时能够维持细胞氧化还原平衡,起到良好的细胞保护作用,其在抗纤维化、抗肿瘤及其他疾病治疗方面已经显示出一定成药性。该文综合近年研究成果,总结了胞红蛋白结构、组织分布、表达调节、生理功能及其药理学活性等方面的研究进展。

基于模态参数的钢框架螺栓连接节点损伤识别理论与实验研究

提出一种有效的框架结构螺栓连接半刚性节点损伤的分步识别方法.首先采用仅与损伤位置有关、而与损伤程度无关的模态参数损伤指标作为神经网络训练输入,以确定损伤节点位置,极大地简化了神经网络结构,提高了损伤定位效率;然后通过模态敏感性方法对前步识别出的可能损伤节点进行损伤程度识别,有效地克服了传统模态敏感性方法在同时进行损伤位置及程度识别时,损伤识别动力学反问题结果的准确性与可靠性受可用模态信息量影响较大的问题.通过对一个8层半刚性连接框架的数值仿真与一个实验室两层螺栓连接钢框架的实验研究,验证了所提方法的可行性与有效性.

胞红蛋白表达纯化及抗氧化活性研究

研究人胞红蛋白(Cytoglobin,CYGB)的表达纯化、复性和抗氧化活性。人胞红蛋白基因工程菌pET28a/hC YGB/BL21(DE3)经IPTG诱导表达,包涵体分离,复性,透析和Sephacryl S-200层析分离,获得纯化的rhC YGB。SDS-PAGE和HPLC检测表明rhC YGB纯度达95%以上,紫外光谱分析证明rhC YGB分子含有血红素,圆二色谱分析表明该复性蛋白质具有正确的α-螺旋结构。生化分析及细胞水平试验表明rhC YGB具有过氧化物酶活性和抗氧化活性。小鼠急性乙醇肝损伤模型试验表明rhC YGB能有效保护乙醇所致的肝损伤。研究结果表明经添加血红素复性和纯化所得的rhC YGB具有正确的空间结构和抗氧化活性。

酒精使用障碍静息态功能磁共振成像研究进展

酒精使用障碍(alcohol use disorder,AUD)作为严重的社会公共卫生问题,给患者、家庭、社会带来了巨大的疾病负担。目前越来越多的研究表明,AUD患者存在脑功能损害。近年来随着神经成像技术的不断发展,静息态功能磁共振成像技术越来越多地应用于AUD相关的脑功能研究,为AUD病理生理机制的认识提供了新的依据。本文就近年来静息态功能磁共振成像技术在AUD研究中的相关应用做一综述,旨在为将来基于静息态功能磁共振成像对AUD机制的深入研究提供一定的参考依据。

胞红蛋白在CHO细胞中的表达及其抗氧化活性研究

构建胞红蛋白(Cytoglobin,CYGB)真核表达载体,并在CHO细胞中进行表达。通过PCR技术扩增了CYGB基因序列,并将CYGB基因序列定向插入pcDNA3.1(+)表达载体中,构建了pcDNA3.1-CYGB真核表达载体。将重组表达载体pcDNA3.1-CYGB转染CHO细胞,经G418筛选出阳性细胞株。培养、收集细胞,提取细胞总蛋白,经Western Bloting鉴定证明CYGB表达。通过H2O2(800μmol/L)诱导的氧化应激损伤实验,检验CYGB的抗氧化活性,与对照组相比,CYGB表达细胞株提高了细胞内超氧化物酶(SOD)的活力,显著的提高了细胞在H2O2诱导的氧化应激下的存活率。研究结果表明,真核表达载体pcDNA3.1-CYGB构建成功,CYGB在真核细胞CHO中成功表达。

胞红蛋白酵母表达载体构建与表达纯化

胞红蛋白是脊椎动物珠蛋白超家族的一员,具有重要的生物学功能,已在大肠杆菌中成功表达。酵母表达系统作为常用的真核表达系统,具有外源蛋白表达蛋白量大且活性高等优点。该研究通过PCR扩增技术获得胞红蛋白编码基因并通过DNA重组技术构建并鉴定了胞红蛋白毕赤酵母分泌型表达载体CYGB-pGAPZαA。将重组载体经单酶切线性化后通过电转化法转入毕赤酵母GS115,利用梯度浓度的Zeocin抗生素和PCR技术筛选得到阳性转化子。工程菌经发酵培养后,发酵上清液经镍柱分离得到较高纯度的目的蛋白,并经电泳等方法验证鉴定。

可卡因与阿片类药物成瘾中microRNA作用机制的研究进展

所谓非编码RNA（non—coding RNA，ncRNA），是指具有生物学功能但不能编码蛋白质生成的RNA，这类RNA的主要特征是含有大量的终止密码子而缺乏编码蛋白生成的开放阅读框（open reading frames，ORFs），是调控细胞生理的关键因子。miRNA是一类进化上高度保守的ncRNA，于1993年在线虫体内发现。miRNA最早生成于细胞核，由编码miRNA的基因转录生成单个或多个转录产物即初级miRNA（primary—miRNA，pri—miRNA）。

中国针灸学会与上海绿谷(集团)有限公司合作协议签字仪式在京举行

2012年3月26日,中国针灸学会和上海绿谷（集团）有限公司在北京正式签署合作协议。双方将以建立＂中国针灸学会科学技术奖＂奖励合作机制、共同组织开展中医针灸方面的学术交流活动、共同开展中医针灸方面的合作项目,此次合作将进一步促进针灸学的传承和创新并积极推动针灸事业的发展与进步。中国针灸学会刘保延会长、绿谷集团吕松涛董事长共同签署了合作协议书并在签字仪式上发表讲话。

中国针灸学会第五次全国会员代表大会在京召开

中国针灸学会第五次全国会员代表大会于2011年8月19日--21日在北京召开，来自全国各地方学会、总会所属分支机构和各有关单位的代表、特邀代表、嘉宾共500余人出席了本次会议。卫生部副部长、国家中医药管理局局长王国强，中国科协副主席、书记处书记程东红，中国工程院院士、中国中医科学院院长张伯礼出席了开幕式并讲话。