过表达叉头盒F1对肝癌细胞增殖、周期和凋亡的影响及机制实验研究

目的:探讨过表达叉头盒F1(FOXF1)对肝癌细胞增殖、周期和凋亡的影响,并初步探究其分子机制。方法:选取肝癌细胞(MHCC-97H和Huh7细胞)为实验细胞,分别设立vector组(转染空白载体)和ov-FOXF1组(转染FOXF1过表达载体)。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western bolt检测转染后FOXF1 mRNA及蛋白表达。采用MTT法检测肝癌细胞增殖。采用流式细胞术检测肝癌细胞周期和细胞凋亡。采用Western bolt检测Wnt5a/β-catenin信号通路相关蛋白表达。结果:ov-FOXF1组Huh7和MHCC-97H细胞FOXF1 mRNA和蛋白表达量高于vector组(均P<0.05)。转染后48、72 h,ov-FOXF1组Huh7和MHCC-97H细胞增殖受到抑制(均P<0.05)。与vector组比较,ov-FOXF1组Huh7和MHCC-97H细胞G_(0)/G_(1)期细胞比例升高,S期细胞比例降低(均P<0.05)。ov-FOXF1组G_(2)/M期Huh7细胞比例较vector组降低(P<0.05)。MHCC-97H细胞两组G_(2)/M期细胞比例比较差异无统计学意义(均P>0.05)。ov-FOXF1组Huh7和MHCC-97H细胞凋亡比例高于vector组(均P<0.05)。与vector组比较,ov-FOXF1组FOXF1、active Caspase-3蛋白表达增加,Wnt5a、β-catenin、c-myc、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)蛋白表达降低(均P<0.05)。结论:FOXF1过表达能够抑制肝癌细胞的增殖及周期进展,促进细胞凋亡,其机制可能与调控Wnt5a/β-catenin通路及细胞周期相关蛋白等有关。

FBXW7在食管癌组织中的表达及其对细胞增殖和细胞周期的影响

目的观察FBXW7在食管癌组织中的表达及其对食管癌细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的影响,探究其分子机制。方法应用实时定量PCR和Western blot法检测在西安交通大学第一附属医院普外科收集的40例食管癌组织和40例癌旁正常组织样本中FBXW7的表达水平。利用癌症基因组图谱(the cancer genome altas,TCGA)与基因型-组织表达工程(the genotype-tissue expression project,GTEX)数据库分析FBXW7在食管癌组织和正常食管组织(食管-黏膜和食管-肌层)中的表达情况。TE-1细胞和EC9706细胞分别分为3组:阴性对照组、siRNA-1组和siRNA-2组,分别转染NC-siRNA、FBXW7 siRNA-1和FBXW7 siRNA-2。采用实时定量PCR和Western blot法分别检测食管癌细胞TE-1和EC9706中siRNAs对FBXW7的沉默效率。应用MTT比色法分析转染FBXW7 siRNAs对TE-1和EC9706细胞增殖活力的影响;采用流式细胞仪分析转染FBXW7 siRNAs对TE-1和EC9706细胞周期和细胞凋亡的影响。应用Western blot分析转染FBXW7 siRNAs对TE-1和EC9706细胞中c-Myc和Cyclin D1蛋白表达的影响。结果与癌旁组织相比,FBXW7在食管癌组织中表达显著下调(P<0.01)。TCGA和GTEX数据库分析显示,与癌旁正常组织相比,FBXW7在食管癌组织中显著低表达(P<0.05)。与阴性对照组相比,FBXW7 siRNA-1组和siRNA-2组TE-1和EC9706细胞中FBXW7 mRNA和蛋白表达均显著降低(P<0.01),细胞活力显著增加(P<0.01)。与阴性对照组相比,FBXW7 siRNA-1组和siRNA-2组TE-1和EC9706细胞中G1/G0期细胞比例显著减少(P<0.01),S期与G2/M期细胞比例显著增加(P<0.01);与阴性对照组相比,FBXW7 siRNA-1组和siRNA-2组早期凋亡和晚期凋亡数量显著减少(P<0.05)。与阴性对照组相比,FBXW7 siRNA-1组和siRNA-2组TE-1和EC9706细胞中c-Myc信号通路相关蛋白c-Myc和Cyclin D1表达增加(P<0.01)。结论FBXW7在食管癌组织中低表达,可能通过激活c-Myc信号通路促进食管癌细胞增殖、周期转换,抑制细胞凋亡。

Rab6A通过调控AKT/p38信号通路影响胃癌细胞增殖和凋亡

目的观察Rab6A在胃癌组织中的表达及其对胃癌细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的影响,探讨其可能的分子机制。方法在西安交通大学第一附属医院肿瘤外科收集53例胃癌组织和53例癌旁组织样本,采用实时定量PCR和Western blot分别检测组织中Rab6A在mRNA和蛋白质水平的表达情况。利用癌症基因组图谱(the cancer genome altas,TCGA)与基因型-组织表达工程(the genotype-tissue expression project,GTEX)数据库分析Rab6A在胃癌组织和正常胃组织中的表达水平。胃癌细胞系BGC-823和SGC-7901分别分为3组:阴性对照组、siRNA-1组和siRNA-2组,分别转染NC-siRNA、Rab6A siRNA-1和Rab6A siRNA-2。采用实时定量PCR和Western blot法分别检测Rab6A siRNAs在胃癌细胞系BGC-823和SGC-7901中的沉默效率。MTT法分析转染Rab6A siRNAs对胃癌细胞系BGC-823和SGC-7901细胞增殖活力的影响。流式细胞术分析转染Rab6A siRNAs对BGC-823和SGC-7901细胞周期和细胞凋亡的影响。Western blot检测转染Rab6A siRNAs对BGC-823和SGC-7901细胞中AKT/p38信号通路蛋白(p-AKT,AKT,CDK4,Cyclin D1,p-p38,p38)表达的影响。结果与癌旁组织相比,胃癌组织中Rab6A在mRNA和蛋白质表达均显著上调(P<0.01)。TCGA和GTEX数据库分析显示,与正常组织相比,Rab6A在胃癌组织中高表达(P<0.01)。与阴性对照组相比,在BGC-823和SGC-7901细胞中Rab6A siRNA-1组和siRNA-2组Rab6A mRNA和蛋白质表达均显著降低(P<0.01)。与阴性对照组相比,Rab6A siRNA-1组和siRNA-2组BGC-823和SGC-7901细胞的增殖能力显著下降(P<0.01)。与阴性对照组相比,在BGC-823和SGC-7901细胞中Rab6A siRNA-1组和siRNA-2组G1/G0期细胞比例显著增加(P<0.01),S期和G2/M期细胞比例显著减少(P<0.01)。与阴性对照组相比,在BGC-823和SGC-7901中Rab6A siRNA-1组和siRNA-2组早期凋亡和晚期凋亡显著增加(P<0.01)。与阴性对照组相比,Rab6A siRNA-1组和siRNA-2组AKT/p38信号通路相关蛋白p-AKT、CDK4和Cyclin D1表达显著下降(P<0.01),p-p38表达显著增加(P<0.01)。结论Rab6A在胃癌组织中表达上调,并通过影响AKT/p38信号通路促进胃癌细胞增殖、周期转换,抑制细胞凋亡。