CSB1-Lipo-DOX-miR101靶向治疗乳腺癌及抗耐药效应的体外研究

通过薄膜超声分散技术、硫酸铵主动载药技术构建了靶向乳腺癌(breast cancer,BC)细胞的具有抑制化疗药物多药耐药性(multidrug resistance,MDR)特征的阿霉素(doxorubicin,DOX)脂质体载药体系CSB1-Lipo-DOX-miR101。应用MTT法、损伤修复法、Transwell、细胞核染色、扫描电镜等技术对药物疗效和细胞行为变化进行研究。利用网络数据库分析miRNA101潜在靶向的MDR相关靶基因及BC恶性表征相关基因,以Western blot验证分析miRNA101靶基因的表达及潜在的抗MDR机制。结果表明,CSB1-Lipo-DOX-miR101对BC细胞MCF-7靶向性良好,特别是对耐药性BC细胞MCF-7/ADR具有明显杀伤力,同时对药物的MDR形成具有显著抑制作用,使药物可以持续发挥杀伤作用。结果提示CSB1-Lipo-DOX-miR101可以提高DOX对BC的临床治疗效应、降低毒副作用及复发率,其对BC的治疗效应及对MDR的抑制机理可能是通过抑制ABCC5、EZH2、APEX1、ITGB1、Snail1、MMP2基因表达实现的。

EpCAM分子特异结合多肽的筛选和鉴定

上皮/内皮细胞分子(EpCAM)是癌干细胞(CSC)重要的表面标记物分子。利用噬菌体展示肽库进行亲和消减富集生物淘筛(Biopanning),经过5轮淘筛,从最后一轮的噬菌体洗脱库中随机挑选47个克隆扩增,通过ELISA方法初步确定30个阳性噬菌体克隆并进行测序,序列分析后获得5个共有序列克隆群,随后通过细胞免疫荧光实验验证和鉴定了其CSC靶向结合特异性。经综合分析,确定R8噬菌体克隆的EpCAM结合特异性和敏感性最佳,将其多肽序列命名为ESP1。该EpCAM靶向肽ESP1未来在癌化疗靶向递送药物研发方面具有潜在使用价值,可使药物尽可能多地杀伤CSC,进而提高疗效,减少复发。