留学生生理学实验教学的探索与实践

生理学实验是生理学和机能实验学的重要组成部分,就如何提高留学生生理学实验教学质量,从实验课前准备、实验课实施和课后小结三个方面进行了初步的探索与实践,希望能为留学生实验教学实践提供参考。

孤啡肽和吗啡对大鼠皮层体感区Ca^(2+)-ATP酶活性的影响

目的 观察脑室注射孤啡肽 (OFQ)和吗啡对大鼠皮层体感区Ca2 + ATP酶活性的影响。方法 检测Wistar大鼠皮层体感区组织匀浆上清液Ca2 + ATP酶活性。观察①脑室注射吗啡对大鼠皮层体感区Ca2 + ATP酶活性的影响 ;②脑室注射OFQ对大鼠皮层体感区Ca2 + ATP酶活性的影响 ;③两侧脑室同时注射吗啡和OFQ对大鼠皮层体感区Ca2 + ATP酶活性的影响。结果 ①脑室注射 2 0 μg 2 0 μl吗啡 6 0min后 ,大鼠皮层体感区Ca2 + ATP酶的活性与生理盐水组相比明显降低 (P <0 .0 1 )。②脑室分别注射不同浓度的孤啡肽 (0 .0 4、0 .4 5、0 .9、1 .8μg 2 0 μl) 6 0min后 ,皮层Ca2 + ATP酶活性随OFQ浓度的增加而降低 ,组间差异显著 (P <0 .0 5 )。③右侧脑室注射 2 0 μg 2 0 μl吗啡 ,同时左侧脑室注射 0 .9μg 2 0 μl孤啡肽 6 0min后 ,可相互拮抗对Ca2 + ATP酶活性的影响。结论 脑室单独注射吗啡或孤啡肽均可使大鼠皮层Ca2 + ATP酶的活性降低 ,而孤啡肽 (0 .9μg 2 0 μl)又可以拮抗吗啡对Ca2 + ATP酶活性的抑制作用 ,说明孤啡肽在中枢通过影响Ca2 + ATP酶活性产生抗阿片作用 ,从而影响痛觉调制。

线栓法建立局灶性脑缺血模型的方法与探讨

目的：探讨成功建立大鼠局灶性脑缺血模型的有效方法及影响因素。方法将大鼠分为250-300 g和350-400 g两个体重组。为观察禁食对造模的影响，250-300 g体重组又分为对照组（n=10）和禁食组（n=10）；为观察栓线直径对造模的影响，350-400 g体重组又分为细栓线组（n=10）和粗栓线组（n=10）。栓线经颈总动脉、颈内动脉进入大脑中动脉的起始部位阻断大脑中动脉的血流。术后通过神经功能缺损评分和氯化三苯基四氮唑（TTC）染色对该模型进行评价。结果在250-300 g体重组，造模成功率高，禁食组死亡率（11.1%）明显低于对照组（62.5%）（P〈0.05）；在350-400 g体重组，死亡率低，粗栓线组造模成功率（80%）明显高于细栓线组（20%）（P〈0.05）。结论术前禁食可降低动物死亡率，根据大鼠体重选择相应直径的栓线可提高造模的成功率。

延髓头端腹外侧部在脑梗死合并心律失常中的作用

目的探讨延髓头端腹外侧部在脑梗死合并心律失常中的作用及可能机制。方法 112只Wistar大鼠随机分为3组:对照组(n=16)、假手术组(n=16)和模型组(n=80)。模型组再随机分为造模后30 min、1 h、2 h、4 h和8 h组,每组16只,观察脑梗死后延髓头端腹外侧部神经元活动的变化。另40只大鼠随机分为5组:对照组(n=8)、生理盐水组(10μL,n=8)、L-谷氨酸组(0.5μmol,10μL,n=8)、谷氨酸非选择性NMDA受体拮抗剂MK-801(4 nmol,10μL)加L-谷氨酸组(n=8)和MK-801加模型组(n=8),以观察谷氨酸在脑梗死诱发心律失常中的作用。心电图用生物信号采集系统采集。脑梗死动物模型制作采用大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO),给药途径为侧脑室注射,以Fos蛋白作为神经元激活的标志物。结果对照组和假手术组大鼠心电图均无明显异常,模型组大鼠心律失常的发生率为78.75%(63/80),明显高于对照组(P<0.01),且在心律失常发生的相应时间点延髓头端腹外侧部Fos蛋白表达明显增加(P<0.01)。侧脑室注射生理盐水组心电图无明显异常,侧脑室注射L-谷氨酸后心律失常发生率为87.5%(7/8),明显高于生理盐水组(P<0.01),心律失常类型类似于模型组,同时延髓头端腹外侧部Fos蛋白表达明显增高(P<0.05)。MK-801预处理后再造模和MK-801预处理后再侧脑室注射L-谷氨酸组,均无心律失常发生,延髓头端腹外侧部Fos蛋白表达无显著性变化(P>0.05)。结论脑梗死合并心律失常的发生与延髓头端腹外侧部活动增强有关,且此作用由谷氨酸激活NMDA受体介导。

孤啡肽对大鼠皮层体感诱发电位和Na^+-K^+ ATP酶活性的影响

目的观察脑室注射孤啡肽和吗啡对大鼠皮层体感诱发电位(SEP)和Na+-K+ATP酶活性的影响,探讨孤啡肽在脑内致痛觉过敏和抗吗啡镇痛作用的可能机制。方法健康Wistar大鼠,用生物信号采集系统经硬膜外引导SEP;用ATP酶测试盒,检测大鼠皮层体感区组织匀浆上清液中Na+-K+ATP酶的活性。结果1)脑室注射0·9μg的孤啡肽后,皮层SEP的P1-N1峰峰值和N1-P2峰峰值波幅明显增加(P<0·01)。脑室分别注射0·04μg、0·45μg、0·9μg、1·8μg的孤啡肽,可剂量依赖性的抑制Na+-K+ATP酶的活性(P<0·01)。2)脑室注射20μg吗啡后,皮层SEP明显被抑制,Na+-K+ATP酶活性显著增加(P<0·01)。3)脑室联合注射孤啡肽(0·9μg)和吗啡(20μg)后,皮层SEP和Na+-K+ATP酶活性均无明显变化。结论孤啡肽在中枢可能通过影响SEP和Na+-K+ATP酶产生痛觉过敏和抗吗啡镇痛作用。

杏仁核在脑梗死合并心律失常中的作用

目的探讨杏仁核在脑梗死合并心律失常中的作用及可能机制。方法为观察脑梗死后杏仁核神经元活动的变化,将48只大鼠随机平均分为假手术组,脑梗死后30 min、1 h、2 h、4 h和8 h组。为观察谷氨酸在脑梗死诱发心律失常中的作用,另取40只大鼠随机平均分为空白对照组、生理盐水组、L-谷氨酸组、MK-801预处理后侧脑室注射L-谷氨酸组和MK-801预处理后再进行中动脉栓塞(MCAO)组。通过大鼠大脑MCAO建立脑梗死模型,用生物信号采集系统采集心电图,用Fos蛋白作为神经元激活标志物。结果假手术组心律失常的发生率为0,脑梗死组心律失常的发生率为78.75%,明显高于假手术组(P<0.01),且在心律失常发生的相应时间点杏仁核Fos蛋白表达明显增加(P<0.01)。空白对照组和生理盐水组心律失常的发生率均为0,L-谷氨酸组心律失常的发生率为87.5%,明显高于空白对照组(P<0.01),且L-谷氨酸组杏仁核Fos蛋白表达明显增高(P<0.05)。MK-801预处理后MCAO组和MK-801预处理后侧脑室注射L-谷氨酸组心律失常的发生率均为0,且杏仁核Fos蛋白表达均无明显变化(P>0.05)。结论脑梗死后杏仁核活动的增强可能参与了脑梗死后心律失常的发生发展,且此作用可能由谷氨酸激活门冬氨酸受体所介导。

ACh对大鼠皮层体感区神经元延迟整流钾电流的抑制作用

利用全细胞膜片钳技术研究乙酰胆碱(acetylcholine,ACh)对大鼠皮层体感区神经元延迟整流钾电流(IK)的调制作用。结果表明:(1)ACh(0．1、1、10、100 μmol/L)对大鼠皮层体感区神经元IK有抑制作用,并具有剂量依赖性关系(P<0．01)。 (2)ACh可使IK激活曲线的斜率变大,并使激活曲线向超极化方向移动。IK激活曲线的半数激活电压(V1/12)和斜率因子(k)分别由给药前的(-41．8±9．7)mV和(30．7±7．2)mV变为给药后的(-122．4±38．6)mV和(42．4±7．0)mV。(3)100 μmol/L的N受体拮抗剂筒箭毒碱(tubocurarine)可减弱ACh对IK的抑制作用,在指令电压+60 mV时tubocurarine+ACh组的IK幅度下降了(16．9± 13．8)％(n=8),与10 μmol/L ACh组引起的(36．5±7．8)％的IK下降幅度相比,有极显著差异(P<0．01)。10 μmol/L的M1受体拮抗剂哌仑西平(pirenzepin)拮抗ACh对IK的抑制作用不明显(n=7,P>0．05);而10 μmol/L的M3受体拮抗剂4-DAMP可部分拮抗ACh对IK的抑制作用,并且4-DAMP+ACh组使IK的电流值下降了(26．8±4．7)％(n=6),与ACh组引起的IK电流下降相比,有显著差异(P<0．05)。(4)蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)阻断剂chelerythrine拮抗ACh对IK的抑制作用,PKC激动剂PDBu可增强ACh对IK的抑制作用(P<0．05)。综上所述,ACh对人鼠皮层体感区神经元IK的抑制作用主要是通过烟碱受体(nAChRs)和M3受体介导,并经过PKC信号途径。

纳洛酮对脑缺血大鼠皮层SEP和Ca^(2+)-ATP酶活性的影响

目的 研究纳洛酮对脑缺血大鼠皮层体感诱发电位 (SEP)和Ca2 + ATP酶活性的影响 ,探讨纳洛酮对急性脑缺血损伤的脑保护作用机制。方法 在大鼠大脑中动脉栓塞动物模型基础上 ,侧脑室注射不同剂量纳洛酮 ,以皮层SEP和Ca2 + ATP酶活性为指标 ,观察纳洛酮对脑缺血的作用。结果 脑缺血后 ,皮层SEP主波消失 ,Ca2 + ATP酶活性显著降低 (P <0 .0 0 1 ) ,纳洛酮可在一定程度上恢复SEP(P <0 .0 1 ) ,并使Ca2 + ATP酶活性升高 (P <0 .0 1 )。

大鼠皮层神经元急性分离改良方法

目的建立一种适用于膜片钳技术的大鼠皮层神经元急性分离改良方法,并对其离子通道电流进行记录。方法采用酶加机械分离法制备12～16d鼠龄的大鼠皮层神经元。其电生理学特性测定用全细胞膜片钳技术。结果分离出的神经元形态正常,有较长的轴突;用膜片钳技术证实,其保存了主要的离子通道活性。结论成功建立了一种简单快速的适用于膜片钳技术的大鼠皮层神经元急性分离改良方法。

吗啡耐受大鼠海马结构M1受体、c-fos和CREB表达改变

目的观察大鼠海马结构在吗啡耐受中的作用。方法 SD大鼠20只随机分为两组:①对照组:背部皮下注射与耐受组等量的生理盐水;②耐受组:背部皮下一日三次逐日递增的注射盐酸吗啡,连续6天后,停止注射,处死全部大鼠,用免疫组化染色方法观察各组海马结构内的M1受体、环磷腺苷反应元件结合蛋白(cAMP response element binding protein,CREB)和c-fos蛋白表达。结果①在光镜下,HE染色显示吗啡耐受组与对照组相比未发现海马结构形态学有异常改变。②耐受组与对照组相比,组织化学染色发现M1受体表达减少,而c-fos和p-CREB的蛋白表达增加。结论海马结构可能参与了吗啡耐受,这可能与海马结构的M1受体表达减少有关,也与转录因子c-fos和p-CREB激活表达有关。

去卵巢大鼠行为改变与海马结构中突触素表达减少的相关性研究

目的通过去卵巢大鼠的模型,观察雌激素缺乏后对学习和记忆的影响以及突触素表达的情况。方法实验选用成年Wistar大鼠33只,随机分为对照组、去卵巢组、补充雌激素组(去卵巢),每组11只,实验周期为4个月,观察指标:血中的雌二醇含量、记忆跳台潜伏期和错误次数以及海马结构中突触素表达情况。结果①血清中雌二醇浓度:对照组为(46.7±25.3)pg/mL;去卵巢组为(0.3±0.3)pg/mL;补充雌激素组为(144.4±78.9)pg/mL,各组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。②跳台记忆潜伏期和错误次数:对照组分别为(148.7±19.6)s、(2.9±1.1)次;去卵巢组为(85.6±16.8)s、(7.9±2.9)次;补充雌激素组为(101.6±18.6)s、(4.6±1.1)次;除了去卵巢组的记忆潜伏期与补充雌激素组比较无显著差异外(P>0.05),其他各组之间差异均有统计学意义(P<0.05)。③海马结构突触素的表达:去卵巢组海马的神经元胞浆内有少许棕黄色的颗粒,呈弱阳性;补充雌激素组与对照组相似,呈强阳性表达。结论雌激素缺乏可以导致大鼠跳台试验的错误次数增加和记忆潜伏期延长,突触素表达减少;补充雌激素有所好转,同时突触素表达增多,推测大鼠雌激素缺乏后的认知功能减退可能与海马结构中突触素表达减少有关。

部分毁损内嗅区皮质区对吗啡戒断大鼠行为学和海马结构CREB表达的影响

目的本探究使用兴奋型神经毒海人藻酸(kainate,KA)部分毁损海马结构信息的主要传入通路内嗅区皮质后,观察吗啡成瘾大鼠戒断时海马结构中CREB蛋白的表达变化及吗啡戒断鼠的行为学的变化。方法实验使用Wistar大鼠,随机均分为4组:①对照组:背部肩胛间皮下注射与实验组等体积的生理盐水;②戒断组:背部肩胛间皮下注射盐酸吗啡;③戒断注生理盐水组:在背部肩胛间皮下注射吗啡,再在内嗅区皮质注射生理盐水;④戒断注KA组:在背部肩胛间皮下注射吗啡,再在内嗅区皮质注射KA。对照组、戒断注生理盐水组和戒断注KA组连续注射6天吗啡,每天按体重增加吗啡量,使之快速成瘾;注射吗啡6天后,不再注射,开始观察戒断症状并在内嗅区皮质注射KA;戒断52h后,处死全部大鼠,用免疫组化染色方法观察各组大鼠海马结构内CREB蛋白的表达。结果①在戒断症状出现的高峰期,单纯戒断组与对照组相比大部分戒断症状的行为学指标都具有阳性意义;戒断注KA组与单纯戒断组或者戒断注射生理盐水组相比较大部分戒断症状的行为学指标下降较明显;戒断注KA组与对照组相比较大部分戒断症状的行为学指标差异不明显;②CREB在对照组、戒断组、戒断注生理盐水组以及戒断注射KA组的表达不同,其中在戒断注射生理盐水组的表达最高,其次为戒断组,在戒断注射KA组表达较低,而在对照组表达最低。结论毁损内嗅区皮质后吗啡成瘾大鼠的戒断症状明显减少,同时海马结构中的CREB表达减少,海马结构可能在大鼠CREB介导的成瘾记忆中有重要作用。

医学生理学双语教学初探

随着中国医学教育与国际接轨的步伐的加快,双语教学已逐步成为衡量一所院校办学水平、师资队伍实力的重要标志。结合生理学课程特点,采用合理的双语教学模式,进行生理学双语教学尝试,是教育改革发展的必然趋势。

项目团队的激励性薪酬体系设计

项目团队是近20年来管理学的热门话题,由于项目团队的一些特点,被广泛的应用于许多大公司。但是大多数人对如何进行项目团队建设的认识甚浅。激励性薪酬的设计是团队建设成功的关键因素之一。本文从企业项目管理的角度出发,结合激励导向的可变薪酬原理,设计出包含基本薪酬、即期现金奖励、长期激励薪酬三大内容的适合于项目团队的激励性薪酬体系。

神经科学研究中绿色荧光蛋白报告基因的应用

随着研究手段的进步,人们对神经学的研究更加深入。绿色荧光蛋白作为一种新型的报告基因,具有荧光性质稳定、对生物体无毒性作用、检测时不需底物的特点,在神经细胞的基因表达、蛋白定位的研究上优于其他报告基因,尤其适合于活体细胞功能与形态相结合的研究。

纳洛酚对脑缺血大鼠皮层体感区Ca^(2+)-ATP酶活性的影响

目的 观察脑室注射纳洛酚对脑缺血大鼠大脑皮层体感区Ca2 + ATP酶活性的影响 ,探讨纳洛酚对急性大鼠脑缺血性损伤的保护机制。方法 建立大鼠大脑中动脉栓塞模型 ,给予生理盐水、药物后检测Wistar大鼠皮层体感区组织匀浆上清液Ca2 + ATP酶的活性。观察正常大鼠脑室注射 10 μl生理盐水与大脑中动脉栓塞后脑室分别注射生理盐水 10 μl,纳洛酚 1μg/ 10 μl、4 μg/ 10 μl、8μg/ 10 μl及纳洛酮 8μg/ 10 μl对Ca2 + ATP酶活性的影响。结果 脑缺血组与生理盐水对照组相比Ca2 + ATP酶活性显著降低 (P <0 .0 1) ,给予纳洛酚与纳洛酮的实验组与缺血组相比 ,Ca2 + ATP酶活性升高 (P <0 .0 1) ,而且 1μg/ 10 μl,4 μg/ 10 μl和 8μg/ 10 μl纳洛酚 3组呈现随剂量增加酶活性也随之提高的量效关系 (P <0 .0 1) ,4 μg/ 10 μl和 8μg/ 10 μl纳洛酚提高酶活性的作用优于纳洛酮 (P <0 .0 1)。 结论 纳洛酚可能通过拮抗阿片受体提高大鼠急性大脑中动脉缺血后皮层体感区Ca2 + ATP酶活性 。

侧脑室注射α-干扰素及白细胞介素-2对大鼠丘脑束旁核痛兴奋神经元放电的影响

目的 从神经元放电的角度进一步研究α-干扰素(IFN-α)及IL-2的中枢镇痛作用。方法 以串脉冲刺激右侧坐骨神经和有齿镊子夹尾作为伤害性刺激,诱发大鼠丘脑束旁核痛兴奋神经元放电,记录在不同大鼠侧脑室注射IFN-α和IL-2对大鼠丘脑束旁核痛兴奋神经元电活动的影响。结果 IFN-α使大鼠丘脑束旁核痛兴奋神经元的放电频率降低,在给药前:PEN诱发放电秒净增值16.33±4.03;注射后6min、12min、18min,分别为7.92±0.64(P<0.01)、5.59±0.47(P<0.01)、7.44±0.59(P<0.01)。注射后20min开始恢复,24min基本恢复至注射前水平。IL-2也可使PEN放电频率降低,给药前,PEN诱发放电频率净增值为(17.16±3.94)Hz,注射后4min、8min、12min、16min 分别为(5.86±0.91)Hz、(2.81±0.96)Hz、(2.67±0.45)Hz、(4.11±0.46)Hz。此外,脑室注射IFN-α和IL-2还能使诱发放电的潜伏期延长,注射前后相比差异显著。结论IFN-α和IL-2均能使PEN的放电频率降低,潜伏期延长。