hJagged1^(ext)-Fc融合蛋白真核表达载体的构建和表达

目的 :构建含人Jagged1胞外段 IgFc融合基因片段的质粒 ,并在真核细胞中表达。方法 :从人骨髓细胞中用RT PCR扩增hJagged1基因的胞外段。经DNA测序后 ,将hJagged1基因的胞外段插入改造过的质粒pBluescriptskⅡ中 ,获得hJagged1ext Fc融合基因。将融合基因插入真核表达载体pEF BOSneo ,构建真核表达载体pEF BOSneo hJagged1ext Fc。以其瞬时转染COS7细胞 ,应用RT PCR、细胞免疫荧光技术 ,及夹心ELISA检测融合蛋白的表达。结果 :hJagged1基因的胞外段被有效地扩增。DNA序列分析表明 ,所构建的含hJagged1ext Fc融合基因的质粒与设计相同 ,hJagged1ext Fc融合蛋白得到正确表达。结论 :成功地构建了hJagged1ext Fc融合基因的真核表达载体 ,并在真核细胞中正确表达 ,为进一步研究Jagged1在造血干 /祖细胞的体外扩增奠定了基础。

hdll1^(ext)-Fc融合蛋白真核表达载体的构建及表达

目的 :构建人dll1ext(humandelta like1extracellularregion) Fc融合蛋白的真核表达载体pEF BOSneo hdll1ext Fc,并在COS 7细胞中进行表达。方法 :从人脑cDNA文库中PCR扩增人delta like1胞外段 ,通过DNA重组构建真核表达载体 pEF BOSneo hdll1ext Fc。瞬时转染COS 7细胞 ,应用RT PCR、细胞免疫荧光技术和双抗体夹心ELISA ,检测融合蛋白的表达。结果 :成功地构建了真核表达载体 pEF BOSneo hdll1ext Fc。以重组载体转染COS 7细胞后 ,RT PCR结果显示delta like1胞外段与IgG1Fc在mRNA水平正确拼接 ;细胞免疫荧光染色呈阳性反应 ;夹心ELISA法检测到细胞培养上清中有融合蛋白的表达。结论 :成功地扩增了人delta like1胞外段 ,构建了 pEF BOSneo hdll1ext Fc真核表达载体 ,并在COS 7细胞中获得表达 。

BCR/ABL-OD结构域重组蛋白的表达和纯化

目的:制备BCR/ABL OD结构域-HIS的重组蛋 白.方法:用RT-PCR方法扩增BCR/ABL OD结构域的基因 片段,测序正确后将其克隆入原核表达载体pET16b中,并进 行酶切鉴定,鉴定正确后转化大肠杆菌BL21,构建表达His- OD融合蛋白的菌株.经IPTG诱导表达后,镍 次氮基三乙酸 (Ni NTA)琼脂糖进行亲和层析纯化,用SDS-PAGE对该融 合蛋白的表达产率及蛋白纯度进行了分析.结果:获得了 His-OD重组融合蛋白,纯度在95%以上,产物得率约75%. 结论:成功制备高纯度His-OD融合蛋白,为进一步研究OD 结构域的生物学功能奠定了基础.

150例糖尿病患者胰腺外分泌功能检测及相关因素分析

目的探讨糖尿病患者胰腺外分泌功能不全的发生情况及其相关因素。方法选取2009年3月至2010年6月于第四军医大学西京医院内分泌科就诊的糖尿病患者150例，分为1型糖尿病组（T1DM，23例）、2型糖尿病组（T2DM，127例），对照组为来我院健康体检者及我科医护人员共48人。记录糖尿病患者的年龄、性别、体质指数（BMI）、病程、糖尿病微血管病变发生情况、糖化血红蛋白（HbAle）等指标。收集受试者24h内排出的粪便，应用酶联免疫吸附实验（ELISA）法测定粪便中粪弹性蛋白酶（FE）的含量，对所有受试者的胰腺外分泌功能进行评估。率的比较采用X2检验或Fisher精确概率法。结果1型糖尿病患者、2型糖尿病患者及对照组粪便FE含量差异有统计学意义[分别为（394±237）比（502±194）比（576±170）μg／g，F=6．93，P〈0．01]。以FE〈200μg／g作为胰腺外分泌功能不全的判断标准，结果显示30．4％（7／23）的T1DM患者及7．9％（10／127）的T2DM患者存在胰腺外分泌功能不全，与对照组（0）相比，差异有统计学意义（Fisher检验P〈0．05）。以是否存在胰腺外分泌功能不全对糖尿病患者进行分组分析，结果显示两组间年龄、性别、BMI、病程、胰岛素治疗与否、糖尿病微血管病变发生情况、稳态模型胰岛素分泌指数（HOMA-B）、空腹胰岛素、餐后2h胰岛素及HbAlc等差异均无统计学意义（均P〉0．05）。结论本研究提示与健康对照相比，T1DM和他DM患者胰腺外分泌功能不全的发生率普遍较高。

西北地区非糖尿病人群IGF2BP2基因多态性与胰岛素抵抗的相关性分析

目的探讨中国西北汉族人群胰岛素样生长因子2结合蛋白2(IGF2BP2)基因多态性与2型糖尿病(T2DM)及其表型的关系。方法采用病例-对照研究方法,随机选取374例T2DM患者和360例非糖尿病对照人群,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOFMS)技术对病例组及对照组IGF2BP2基因多态位点rs4402960进行基因分型。结果 rs4402960位点T等位基因频率在T2DM组及对照组分别为29.6%和27.2%,两组间差别无统计学意义;基因-表型研究显示对照组中携带TT与TG基因型的人群其稳态模型下胰岛素抵抗(HOMA-IR)、空腹胰岛素(FINS)及餐后2h胰岛素(PINS)的上四分之三位数值具有高于GG基因型的趋势,Logistic回归发现经校正年龄、性别及体重指数(BMI)后,显性遗传模型下rs4402960位点与胰岛素抵抗相关(OR=1.76,95%CI:1.05～2.97,P=0.033)。结论西北汉族人群中IGF2BP2基因rs4402960位点与T2DM无明显关联,但该位点可能与胰岛素抵抗相关。

系统评价中的间接比较与网状Meta分析方法研究进展

在头对头直接比较证据缺乏的情况下,采用间接比较(ITC)与网状Meta分析对多种干预措施进行比较是近年兴起的一种统计学方法。迄今为止,其理论体系仍在完善之中。本文主要从基本概念、方法假设、有效性影响因素以及分析软件等方面对其发展动态进行简要介绍与总结,以帮助研究者更好地理解该方法,并推动其在证据生产中的使用。

食物成瘾性肥胖人群大脑凸显网络异常的功能磁共振研究

目的探究食物成瘾性肥胖人群大脑凸显网络活动异常在摄食行为失控中的机制。方法选取2010年1月至2015年1月济南军区总医院36例食物成瘾性肥胖患者和35例志愿者,对所有受试者进行功能磁共振扫描,经数据预处理后,采用独立成分分析方法提取两组被试凸显网络功能连接模式图,应用双样本t检验方法进行组间对比分析。结果组间对比分析显示肥胖组凸显网络部分区域出现显著的功能连接改变。主要表现为:右侧颞上回与岛叶部分体素功能连接升高(t=7.4,P<0.01),而前扣带回(t=-5.9,P<0.05)、基底节区(t=-9.8,P<0.01)等凸显网络区域出现功能连接降低,此外枕中回(t=-4.4,P<0.05)、右侧顶叶(t=-5.6,P<0.05)、扣带回中部、中央前回与额中回(t=-6.9,P<0.01)等非凸显网络功能连接也出现降低。结论凸显网络异常的功能活动可能反应了食物成瘾性肥胖人群对食物信息的加工控制异常的神经机制。