褪黑素减弱帕金森病模型大鼠纹状体神经元的ROS反应

目的帕金森病(PD)纹状体神经元损伤是否牵涉到氧化应激因素一直备受关注,本文结合行为学分析探讨褪黑素(MT)对纹状体不同神经元活性氧自由基(ROS)反应的影响。方法随机将24只清洁级SD大鼠分为对照组、6OHDA组和6OHDA+MT处理组,实验借助行为学、组化、免疫组化技术对PD大鼠模型予以探察。结果(1)如同本实验室前期研究,6-羟基多巴胺(6OHDA)致使实验大鼠的学习记忆及肌张力改变,MT的使用明显改善其变化。(2)二氢乙锭(DHE)组化染色结果显示,作为氧化应激反应产物的ROS主要定位于纹状体投射神经元(NeuN+),同时可见一些单染色的ROS+以及NeuN+神经元。6OHDA组纹状体的ROS出现在NeuN+神经元的百分率(ROS-NeuN/ROS)以及NeuN+神经元呈现ROS+反应百分率(NeuN-ROS/NeuN)[分别为(80.34±1.75)%、(89.08±2.86)%]皆高于其对照组[分别为(68.67±2.57)%、(61.24±1.52)%](P<0.05),而使用MT明显遏制由6OHDA诱导升高的百分率[6OHDA+MT组分别为(71.78±3.19)%、(64.64±2.97)%](P<0.05)。(3)ROS-Parv双标记实验显示,作为纹状体主要类型的小清蛋白(Parv)中间神经元呈现ROS阳性反应,其百分率在6OHDA组(91.62±8.63)%高于它的对照组(68.66±7.52)%(P<0.05),MT对6OHDA诱导升高的百分率显示抑制效应(71.83±1.45)%(P<0.05)。结论本文结果提示氧化应激因素可能牵涉到PD纹状体神经元损伤的病理过程,而MT对其具有保护作用。

腰段脊髓背角胶质细胞对内脏痛觉敏化反应的形态学研究

目的探察和证实胶质细胞对创伤后应激障碍(PTSD)所属内脏痛觉敏化反应的时程和形态特征。方法借助单次延长应激(SPS)方法构建内脏痛觉敏化模型,32只雄性SD大鼠被随机分成正常对照组、SPS术后1 d组、SPS术后7 d组、SPS术后14 d组,应用免疫组化、免疫印迹技术探测腰段脊髓背角星形胶质细胞和小胶质细胞形态结构和蛋白水平的变化。结果免疫组化实验显示,正常脊髓灰质内明显可以探察到大量GFAP+的细胞,其形态呈星形胶质细胞的典型特征:即微小的胞体和细长的突起,其在脊髓灰质的分布不显示明显的区域特性。定量和比较资料显示,SPS不同时间组的GFAP+细胞密度均多于对照组,7 d组增加最显著。结果同时显示,GFAP^+胞体大小在7 d和14 d组均大于对照组,以7 d组的最大。正常脊髓灰质也明显可以探察到小胶质细胞(Iba1^+),其密度和胞体大小在SPS 1 d组和14 d组与对照组之间具有显著差异,且14 d组差异最为显著(P<0.05),但7 d组的变化不明显。免疫印迹实验显示,正常脊髓灰质背角可以明显探测到GFAP和Iba1蛋白。定量资料显示,SPS 7 d组和14 d组的GFAP蛋白水平均高于对照组,7 d组升高最显著。SPS不同时间点均可诱导Iba1^+蛋白的高表达,且以14 d组最显著。结论结果提示脊髓星形胶质细胞和小胶质细胞的形态结构和蛋白水平的变化可能牵涉到内脏痛觉敏化的病理过程。

褪黑素对BDRC诱导脊髓灰质背侧角胶质细胞反应影响的实验证实

目的中枢的胶质细胞牵涉神经元不同性质损伤的病理过程,本文探讨褪黑素(MT)在臂丛背根钳夹(BDRC)诱导脊髓灰质背侧角胶质细胞病理反应中的作用。方法借助神经夹持损伤的方法建立臂丛背根钳夹模型,将18只成年雄性SD大鼠随机分为对照组(包括正常对照组和假手术组)、BDRC组、BDRC+MT组,采用免疫组化、免疫荧光和免疫印迹技术探查颈段脊髓灰质背侧角胶质细胞的形态特征和蛋白表达水平的改变。结果①免疫组化探察显示,GFAP+星形胶质细胞存在并均匀分布于正常脊髓灰质,BDRC明显诱导其细胞数量增加[(15.29±0.37)/0.01 mm^2]及体积变大[(5.72±0.71)μm^3],而MT的使用明显遏制其反应性增生[BDRC+MT组两者分别为(12.05±0.84)/0.01 mm^2、(4.81±0.69)μm^3],差异有统计学意义(P<0.05)。正常脊髓灰质表达一定水平的GFAP蛋白,而BDRC明显诱导脊髓灰质背侧角GFAP蛋白的高表达(1.18±0.12),MT的使用明显抑制由BDRC所诱导GFAP蛋白的表达水平(1.05±0.11,P<0.05)。②正常脊髓灰质背侧角明显可探查到Iba-1的阳性反应,而且其阳性细胞数量和细胞体积随BDRC诱导而增加及变大[BDRC组分别为(4.51±0.84)/0.01 mm^2、(5.16±1.06)μm^3],MT对其变化显示抑制作用[BDRC+MT组分别为(2.87±0.82)/0.01 mm^2、(4.44±0.86)μm^3](P<0.05,P<0.05)。脊髓灰质背侧角Iba-1蛋白表达水平随BDRC诱导而呈现高表达(1.20±0.17),MT对高表达的Iba-1蛋白水平显示抑制作用(1.03±0.17,P<0.05)。结论臂丛背根钳夹明显诱导脊髓灰质背侧角星形和小胶质细胞的病理反应,而MT对其变化显示强烈的抑制作用。