禽流感病毒分离株A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)HA基因序列分析

采用RT_PCR技术,以A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)RNA为模板,扩增了1.73kb 的HA 全基因cDNA。将HAcDNA克隆后进行了序列测定,测序结果表明所扩增的1728 个核苷酸片段包含了完整的HA基因的开放阅读框架和上下游引物序列、蛋白质合成的起始密码子和终止密码子。核苷酸序列比较分析结果表明:A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1) 与A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1)有11 个核苷酸差异,同源率99.4% ;与A/HongKong/156/97(H5N1) 有25 个核苷酸差异,同源率98.6 % ;与A/Chicken/HongKong/258/97 (H5N1) 有30 个核苷酸差异,同源率98.3% ;它们的氨基酸序列同源率依次分别为99 .2 % 、98.6% 和98.1% 。受体结合位点的氨基酸序列完全一致;HA裂解位点氨基酸序列也完全一致,各有5 个碱性氨基酸插入。这说明上述4 个流感病毒分离株可能来自同一个祖先,具有相同的毒力和相似的生物学特性。

有毒鱼类的鉴别

鱼类味道鲜美,营养丰富,是人类主要的动物性食品之一。但有些鱼类含有毒素如果误食或食用不当,即可引起食物中毒。世界上有毒鱼类约有600种,产于我国的有170多种。

亚硒酸钠对HL-60细胞增殖、凋亡影响及作用机制探讨

目的:以人急性髓细胞性白血病细胞系HL-60为模型,探讨亚硒酸钠对HL-60细胞增殖及凋亡的影响。方法:以不同浓度的亚硒酸钠作用于HL-60细胞后,分别采用台盼蓝拒染法计数活细胞,MTT法检测细胞增殖抑制;通过光镜及双染流式细胞检测分析细胞凋亡;检测线粒体膜电位变化。分光光度法检测caspase-3的活性变化,RT-PCR检测Bcl-2的mRNA的表达。结果:(1)用台盼蓝染色和MTT方法证实亚硒酸钠(>5μmol/L)能抑制HL-60细胞的生长及存活。(2)HL-60细胞经亚硒酸钠处理后,形态学上出现凋亡细胞特征性改变,双染流式细胞检测证实,亚硒酸钠能有效诱导HL-60细胞凋亡。(3)亚硒酸钠处理HL-60细胞后,流式细胞仪检测线粒体膜电位下降,分光光度法显示caspase-3活性升高,凋亡基因Bcl-2的mRNA的表达明显降低。结论:亚硒酸钠能有效抑制HL-60细胞的增殖及存活,且能够诱导其凋亡,抑制率及凋亡率与药物剂量呈相关。线粒体介导的凋亡途径是亚硒酸钠诱导HL-60细胞凋亡的可能机制。

猪弓形虫病宰前和宰后检验的试验研究

猪弓形虫病主要表现为高热稽留、精神不振、食欲减退、呼吸困难、咳嗽气喘、共济失调、耳尖、鼻端、腹下和四肢皮肤出现紫斑,是宰前检验的主要依据;ELISA比IHAT抗体检出早,抗体滴度高,抗体维持时间长,是理想的宰前血清学诊断方法;病理变化以局灶性坏死性肝炎、间质性肺炎、出血性坏死性淋巴结炎和非化脓性脑炎为特征,可作为宰后检验的重要依据;病原学检查以感染后2～4天的猪检出率高。

人工感染猪弓形虫病血清抗体消长规律的研究

根据10头人工感染猪IHAT和ELISA血清抗体检测结果表明，所有被检动物感染后第14天血清抗体达到阳性滴度，第21天抗体滴度达到高峰，第28天开始下降。ELISA比IHAT抗体检出时间早，抗体滴度高，维持阳性抗体滴度的时间长。水试验研究结果表明，猪弓形虫病血清学诊断的最佳时间为感染后14～28天。

伊马替尼联合HyperCVAD方案巩固治疗Ph阳性的急性淋巴细胞白血病疗效分析

目的观察酪氨酸激酶抑制剂联合HyperCVAD方案巩固治疗Ph阳性急性淋巴细胞白血病(ALL)的疗效及毒副反应。方法回顾性分析25例成人初治Ph阳性急性淋巴细胞白血病的治疗资料,诱导缓解后应用伊马替尼联合改良的Hyper CVAD/MA(A/B)方案交替巩固强化治疗,评价患者无病生存(DFS)时间、总生存(OS)时间及不良反应。结果改良的HyperCVAD方案联合伊马替尼巩固强化治疗25例Ph阳性的ALL患者,中位DFS和OS分别为15个月和25个月,3年DFS和OS率分别为41.7%和55.44%,治疗过程中有血液学和非血液学的不良反应出现,但均可控。结论酪氨酸激酶抑制剂联合Hyper CVAD方案巩固治疗急性淋巴细胞白血病疗效满意,治疗相关不良反应易控制,应予以临床推广。

CLAG方案治疗复发难治急性髓系白血病疗效分析

急性髓系白血病是成人急性白血病中较为常见的一种类型,是遗传学上高度异质性而产生的恶性克隆性疾病,以骨髓中未成熟的髓系原始细胞异常分化和增殖为主要特征,而复发难治性急性髓系白血病是临床血液科医师面临的较为棘手的问题。

掺碱对牛乳理化性状影响

掺碱乳的酸度在一定范围内随掺碱量的增加而下降,pH值随掺碱量的增加而上升。Na_2CO_3·10H_2O在0.04～0.4％,NaHCO_3在0.04～1％掺入量时,可使牛乳中亚甲蓝指示剂还原时间缩短。Na_2CO_3·10H_2O和NaHCO_3掺入量分别超过0.4％和1％时,具有明显的抑菌作用。Na_2CO_3·10H_2O掺入量在在0.4～1％、NaHCO_3掺入量在0.4～2％时,可使酸败乳酒精试验结果和鲜乳相一致,说明掺碱可掩盖乳的酸败。

猪人工感染弓形虫病血清抗体消长规律的研究

根据10头人工感染弓形虫病猪的间接血凝试验（IHAT）和酶联免疫吸附试验（ELISA）血清抗体检测结果表明．所有被检猪感染后第14天血清抗体达到阳性滴度．第21天抗体滴度达到高峰．第28天开始下降。猪弓形虫病血清学诊断的最佳时间为感染后14～28天。ELISA比IHAT抗体检出时间早．抗体滴度高．维持阳性抗体滴度的时间长。

黑龙江省部分饲料样品中黄曲霉及其毒素B_1的检测

黑龙江省部分饲料样品中黄曲霉及其毒素Ｂ１的检测贾永清李一经（东北农业大学动物医学系）张艳彬（哈尔滨三棵树配合饲料厂）来稿时间：１９９７－０１－０４黄曲霉毒素是由黄曲霉菌和寄生曲霉菌所产生的一组有毒化合物，黄曲霉毒素Ｂ１是其中毒力最强、发生中毒最多的一...

猪弓形虫病动态病理学的研究

对10头人工感染弓形虫发病的小猪的不同时期病理学变化进行了详细观察,结果表明,本病以支气管肺炎、坏死性肝炎和出血性坏死性淋巴结炎为特征,尤其在感染的第7天,在肝小叶的坏死灶内可见数量和大小不等的异物型多核巨细胞,具有重要的诊断价值。从发病初期的实质器官变性坏死到后期的淋巴组织广泛增生,具有一定的规律性。

猪传染性胃肠炎病毒核衣壳(N)蛋白基因的克隆与表达

以猪传染性胃肠炎病毒亚基因组mRNA为模板根据文献设计一对引物 ,通过RT -RCR技术 ,扩增其核衣壳(N)蛋白基因的cDNA ;将其按正确的阅读框架定向克隆到表达载体pProEXHTb中特异酶切位点 ;将重组质粒PHN转化进大肠杆菌TG1株 ,在浓度为 1 0mMIPTG和 37℃条件下诱导 ,PHN基因融合蛋白获得了表达 ;经SDS -PAGE ,Western blot试验 ,确定其表达的融合蛋白产物大小为预期的 47kD。试验结果证明 。

鹅细小病毒主要结构蛋白VP3基因的克隆与序列分析

将GPVH1分离株接种于 13日龄非免疫鸭胚 ,收集接毒后 3～ 7日死亡鸭胚的尿囊液。纯化病毒 ,通过PCR技术 ,从病毒基因组DNA中扩增出病毒衣壳蛋白VP3完整基因片段 ,经酶切鉴定后直接与pMD 18_T质粒载体连接 ,转化感受态大肠杆菌TG1。提取重组质粒经PCR鉴定和酶切鉴定后 ,对插入片段进行序列测定及分析。结果表明 :鹅细小病毒H1分离株VP3基因全长 16 0 5bp ,编码 5 34个氨基酸 ,与国外已发表的鹅细小病毒B株核苷酸序列同源性为 98.5 % ,氨基酸序列同源性为98.3% ,表明这二个毒株亲缘关系相近。

表达H5亚型禽流感病毒血凝素和神经氨酸酶双基因重组禽痘病毒的构建

血凝素（ＨＡ）和神经氨酸酶（ＮＡ）是禽流感病毒（ＡＩＶ）的两种表面糖蛋白，主要诱导机体产生体液免疫应答。本研究采用ＳＤＳ－蛋白酶Ｋ法提取禽流感病毒分离株Ａ／Ｇｏｏｓｅ／Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ／３／９６（Ｈ５Ｎ１）的ＳＰＦ鸡胚尿囊毒ＲＮＡ，ＲＴ－ＰＣＲ扩增完整的ＮＡ ｃＤＮＡ基因，将其克隆到载体ｐＳＹ５３８中的禽痘病毒早晚期启动子 ＬＰ２ＥＰ２的下游，然后再将含有启动子的 ＮＡ基因片段亚克隆到已有的ＡＩＶＨＡ基因重组禽痘病毒转移载体ｐＳＹ（ＨＡ＋ＬａｃＺ）中，构建了ＨＡ、ＮＡ双重组禽痘病毒转移载体ｐＳＹ（ＨＡ＋ＮＡ＋ＬａｃＺ），将它与禽痘病毒疫苗株Ｓ－ＦＰＶ－０１７共转染鸡胚成纤维细胞，在Ｘ－ｇａｌ存在的条件下，经蓝斑筛选、六选蚀斑纯化、ＰＣＲ鉴定等，结果表明已获得一株能同时稳定表达ＨＡ和ＮＡ蛋白的重组禽痘病毒，为禽流感基因工程病毒活载体疫苗的研究奠定了基础。

H9亚型禽流感油乳剂灭活苗免疫产生期内T淋巴细胞表型亚类的检测与研究

采用免疫荧光法、使用流式细胞检测仪对经H9亚型禽流感病毒人工感染SPF鸡、H9亚型禽流感油乳剂灭活苗免疫SPF鸡以及经免疫后使用H9亚型禽流感病毒攻毒后的SPF鸡外周血、脾脏、胸腺中T细胞表型亚类 (CD4 +、CD8+、TCR1+)的变化规律进行了监测 ,结果表明 ,H9亚型禽流感油乳剂灭活苗免疫后抗原的缓慢释放可在一定程度上激发机体的细胞免疫应答 ,使免疫活性T淋巴细胞得到活化 ,免疫后鸡体外周血中CD4 +、CD8+和TCR1+T细胞的数量呈现出一明显升高的过程 ;同时 ,人工感染免疫鸡后 ,脾脏和胸腺TCR1+T细胞的数量上升 ,外周血CD4 +、CD8+和TCR1+T细胞的数量少量降低或维持不变 ,随后短期即恢复正常 ;而人工感染SPF对照鸡后 ,外周血CD4 +。

基于ADAMS的高空作业车举升臂动力学研究

以国产某型14 m折叠臂式高空作业车为研究对象,运用多体动力学软件ADAMS建立了举升臂的机构模型,在此基础上对其举升臂的作业过程进行了动态仿真分析,绘制出举升臂部件的速度、关节驱动力矩的变化曲线。仿真结果表明:通过使用软件内建函数可以很好的模拟举升臂的切换运动,为举升臂的运动控制提供了可行的方法。

猪传染性胃肠炎病毒重组核蛋白的纯化与Dot-ELISA抗体检测方法的建立

将重组猪传染性胃肠炎病毒 (TGEV)N基因原核表达载体pProEXHTb转化的大肠埃希氏菌 ,用IPTG诱导表达核蛋白 ,经过Ni NTA柱的纯化 ,获得纯化核蛋白。以该蛋白制备抗原 ,建立了以TGEVN蛋白重组抗原的Dot ELISA诊断技术 ,其抗原最适包被量为 1μg ,抗原预点膜在 4℃可保存 5周以上。本法快速简便 。

禽流感病毒血凝素与核蛋白在重组禽痘病毒中的共表达

为克服禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)仅诱导机体产生亚型特异性免疫应答的不足,本研究拟将病毒核蛋白(NP)基因与HA基因在重组禽痘病毒中实现共表达。首先构建转移载体,从测序质粒pUCNP中切下目的基因克隆到载体pSY538早晚期启动子LP2EP2的下游,再将含有禽痘病毒早晚期启动子LP2EP2的NP基因片段亚克隆到已有的AIVHA基因重组禽痘病毒转移载体中,即得到同时含有HA和NP两种基因的重组转移载体pSY(HA+NP)。将转移载体脂质体转染已感染禽痘病毒亲本株S-FPV-017的鸡胚成纤维细胞。根据报告基因β-半乳糖苷酶(LacZ)基因的表达,蓝白斑法筛选重组病毒,经数轮蚀斑纯化,PCR鉴定及West-ern-blot分析,结果表明所获得的重组病毒能高效表达AIVHA及NP两种蛋白。此研究为进一步研制更为有效的禽流感基因工程活病毒载体疫苗奠定了基础。